骨髓间充质干细胞移植促进大鼠下颌骨牵张成骨的实验研究

目的:探讨大鼠下颌骨牵张间隙内移植自体骨髓间充质干细胞,促进骨痂形成的可行性。方法:选用54只雄性SD大鼠,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞(MSCs)。所有大鼠行右侧下颌骨牵张;并于术后随机分为试验和对照2组。牵张结束时,实验组牵张间隙内注射自体MSCs;而对照组只注射等量生理盐水。分别于固定期第2、4、8周分3批处死大鼠,进行放射学、组织学观察,并对骨组织形态计量学参数进行统计学分析(t检验)。结果:放射学和组织学观察表明,2组牵张间隙内均形成了骨痂组织,但实验组新生骨组织显著多于对照组。计量学分析也显示,各时间点实验组新生骨量(NBV1和NBV2)和新生骨小梁宽度(TNT)均显著高于对照组(P<0.01)。结论:牵张间隙内行自体骨髓MSCs移植,可有效促进新骨形成,缩短固定期;该方法对众多的颅颌面外科畸形的矫治极具价值。     

大鼠骨髓MSCs体外分离培养及多向分化的实验研究

目的：建立骨髓MSCs体外分离培养体系，并进行多向分化诱导，以证实其多向分化潜能，为MSCs进一步的临床应用研究提供实验依据。方法：用密度梯度离心法分离大鼠骨髓MSCs，并对其形态学特征进行观察。用诱导剂对MSCs向成骨细胞、神经元样细胞和成肌细胞进行诱导分化，并进行形态学观察和免疫细胞化学检测。结果：用密度梯度离心法成功分离获得了高纯度的骨髓MSCs，细胞增殖活性强。经骨向诱导后，ALP和矿化结节染色阳性；免疫细胞化学染色提示神经向诱导神经元特异性标志蛋白NSE和NF200，成肌细胞标志蛋白Deamin和Connexin-43阳性表达。结论：采用密度梯度离心法成功建立了大鼠骨髓MSCs体外分离和培养体系；并能够向成骨细胞、神经元样细胞和成肌细胞分化。     

pH-时间双依赖型载药复合物的制备及其释药行为

目的 制备一种新型ZSM-5微孔分子筛基载药复合物,并考察其体外释药行为。方法 以ZSM-5微孔分子筛为载体,采用浸渍离心法将小分子抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)载入分子筛中,制备5-FU@ZSM-5初级药物组装体,再以提拉法于其表面利用天然有机高分子海藻酸钠(alginate,ALG)钙化覆膜,制备5-FU@ZSM-5@CaALG载药复合物。采用紫外分光光度法考察其载药率;利用X射线衍射、固体紫外-可见漫反射光谱、氮气等温吸脱附、扫描电镜、傅里叶变换红外光谱等手段对其结构和理化性质进行表征;通过体外释放度试验考察其释药性能。结果 紫外定量分析结果表明：载药复合物的载药率为11.7%。表征结果表明：小分子药物5-FU进入ZSM-5孔道,载药后未破坏ZSM-5的MFI拓扑结构。体外“时间-溶出介质变换”释放试验表明：与5-FU@ZSM-5组装体相比,5-FU@ZSM-5@CaALG载药复合物呈现出显著的pH-时间双依赖行为,其在人工胃液中2 h内累积释放率<10%,即>90%的药量能进入人工肠液,在人工胃肠液中48 h内累积释放率为85.2%。结论 微孔ZSM-5分子筛可以作为5-FU优良的载体材料,配合CaALG可同时实现肠道定位给药和长效作用。     

中国富血小板血浆临床制备方法的研究进展

自体富血小板血浆(PRP)是一种通过离心的方法从自体血中提取出来的血小板浓缩物。近20年来,已经被广泛应用于多种学科,如骨科、口腔颌面外科、整形美容科等。然而,至今,PRP的临床制作方法还没有统一标准,不同的制作方法导致PRP的成分以及临床疗效不同,给临床医务工作者应用PRP造成了诸多困扰。通过检索和分析中国已发表有关PRP制备的文献(中文和英文)发现,国内PRP临床制备方法差异性较大,包括采血量、离心设备、离心次数、离心力、离心时间和PRP制备量等。PRP中血小板富集度和回收率,白细胞浓度等指标也不稳定,亟需更高质量的研究或指南来规范和指导临床PRP的制备。     

密度梯度离心法优选精液22周期宫腔内人工授精的临床分析

目的 探讨密度梯度离心法优选精液行IUI的临床疗效.方法 采用密度梯度离心法制备精液行IUI 22个周期,并对制备前后的精液进行常规分析、改良巴氏染色、混合抗球蛋白反应实验.结果 洗涤后的精子,其密度、活力、精子正常形态比率明显升高,精子畸形指数及精子包被抗体阳性率明显下降.结论 密度梯度离心法优选精液行IUI可增加受孕机率.     

