| 具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定 |
| |
| 作者姓名： | 倪婉琦 任莉 靳昌忠 杨馥榕 申玉敏 王硕 胡彩琴 郝彦玲 刘颖 朱彪 邵一鸣 李丹 王铮 |
| |
| 作者单位： | 1. 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心;2. 浙江大学医学院附属第一医院,传染病诊治国家重点实验室;3. 南开大学药学院;4. 天津国际生物医药联合研究院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（No.92369103）;;北京市自然科学基金项目（No.M21015）; |
| |
| 摘 要： | 目的 从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法 以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC50)<0.1μg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒...
|
| 关 键 词： | 新型冠状病毒 中和抗体 受体结合结构域 |
|
|
