| 牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 王付勇,刘彦仿,苏勤,赵君,张静梅. 牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达[J]. 医学研究生学报, 2004, 17(1): 5-8 |
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| 作者姓名： | 王付勇 刘彦仿 苏勤 赵君 张静梅 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学病理学教研室
2. 第四军医大学病理学教研室;唐都医院病理科,陕西西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (批准号 :3 0 3 70 810 ) |
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| 摘 要： | 目的 :克隆牛蛙核糖核酸酶 (RC RNase)基因 ,构建重组原核表达载体 ,利用大肠杆菌系统表达RC RNase蛋白。 方法 :采用RT PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC RNase基因 ,并进行序列测定 ;将RC RNase基因插入到 6×His表达载体 pRSET A中 ,构建成表达质粒pRSET RC RNase ,用异丙基巯基半乳糖 (IPTG)在大肠杆菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定。 结果 :扩增出一条约 380bp的基因片段 ,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致。经IPTG诱导 ,融合蛋白 (His) 6 RC RNase在大肠杆菌中得到成功表达 ,SDS PAGE上出现相对分子质量约为 16 0 0 0的一条新生蛋白带 ,经蛋白印迹验证为表达蛋白。薄层扫描显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 12 .5 % ,主要以包涵体形式存在。 结论 :正确克隆出RC RNase基因 ,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达 ,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛蛙 核糖核酸酶 大肠杆菌 克隆 表达 RC-RNase基因 免疫印迹法 生物学特性 |
| 文章编号： | 1008-8199(2004)01-0005-04 |
| 修稿时间： | 2003-05-17 |
Construction and expression of prokaryotic expression vectorfor Rana catesbeiana ribonuclease gene |
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| FU Yong ,LIU Yan-fang ,SU Qin ,ZHAO Jun ,ZHANG Jing-mei. Construction and expression of prokaryotic expression vectorfor Rana catesbeiana ribonuclease gene[J]. Bulletin of Medical Postgraduate, 2004, 17(1): 5-8 |
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| Authors: | FU Yong LIU Yan-fang SU Qin ZHAO Jun ZHANG Jing-mei |
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| Affiliation: | FU Yong 1,LIU Yan-fang 1,SU Qin 2,ZHAO Jun 1,ZHANG Jing-mei 1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RC-RNase Escherichis coli Clone Expression |
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