基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

针刺干预对单眼视觉剥夺模型大鼠视皮层方位柱“漂移”和异常重组的调节作用及其脑功能机制

探讨针刺干预对大鼠单眼视觉剥夺后视皮层方位柱“漂移”和通道重组的影响，初步阐明其作用机制。     

液质联用技术联合网络药理学探讨白鲜皮治疗湿疹的作用机制＊

目的 采用液质联用技术分析白鲜皮中的主要化学成分；基于网络药理学技术研究白鲜皮治疗皮肤湿疹的活性成分、作用靶点及作用机制。方法 利用液质联用技术（LC-MS）对白鲜皮主要成分进行分析，通过质谱数据结合文献资料，对各主要成分进行快速识别；通过利用SwissADME数据库对白鲜皮潜在活性成分进行预测，筛选主要作用靶点。进行KEGG通路富集分析，最终得到白鲜皮成分-靶点-疾病-通路网络图。采用分子对接技术对主要成分和作用靶点进行验证。结果 从白鲜皮中共分析鉴定了12种成分，进一步筛选得到4种潜在活性成分，可作用于48个关键靶点和14条主要通路。结论 采用LC-MS技术结合网络药理学方法，可以快速分析白鲜皮的潜在活性成分，并初步揭示了成分-靶点-通路之间的关系。通过分子对接技术可以做作用靶点进行验证。     

前列腺摘除术后尿失禁案

患者,男,65岁,为笔者在瑞士仁济中医(Aku Medi Renji TCM)诊疗中心工作期间所诊治的当地患者。初诊日期:2019年1月21日。主诉:前列腺摘除术后尿失禁1月余。现病史:1年前因尿频尿急、尿等待、尿滴沥不尽等前往家庭医生处就诊,诊断为前列腺增生,服用西药(具体不详)后效果不甚显著。     

盛氏伏灸配合针刺联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期临床研究

目的：观察盛氏伏灸配合针刺联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD） 稳定期的临床疗效。方法：选取74 例COPD 稳定期患者，按随机数字表法分为观察组及对照组各37 例，治疗过程中观察组脱落3 例后为34 例。对照组给予常规西药治疗，观察组在对照组基础上给予盛氏伏灸及针刺治疗。比较2 组临床疗效，观察2 组治疗前后肺功能［第1 秒用力呼气容积（FEV1）、第1 秒用力呼气容积与用力肺活量比例（FEV1/FVC）］、COPD 患者自我评估测试问卷（CAT） 评分、中医证候评分、健康相关生活质量表（SF-36） 评分的变化。结果：治疗后，2 组FEV1、FEV1/FVC 指标值与治疗前比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，观察组上述2 项与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，2 组CAT 评分均较治疗前下降，观察组CAT 评分低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。治疗后，2 组中医证候各项目评分与治疗前比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。观察组中医证候评分各项目与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。治疗后，2 组生理机能（PF）、一般健康状态（GH）、精力（VT）、精神健康（MH）、社会功能（SF）、情感职能（RE）、生理职能（RP） 7 项评分与治疗前比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），BP 评分与治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组PF、GH、VT、MH、SF、RE、RP 7 项评分与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；观察组BP 评分与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，观察组总有效率为88.24%，对照组为70.27%，2 组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。本研究共脱落3 例患者，均为观察组，其中1 例出现晕针后情绪紧张，2 例药饼灸后局部皮肤瘙痒难忍，3 例均未完成所有操作而脱落。结论：盛氏伏灸配合针刺联合西药治疗COPD 可缓解临床症状，提高生活质量。