外周血单个核细胞内人类免疫缺陷病毒DNA和RNA定量对病毒转录活性的区分

目的基于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HIV-1总DNA和RNA定量检测结果对感染细胞内病毒的转录活性进行区分。方法采集2017年10月至2018年12月于哈尔滨医科大学附属第四医院感染科就诊的HIV-1感染者血液样本,分离PBMCs细胞,采用PCR荧光探针法对PBMCs细胞内HIV-1总DNA和RNA进行定量检测,并计算两者比值(Ratio)。根据Ratio值筛选出HIV-1转录活跃组样本和相对非活跃组样本,另外选择健康人PBMCs样本作为对照组。对3组样本进行基因转录组表达谱检测以及人口特征差异性检验,并对基因表达谱检测结果进行主成分分析以验证对3组样本病毒转录活性区分的准确性。结果从60例感染HIV-1患者的PBMCs样本中筛选出HIV-1转录活跃组样本(10例)和相对非活跃组样本(11例),另外选择6例健康人PBMCs样本作为对照组。其中转录活跃组样本Ratio值为165.2~738.93,平均为(339.27±189.68);相对非活跃组Ratio值为4.67~42.39,平均为(17.65±11.78)。转录活跃组和相对非活跃组样本间的CD4+T细胞计数(P=0.049)和Ratio值(P<0.001)差异均具有统计学意义;3组样本年龄(P=0.989)和性别(P=0.650)分布差异无统计学意义。对3组样本的PBMCs基因表达谱主成分分析结果显示:对照组与HIV-1感染者(包括转录活跃组和相对非活跃组)间区分明显。转录活跃组和相对非活跃组间有部分样本重合,同时结果也显示当HIV-1感染者的CD4+T淋巴细胞计数与健康人无显著差异时,其细胞内的基因表达与健康人接近。结论基于HIV-1总DNA和RNA定量检测结果及两者间比值可以较好地区分PBMCs内病毒转录活性。HIV-1感染细胞内部病毒的不同转录激活状况可导致其基因表达谱的异质性。     

胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶的研究现状及进展

胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶(thymine DNA glycosylase，TDG)属于单功能尿嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶(uracil DNA glycosidase，UDG)超家族中的成员，在基因组稳定和表观遗传调控中具有双重作用。TDG参与调控DNA甲基化(DNA methylation)和去甲基化(DNA demethylation)。DNA甲基化主要为胞嘧啶(cytosine，C)甲基化，是指胞嘧啶以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl Methionine，SAM)为甲基供体，在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMTs)的作用下，在胞嘧啶第5位碳原子上加上一个甲基，形成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)。5mC广泛存在于哺乳动物基因组中，并在基因组稳定性维持、组织特异性基因沉默、逆转录转座子沉默等诸多生物学过程中发挥重要作用。DNA去甲基化是指5mC还原为C，这个过程也是由DNMTs完成的。DNA去甲基化包括被动去甲基化和主动去甲基化2种途径。被动DNA去甲基化是指在DNA复制过程中，新合成的子链DNA未能维持甲基化状态，导致DNA甲基化的被动稀释(passive dilution)；DNA主动去甲基化过程不涉及DNA复制，是指通过TDG等酶的作用去除5mC和5-羧基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)的氧化产物，即5-甲羟基胞嘧啶(5-formylcytosine，5fC)和5-羧基胞嘧啶(5-carboxylcytosine，5caC)。TDG还通过碱基切除修复途径(base excision repair，BER)切割糖与靶碱之间的N-糖苷键，在纠正错配及损伤的DNA碱基对(base pair，bp)中起重要作用。最近的研究表明TDG还在转录调控、胚胎发育及肿瘤治疗等领域发挥重要作用。本文总结了近年来TDG的研究现状及进展，为进一步的深入研究提供理论支持。      

HPV、TCT 及 DNA 检测对早期宫颈癌诊断的意义

〔摘 要〕 目的：分析人乳头状瘤病毒（HPV）基因分型、液基薄层细胞学检查（TCT）及脱氧核糖核酸（DNA）倍体 定量检测对早期宫颈癌诊断的意义。方法：回顾性分析江门市妇幼保健院 2019 年 1 月至 2020 年 10 月期间收治的疑似宫 颈癌患者 257 例，各患者均接受导流杂交 HPV 基因分型、TCT、DNA 倍体定量检测以及病理检查，以病理检查为金标准 分析结果。结果：三者联合检测的灵敏度、特异度均高于任一方法单独检测，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论： 临床检测早期宫颈癌可考虑采用 HPV 基因分型、TCT、DNA 倍体定量检测三者联合的方式，所得检测效果理想，可提升 筛查准确性。     