颌面血管瘤局部注射用平阳霉素脂质体的制备和优化

目的制备平阳霉素脂质体,建立包封率测定方法,考察处方影响因素,优化处方。方法采用硫酸铵梯度法制备平阳霉素脂质体;以Sephadex G-50微柱离心法分离脂质体和游离药物,应用HPLC法测定药物含量,计算包封率;通过单因素考察优化硫酸铵梯度法的处方工艺,考察不同处方因素对包封率的影响。结果 Sephadex G-50微柱可完全吸附平阳霉素游离药物,空白脂质体回收率为98.3%~101.2%;平阳霉素浓度在5~200μg·m L-1内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),日内和日间精密度(RSD)均<2%,回收率为98.3%~100.1%。通过单因素考察优化平阳霉素脂质体的处方为:磷脂100 mg;胆固醇20 mg;平阳霉素15 mg。优化工艺为采用浓度为250 mmol·L-1硫酸铵溶液制备空白脂质体,加入平阳霉素溶液后在40℃水浴中载药40 min。结论硫酸铵梯度法适用于制备平阳霉素脂质体,微柱离心法测定包封率准确可靠,处方工艺优化后的平阳霉素脂质体的包封率可以达到63.7%。     

密度梯度离心后精子悬液中弹性硬蛋白酶浓度和精子DNA完整性的测定

目的检测体外授精过程中精液和经密度梯度离心后精子悬液中弹性硬蛋白酶(PMN-Elastase)的浓度与精子DNA的完整性,探讨密度梯度离心对精浆中PMN-Elastase的作用和精子DNA的损伤情况。方法选择我中心64例进入体外受精周期患者,其中根据女方取卵手术当天男方精液检测PMN—Elastase不同浓度将患者分为A组(15例):含量1000ng/ml(显性感染);B组(20例):含量290-1000ng/ml(隐性感染);C组(20):含量290ng/ml(正常水平),分析和比较处理前后三组精子悬液中PMN-Elastase的浓度和DNA完整率。结果三组处理后的精子悬液中A组PMN-Elastase前后浓度没有明显区别(P0.05),B组和C组浓度明显下降(P0.05);三组处理后的DNA完整率均明显提高(P0.05),经过长时间孵育均明显降低(P0.05)。结论高浓度PMN-Elastase的精液经密度梯度离心后的精子悬液中PMN-Elastase浓度并不增加,精子活力和DNA完整率增加,可能不影响受精结局。     

MSCs 2种分离培养方法及其培养液中的 VEGF、SDF-1α浓度比较

目的：通过2种分离培养方法所得骨髓间充质干细胞（MSCs）的生长特征和微环境中细胞因子的比较,提供一种可以快速、安全、高效地为临床和实验提供大量优质MSCs的方法。方法提取C57BL／c小鼠的骨髓,分别作密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养分离法分离培养MSCs ,通过流式细胞仪检测细胞表面CD29＋、CD31－、CD34－、CD45－表达水平,并比较各自所得细胞的生长曲线;ELISA检测培养液中的血管内皮生长因子（VEGF）、SDF‐1α浓度并比较二者的差异。结果与密度梯度离心法比较,全骨髓贴壁分离法所得原代细胞有较快的生长速度,较短的生长周期;培养液中VEGF和SDF‐1α浓度也稍高于密度梯度离心法。结论全骨髓贴壁培养法可以快速、方便、有效地为临床和实验提供大量MSCs ,所得细胞的培养环境优于密度梯度离心法,减少了对细胞功能的损害。     

重复离心血液标本对甲状腺激素检测结果的影响

目的：探讨重复离心血液标本对甲状腺激素检测结果的影响。方法对来自我院根据临床症状和体征无甲状腺疾病的43例职工的血液标本分别进行离心1次和重复离心,用德国罗氏Cobas e 411全自动电化学发光仪进行甲状腺激素检测,并对检测结果进行对比分析。结果43例标本甲状腺激素检测结果重复离心前后的测定结果差异无统计学意义（P>0.05）。结论重复离心后的血液标本用德国罗氏Cobas e 411全自动电化学发光仪进行检测,对甲状腺激素检测结果无影响。     

密度梯度离心联合上游法的精液处理在供精体外受精胚胎移植中的应用

目的:观察供精体外受精-胚胎移植术(D-IVF)中采用密度梯度离心法联合上游法处理精液后的胚胎情况。方法:回顾本院2013年1月-2014年7月D-IVF 135个周期,观察冷冻精液复苏后经采用密度梯度离心法联合上游法处理后精子总活动率、前向运动精子活动率等精液情况,以及受精以后的受精率、卵裂率、临床妊娠率,对照组为同期46个因丈夫梗阻性无精行ICSI的周期。结果:处理后精子总活动率、前向运动精子活动率均大大提高,但是精子密度却大大下降,处理前后比较差异均有统计学意义(P0.05);受精以后的实验室资料和对照组比较,各项参数差异无统计学意义(P0.05)。结论:密度梯度离心法联合上游法的精液处理方法在D-IVF中是一种稳定可行的方法。