| 携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白诱导人原代肝星状细胞凋亡研究 |
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| 引用本文： | 曾艳丽,张晓菊,尚佳,丁岗强,康谊.携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白诱导人原代肝星状细胞凋亡研究[J].中华肝脏病杂志,2014,22(11). |
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| 作者姓名： | 曾艳丽 张晓菊 尚佳 丁岗强 康谊 |
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| 作者单位： | 450003,郑州大学人民医院(河南省人民医院)感染科 |
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| 摘 要： | 目的 构建携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白,并探讨其诱导肝星状细胞凋亡的作用. 方法 通过噬菌体展示技术得到单链抗体,采用分子克隆的方法将单链抗体ScFv和鱼精蛋白截短体tp基因融合,经转化,筛选,酶切连接测序后诱导表达并纯化蛋白,间接免疫荧光检测人原代肝星状细胞,人正常肝细胞7701对ScFv/tP融合蛋白的内吞效率;凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合活性;Hsp47靶向性siRNA转染人原代肝星状细胞后,利用RT-PCR和Western blot分别检测细胞内Hsp47 mRNA和蛋白的表达情况;ScFv/tP融合蛋白介导Hsp47siRNA转染肝星状细胞后,采用流式细胞仪和Western blot分析其对细胞凋亡的影响,用CCK-8法分析其对细胞增殖的影响.两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 所获得的ScFv/tP融合蛋白能够被人原代肝星状细胞内化进入细胞内,而不能被人正常肝细胞所内化,由ScFv/tP融合蛋白介导的Hsp47-siRNA能够降低人原代肝星状细胞Hsp47 mRNA及蛋白的表达水平,且转染后能够诱导肝星状细胞凋亡的发生. 结论 人源单链抗体融合蛋白是一种良好的载体,能够转移靶向Hsp47特异性siRNA的诱导人原代肝星状细胞凋亡.
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| 关 键 词： | 肝硬化 单链抗体 细胞凋亡 |
Single-chain human anti-EGFR antibody/truncated protamine fusion protein carrying Hsp47 siRNA can induce apoptosis of human hepatic stellate cells |
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| Zeng Yanli,Zhang Xiaoju,Shang Jia,Ding Gangqiang,Kang Yi.Single-chain human anti-EGFR antibody/truncated protamine fusion protein carrying Hsp47 siRNA can induce apoptosis of human hepatic stellate cells[J].Chinese Journal of Hepatology,2014,22(11). |
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| Authors: | Zeng Yanli Zhang Xiaoju Shang Jia Ding Gangqiang Kang Yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Liver cirrhosis Single-chain antibodies Apoptosis |
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