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| NF-κB/p65特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对p65表达的抑制效应 | |
| 引用本文： | 陈刚,乔玉芳,林旭,姚瑾,林苗,游婷婷,沈晓燕,朱香清,牟伦盼,林丽香. NF-κB/p65特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对p65表达的抑制效应[J]. 中华内分泌代谢杂志, 2007, 23(4): 363-367 |
| 作者姓名： | 陈刚 乔玉芳 林旭 姚瑾 林苗 游婷婷 沈晓燕 朱香清 牟伦盼 林丽香 |
| 作者单位： | 1. 350001,福州,福建医科大学省立临床学院内分泌科 2. 福建医科大学分子医学中心 |
| 基金项目： | 卫生部科学研究基金资助项目（WKJ2005-2-021） |
| 摘 要： | 目的构建NF-κB p65亚基特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体，并验证其对p65亚基的基因沉默效应。方法设计合成三对针对p65 mRNA不同位点的短发夹RNA（shRNA）编码序列，克隆到穿梭载体中，通过体外同源重组将短干扰RNA（siRNA）表达盒转移到腺病毒骨架质粒，构建RNAi腺病毒表达载体；在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法进行病毒滴度测定；腺病毒感染人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞，Western印迹法和免疫细胞化学法验证构建的RNAi腺病毒对p65蛋白表达的抑制效应。结果成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液；RNAi腺病毒感染ECV304细胞后可以高效抑制p65蛋白的表达，且对p65蛋白表达的抑制作用可持续6d以上。结论应用RNAi腺病毒表达载体能有效阻断目的基因的表达。 |
| 关 键 词： | RNA干扰 腺病毒科 基因沉默 NF-κB ECV304细胞 |
| 修稿时间： | 2007-04-30 |
Construction of NF-κB/p65-targeting RNAi combinant adenovirus vector and its suppressive effect on the expression of p65 in ECV304 cells |
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| CHEN Gang,QIAO Yu-fang,LIN Xu,YAO Jin,LIN Miao,YOU Ting-ting,SHEN Xiao-yan,ZHU Xiang-qing,MOU Lun-pan,LIN Li-xiang. Construction of NF-κB/p65-targeting RNAi combinant adenovirus vector and its suppressive effect on the expression of p65 in ECV304 cells[J]. Chinese Journal of Endocrinology and Metabolism, 2007, 23(4): 363-367 | |
| Authors: | CHEN Gang QIAO Yu-fang LIN Xu YAO Jin LIN Miao YOU Ting-ting SHEN Xiao-yan ZHU Xiang-qing MOU Lun-pan LIN Li-xiang |
| Affiliation: | Department of Endocrinology, Fujian Provincial Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou 350001, China |
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