外周血单个核细胞EBV-DNA检测和鼻内镜检查在鼻咽癌高危人群早期筛查中的应用

目的 探究外周血单个核细胞EB病毒脱氧核糖核酸(EBV-DNA)检测和鼻内镜检查在鼻咽癌高危人群早期筛查中的应用价值.方法 从2019年10月至2020年9月间进行鼻咽癌血清学筛查的人群中,筛查出鼻咽癌高危和低危人群1454例作为研究对象,对所有研究对象行EBV-DNA检测、鼻内镜检查,以组织病理学结果为鼻咽癌的确诊标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析EBV-DNA、鼻内镜单独和联合检测对早期鼻咽癌的诊断效能.结果 筛查出高危人群452例,低危人群1002例.无论是高危人群还是低危人群,EBV-DNA检测阳性率与鼻内镜检查阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而高危人群的EBV-DNA检测阳性率与鼻内镜检查阳性率均高于低危人群,差异均有统计学意义(P<0.05).高危人群中EBV-DNA检测的灵敏度为81.25％,鼻内镜检查的灵敏度为76.25％,低于两者联合检测的93.75％,差异均有统计学意义(P<0.05);鼻内镜检查的特异度为98.92％,高于联合检测的94.35％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EBV-DNA检测和鼻内镜检查可用于鼻咽癌高危人群的筛查,二者联合检测在鼻咽癌早期诊断中显示出良好的应用价值.     

腮腺肿瘤及瘤旁腺泡p16、p21和DNA定量研究

目的：探讨腮腺肿瘤切除后瘤旁腺泡生物学特性与肿瘤复发及恶变的关系。方法：应用免疫组织化学、流式细胞术对68例腮腺肿瘤及瘤及腺泡p16、p21的表达和DNA定量进行了分析。结果：良恶性肿瘤p16、p21蛋白表达阳性目标值明显于正常腺泡（P＜0．01）,表达区域主要位于腺管样或肌上皮团块区的细胞浆中,部分肿瘤及瘤旁腺泡分别为强阳性和弱性表达,复发性腮腺深叶包膜不完整肿瘤阳性目标值高于原发性腮腺浅叶包膜完整的肿瘤（P＜0．05）。DI、S％和PI指数良恶性肿瘤及瘤旁腺泡均于常腺泡（P＜0．05）。结论：p16多肿瘤抑制基因丢失,p21癌基因突变时,腮腺肿瘤瘤旁腺泡在术后可能处于一种“准新生物”状态,具有较强的增殖能力,它们在肿瘤复发,恶变中具有潜在的趋势。     

E-选择素A561C多态性与慢性乙型肝炎和HBV DNA载量的相关分析

目的 研究中国河北地区汉族人群E-选择素A561C基因多态性与慢性乙型肝炎的相关性，以及对乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量水平的影响。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术，检测91例慢性乙型肝炎患者和85名健康对照者的E-选择素基因多态性，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测血清HBV定量。结果 中国河北地区汉族人群中E-选择素A561C多态性存在AA、AC和CC3种基因型，E-选择素A561C多态性在慢性乙型肝炎组和对照组间的分布差异有显著性（P〈0．05）。AC＋CC基因型患慢性乙型肝炎的风险是AA基因型的2．89倍，C等位基因在两组出现的频率差异也存在显著性（P〈0．05），AC＋CC基因型患者HBVDNA载量水平高于AA基因型患者（P〈0．05），其血清可溶性E-选择素水平显著高于AA型（P〈0．01），采用logistic回归分析发现，AC＋CC基因型与HBVDNA、E-选择素水平相关。结论 中国河北地区汉族人群中存在E-选择素A561C位点单核苷酸多态性，其基因多态性与慢性乙型肝炎的感染具有相关性，C等位基因可能是中国北方地区慢性乙型肝炎发病的易感因素之一，该位点多态性可影响HBV的复制。     

