63例高级别胶质瘤中IDH1和TERT突变状态的预后价值

目的:探讨异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）和端粒酶逆转录酶（TERT）启动子突变对高级别胶质瘤患者的预后价值。方法:选取2014年9月至2017年6月于我院行手术切除且术后病理提示为高级别胶质瘤的患者63例（WHO Ⅲ级27例，Ⅳ级36例），完善临床资料、随访资料、分子检测结果。应用Sanger测序法检测样本中IDH1和TERT启动子突变情况，根据结果将患者分为不同亚组，通过比较其生存期的差异，分析基因突变与患者预后的关系。结果:63例高级别胶质瘤中，IDH1突变型和野生型患者的中位生存期分别为24和10个月，差异有统计学意义（P＜0.01）；TERT突变型和野生型的中位生存期无明显差异（P＞0.05）。IDH1突变为高级别胶质瘤患者预后良好的因素，TERT突变不能单独提示预后，二者联合分析提示:IDH1突变／TERT突变组预后最好，IDH1野生／TERT突变组预后最差，IDH1突变／TERT野生组预后稍好于IDH1野生／TERT野生组，四组间预后有明显差异。结论:IDH1突变的高级别胶质瘤患者有较好的临床预后，在此基础上，TERT启动子突变检测有助于进一步划分其预后分层。     

PCR—ELISA检测体液脱落细胞端粒酶活性及临床意义

端粒酶是近年来发现的与肿瘤发生发展密切相关的一种逆转录酶,已成为肿瘤研究的热点。目前国内外对实体瘤的端粒酶活性进行了广泛的研究,但对体液脱落细胞中端粒酶的活性的研究尚较少。我们应用ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法检测体液脱落细胞的端粒酶活性,旨在探讨该方法在肿瘤的早期诊     

脂质体介导反义hTR基因转染对腺样囊性癌细胞系SAcc83的影响

目的 检测SAcc83细胞系端粒酶活性并观察人端粒酶模板hTR封闭后细胞生长行为的改变及与凋亡的关系。方法TRAP-PCR-ELISA法检测SAcc83细胞系端粒酶活性,脂质体介导真核表达载体PBBS212-ahTR转染SAcc83,PCNA免疫组化染色以证实其增殖活性改变,TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果转染反义hTR后SAcc83细胞增殖能力明显下降,群体倍增时间延长,转染细胞约30天后死亡。各项凋亡检测均证明细胞凋亡的存在。结论hTR反义基因通过封闭端粒酶模板RNA抑制了端粒酶活性,并可能通过某种途径激活细胞的凋亡程序,这为以端粒酶为靶子治疗恶性肿瘤提供了方向。     

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的：观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法：脂质体介导真核表达载体PBBS212－hTR转染Tca8113细胞系，运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡，并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化，结果：转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓，群体倍增时间较未转染和转染空质粒组明显延长，流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降，有亚二倍体凋亡峰出现，转染后细胞p21基因表达水平显著增高，裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱，结论：反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长，同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡，端粒酶可能是肿瘤基因治疗的理想靶点。     

端粒酶催化亚单位在涎腺腺样囊性癌中表达的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(即端粒酶逆转录酶，hTRT)在涎腺腺样囊性癌中表达及意义。方法 选用32例腺样囊性癌标本，管状型9例，筛孔型17例，实体型6例，癌旁正常腺体作为对照组。采用原位杂交技术栓测hTRT的表达，并观察hTRT分布与患者年龄、肿瘤大小和组织学分型间关系。结果 32例腺样囊性癌hTRT阳性表达率为87．5％。结论 hTRT在腺样囊性癌中高表达，其在不同的组织学分型等组别间无差异。     

PTEN基因联合多西环素抑制黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的研究

目的探讨外源性PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的影响。方法用脂质体将野生型PTEN基因导入黏液表皮样癌细胞系,再用不同质量浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,用端粒酶重复扩增法-酶联免疫吸附（TRAP-ELISA）测定细胞端粒酶活性。结果与对照细胞比较,野生型PTEN基因明显增加癌细胞对多西环素的敏感性,增敏比为1.65～4.75倍。PTEN基因转染或多西环素诱导癌细胞端粒酶活性明显下降（P＜0.05）,二者联合应用对癌细胞端粒酶活性抑制更为显著（P＜0.01）。结论PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性具有显著的协同抑制效应。     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四联体形成对Tca8113细胞端粒酶及细胞周期的影响

目的：探讨阿霉素影响端粒酶活性、端粒酶mRNA表达、细胞周期及周期蛋白表达的分子作用机制。方法：采用端粒重复序列扩增法（TRAP）、改良TRAP—G4法和RT—PCR法检测Tca8113细胞端粒酶活性变化、端粒酶hTERT和TP1mRNA水平；流式细胞仪分析细胞周期；采用Western印迹法测定CyclinB1和CyclinA表达水平。采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：所有实验浓度阿霉素均可降低Tca8113细胞端粒酶活性．当端粒酶作用底物变为5＇-（GGGATr），GGGTT-3’时，端粒延伸反应完全受到抑制；5μg/ml阿霉素作用24h后，hTERT和TP1mRNA表达降低，CyclinB1表达明显增强，G2／M期细胞百分率显著下降。结论：阿霉素抑制端粒酶活性、降低端粒酶表达、影响细胞周期及CyclinB1表达的作用机制与其诱导鸟嘌呤-四联体形成有关。     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶及端粒结合蛋白的影响

目的 探讨端粒酶和端粒结合蛋白（TRF）在细胞凋亡过程中的作用机制。方法 甲基噻唑四唑法（MTT）检测阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用。通过姬姆萨染色和流式细胞仪观察和检测5mg／L阿霉素诱导凋亡情况；利用酶联免疫吸附实验分析端粒酶活性；采用免疫组化和免疫荧光标记法观察和检测TRF表达及其水平。结果 5mg／L阿霉素处理Tca8113细胞5d和7d后，出现明显凋亡；端粒酶活性降低呈时间依赖性；TRF在细胞核内表达，其表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡可降低端粒酶活性，但不改变TRF表达水平。     

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的：研究中草药岩黄连脱氢卡维丁（Tetradehydroscoulerine，YHL－1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用，及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响，同时以TRAP—ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况，并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果：YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖，且随时间延长和药物浓度的增高，抑制作用增强。72h时，0．200、0．100、0．050、0．025 g／LYHL-1组细胞增殖抑制率分别为（64．1±1．5）％、（47．3±3．3）％、（35．6±5．0）％、（31．8±5．87）％。72 h时，0．100、0．050 g／L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组（P〈0．05）。结论：岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖，并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达，这可能是其抗舌癌的机制之一。