| 胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 季旻珺,刘煜,胡姝颖,张媛媛,朱翔,吴海玮.胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及鉴定[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(20):80-83. |
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| 作者姓名： | 季旻珺 刘煜 胡姝颖 张媛媛 朱翔 吴海玮 |
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| 作者单位： | 1. 南京医科大学病原生物学系,江苏省,南京市,210029
2. 南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏省,南京市,210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目资助(30300167)~~ |
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| 摘 要： | 目的:构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc。方法:实验于2004-09/2005-07在南京医科大学病原生物学系完成。①采用反转录-聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc段(mIgGFc),并引入相应的酶切位点(XhoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRI)。②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒,通过XhoⅠ/BamHⅠ双酶切和连接后,获得pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc重组质粒。③经过XhoⅠ/EcoRI双酶切后,将融合基因mIA-2i-mIgGFc克隆入真核表达载体pEGFP-N2。通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc进行鉴定。结果:①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgGFc段。②通过基因工程操作,获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i和pUCm-T/mIgGFc,并经酶切鉴定克隆成功。③获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc,经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功。④获得重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc和pEGFP-N2/mIA-2i,经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功。结论:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc真核表达载体的构建,为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 腺瘤 胰岛细胞 基因 疫苗 反转录聚合酶链反应 |
| 文章编号： | 1671-5926(2006)20-0080-04 |
| 修稿时间： | 2005年11月28 |
Construction and identification of chimera genetic vaccine by islet cell tumor associated protein 2 and IgG Fc |
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| Ji Min-jun,Liu Yu,Hu Shu-ying,Zhang Yuan-yuan,Zhu Xiang,Wu Hai-wei.Construction and identification of chimera genetic vaccine by islet cell tumor associated protein 2 and IgG Fc[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2006,10(20):80-83. |
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| Authors: | Ji Min-jun Liu Yu Hu Shu-ying Zhang Yuan-yuan Zhu Xiang Wu Hai-wei |
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