HBV基因分型的检测及其意义

目的　探讨HBV各基因型与疾病之间的关系 ,为评估病情预后和建立有效的治疗方案提供新的思路和证据。方法　对 114例HBV DNA阳性患者进行基因分型 ,研究各基因型患者丙氨酸转氨酶 (ALT)、血清总胆红素(TBIL)、γ球蛋白 (γG)、发病年龄等病情相关指标。结果　发现B型 2 1例 ,C型 72例 ,D型 6例 ,BC型 9例 ,CD型 4例 ,无法分型者 2例。C型ALT、TBIL、γG、发病年龄等均高于B型 (P <0 .0 5 ) ,D型肝炎后肝硬化、肝癌发病率明显高于C型。结论　深圳地区HBV基因型以C型为主 ,B型次之。BC型和D型乙肝较易发展成肝炎后肝硬化、肝癌 ,而D型致肝炎后肝硬化、肝癌可能性更大。C型肝脏损害比B型严重 ,同时B型患者趋于年轻化。B型重型肝炎预后良好 ,C型预后较差     

质粒PF.rep20探针检测我国恶性疟原虫的初步研究

用~(33)P中标记的质粒PF rep20探针以DNA-DNA斑点杂交检测5种疟原虫,仅恶性疟原虫P.f.呈现阳性反应,间日疟原虫、约氏疟原虫、食蟹猴疟原虫及诺氏疟原虫不发生杂交;~(32)P标记的P.f.海南株基因组DNA探针与上述诸疟原虫均可发生杂交。基因诊断海南省和云南省恶性疟患者血样本39份的杂交阳性率,质粒探针和基因探针分别为94.9％和97.4％。检测人工培养的海南株、云南株和安徽株P.f.敏感度,质粒探针均为0.001％原虫血症和10Pg原虫DNA,基因组探针对海南株原虫为0.0001％和1Pg。提示质粒PF rep20探针种的特异性强,敏感性较高,似可用于我国恶性疟原虫检测。     

冠心病患者血清DNA酶Ⅰ与超敏C反应蛋白检测的临床意义

目的 探讨血清DNA酶Ⅰ(DNase Ⅰ)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)质量浓度与冠状动脉病变范围、病变程度和临床风险的关系.方法 选取2006年7月至12月华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科住院患者,根据冠状动脉造影和临床表现,对112例冠心病(CHD)患者和57名正常人的血清DNase Ⅰ与hs-CRP质量浓度进行比较.结果 DNase Ⅰ在稳定型心绞痛组[(152.63±24.16)μg/L]与对照组[(159.62±20.51)μg/L]差异无显著性意义(P＞0.05),在不同冠状动脉病变范围组间、不同冠状动脉病变程度组间、急性冠脉综合征(ACS)与稳定型心绞痛组间的DNase Ⅰ差异均有显著性意义(P＜0.05);hs-CRP在单支病变组[(5.81±3.59)mg/L]和多支病变组[(6.62±5.18)mg/L]差异无显著性意义(P＞0.05),在不同冠状动脉病变程度组间、不同临床分组间hs-CRP差异均有显著性意义(P＜0.01).冠心病患者血清DNase Ⅰ和hs-CRP呈显著正相关(r=0.295,P＜0.01).结论 联合检测DNase Ⅰ与hs-CRP质量浓度有助于判断冠状动脉病变范围、病变程度和临床风险.     

慢性乙型肝炎患者病理舌苔与血清HBV DNA含量、肝脏HBcAg蛋白表达的关系

目的：通过对慢性乙型肝炎（CHB）患者病理舌苔与血清HBV DNA含量、肝脏HBcAg表达的研究,揭示CHB患者病理舌苔与病毒复制的关系,为临床宏观望舌诊病,以外揣内提供理论指导。方法：B超引导下肝脏穿刺,免疫组化法检测CHB患者肝脏HBcAg蛋白表达;荧光定量PCR（FQ-PCR）技术检测CHB患者血清HBV DNA含量。结果：①黄腻苔和白厚苔组CHB患者血清HBV DNA含量最高,与薄白苔组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。薄白苔组HBV DNA病毒复制以少量（〈105copies/ml）为主（P〈0.01）。②黄腻苔和白厚苔组CHB患者肝组织HBcAg阳性细胞率明显高于薄黄苔和薄白苔组（P〈0.01）,其肝细胞HBcAg分布形态以浆膜型和混合型为主（P〈0.05）;薄白苔组以单纯核型为主（P〈0.01）。结论：CHB患者其舌苔厚薄与病毒载量有一定关系,血清HBV DNA含量高者,肝脏HBcAg阳性细胞率亦较高。