增殖细胞核抗原 siRNA 序列的设计、合成与筛选

目的：设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA)siRNA。方法:总结以往提出的siRNA设计原则的基础上,设计4条PCNAsiRNA,体外转录合成PCNAsiRNA;并作用于3种肿瘤细胞,WST-8法检测细胞增殖活性,筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列;RT-PCR检测细胞PCNAmRNA水平;免疫细胞化学方法检测PCNA蛋白表达水平。结果:4条PCNAsiRNA中,有3条序列（No.2、No.4、No.3）的siRNA能有效抑制3种肿瘤细胞的增殖;其中No.2、No.4作用效果最优,以50nmol/L浓度作用48h,对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62％以上,No.2、No.4PCNAsiRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNAsiRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖,其适宜作用浓度为50nmol/L,适宜作用时间为48h。