柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(highglucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响。方法:利用HG(33mmol/Lglucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72h)后,用胰岛素(5mIU/L)刺激细胞15min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72h),用胰岛素(5mIU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKTinhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24h,再用50mg/L的Nar处理24h,用胰岛素(5mIU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中NO的水平,以及eNOS、p-eNOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50mg/LNar预处理HUVECs24h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-eNOS的水平升高(P<0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-eNOS和NO水平的作用完全取消(P<0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/eNOS信号通路介导的。