| 脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成 |
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| 引用本文： | 张梅,黄保军,胡梅琮,程艳伟,宋蔚,黄大可,李群,胡春松.脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成[J].安徽医科大学学报,2012,47(4):357-361. |
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| 作者姓名： | 张梅 黄保军 胡梅琮 程艳伟 宋蔚 黄大可 李群 胡春松 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学免疫学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原与免疫学实验室,合肥,230032;安徽医科大学免疫学教研室,合肥,230032;安徽医科大学基础医学院综合实验室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,安徽医科大学博士科研基金 |
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| 摘 要： | 目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。
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| 关 键 词： | 巨噬细胞RAW264.7 微管相关蛋白1轻链3 绿色荧光蛋白 |
Lipopolysaccharide induces RAW264.7 macrophage autophagy-related LC3B-GFP fluorescent aggregates formed |
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| Institution: | Zhang Mei,Huang Baojun,Hu Meicong,et al(Dept of Immunology,Laboratory of Pathogen Biology and Immunology, Anhui Medical University,Hefei 230032) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RAW264 7 macrophage microtubule-associated protein 1 light chain 3 protein green fluorescent protein |
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