5-氮杂-2′-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达

目的 探索5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）的DNA去甲基化作用对HepG2细胞载脂蛋白A（ApoA）表达的影响，并探讨其作用机制。方法 选取ApoA高表达细胞株HepG2细胞为研究对象。噻唑蓝法测定HepG2经不同浓度（0、10、20、40、80 μmol/L）的5-Aza-CdR处理不同时间（12、24、48、72、96 h）后细胞相对存活率；Western blot检测5-Aza-CdR不同浓度组HepG2细胞ApoA、法尼酯X受体（FXR）的表达水平；逆转录聚合酶链反应检测ApoA、FXR的mRNA水平；亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平。结果 与对照组相比，5-Aza-CR 10、20、40 μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异（P>0.05），而在20 μmol/L 96 h组、40 μmol/L 96 h组、80 μmol/L 24 h组、80 μmol/L 48 h组、80 μmol/L 72 h组以及80 μmol/L 96 h组HepG2细胞存活率存在统计学差异（P<0.05），选取0～40 μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围，0～72 h为合适作用时间。与对照组相比，5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调ApoA蛋白表达，其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）；与对照组相比，5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调ApoA mRNA表达，其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）。随着5-Aza-CdR浓度的递增，FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势，其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3%，而40 μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3%。结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达，从而下调ApoA的表达。