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1.
结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞转分化影响的研究   总被引:20,自引:12,他引:8  
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在人类肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法 将体外培养的人近曲小管上皮细胞(HKC)分为3组:(1)对照组;(2)小剂量CTGF组:培养液中加入重组人CTGF(rhCTGF),终浓度为2.5ng/ml;(3)大剂量CTGF组:rhCTGF终浓度为5.0ng/ml。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HKCα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)mRNA水平的变化。间接免疫荧光方法检测HKC α-SMA的表达。流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率。ELISA方法测定培养液上清中FN的浓度。结果 不同浓度rhCTGF作用于HKC 24h后,α-SMA和FN mRNA水平显著升高(P<0.01)。刺激48h后,胞浆α-SMA蛋白表达明显增强,流式细胞仪测得3组细胞α-SMA阳性百分率依次为:2.4%、38.9%、65.5%(P<0.01);ELISA结果显示,rhCTGF能促进HKC分泌FN,且呈剂量依赖性(P<0.01)。结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并促进其合成细胞外基质(ECM)。  相似文献
2.
缬沙坦抑制人类肾小管上皮细胞转分化的初步研究   总被引:19,自引:0,他引:19  
目的:探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂缬沙坦(valsartan,Val)在人类肾小管上皮细胞系(HKC)转分化中的作用。方法将培养的HKC细胞分为(1)无血清培养培养对照组;(2)阳性对照组(MCP-1+AAI组):培养液中加入马兜铃酸-I(AAI)和单核细胞趋化蛋白-1)MCP-1):(3)Val组:培养液中加入Val;(4)MCP-1+AAI+Val组。应用间接酶标免疫组织化学方法(IEI)检  相似文献
3.
BACKGROUND:Glomerular cellular crescents consist of epithelial cells and macrophages, which can undergo an irreversible process of fibrous organization. However, the origin of the fibroblast-type cells that mediate this fibrous organization is unclear. METHODS: This study examined glomerular epithelial- myofibroblast transdifferentiation (GEMT) in the formation and evolution of glomerular crescents in two distinct rat models of glomerulonephritis: 5/6 nephrectomy and antiglomerular basement membrane (GBM) disease. RESULTS: Early in the course of both disease models, and prior to crescent formation, immunohistochemistry staining and in-situ hybridization demonstrated de novo expression of alpha-smooth-muscle actin (alpha-SMA), a marker of smooth muscle cells and myofibroblasts, by glomerular parietal epithelial cells (GPEC). The expression of alpha-SMA by GPEC was accompanied by a loss of E-cadherin staining, a marker of epithelial cells. At this early stage of GEMT, ultrastructural studies identified the presence of characteristic actin microfilaments and dense bodies within GPEC which retained a normal epithelial morphology with apical-basal polarity and microvilli. A late stage of transdifferentiation was seen in fibrocellular crescents. In this case, GPEC attached to intact segments of the capsular basement membrane contained large bundles of actin microfilaments throughout the cell, and this was accompanied by a loss of polarity, microvilli, and tight junctions. There was a significant correlation between the presence of alpha-SMA(+) GPEC and glomerular crescent formation. Cellular crescents contained small numbers of alpha-SMA(+) myofibroblasts. These cells become the dominant population in fibrocellular crescents, which was associated with marked local proliferation. Relatively few alpha-SMA(+) myofibroblasts remained in fibrotic/organizing crescents. Most cells within cellular and fibrocellular crescents expressed transforming growth factor-beta (TGF-beta) and basic fibroblast growth factor (FGF-2), suggesting that these growth factors may regulate this GEMT process during the evolution of glomerular crescents. CONCLUSIONS: This study provides the first phenotypic and morphological evidence that glomerular epithelial-myofibroblast transdifferentiation participates in the formation and evolution of glomerular crescents.  相似文献
4.
目的探讨尿蛋白对肾小管损伤的途径及加重肾脏病变的相关机制.方法用硫酸铵沉淀法提取肾小球微小病变患者尿液中的总蛋白成分.体外培养人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞.用3H-TdR掺入法测定细胞增殖水平,Western blot方法检测细胞合成单核细胞趋化因子(MCP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,RT-PCR检测细胞TGF-β mRNA表达,间接竞争ELISA检测细胞上清的纤连蛋白(FN)水平.结果(1)提取的尿蛋白主要成分为白蛋白、转铁蛋白和IgG,分别是84.5%、8.0%和1.2%.(2)0.2~10 mg/ml浓度的尿蛋白能刺激HK-2细胞增殖,为对照组的3.33~8.59倍(P<0.01~0.001).(3)在0.5~5 mg/ml浓度的尿蛋白作用下,HK-2细胞分泌FN也明显高于对照组(P<0.001),5 mg/ml时的作用最强,为对照组的(2.908±0.544)倍.(4)尿蛋白还诱导HK-2细胞合成MCP-1、α-SMA蛋白及上调表达TGF-β mRNA,当浓度为5~10 mg/ml时其作用最强.(5)TGF-β1中和抗体在浓度为1~2 μg/ml时可部分阻断尿蛋白(5 mg/m1)对HK-2细胞FN分泌和MCP-1蛋白合成的刺激作用.结论人类微小病变来源的尿蛋白可刺激人近端肾小管上皮细胞增殖、分泌细胞外基质蛋白、合成炎症趋化因子,诱导肾小管细胞发生以α-SMA为标志物的表型转化.这一效应部分通过TGF-β1的介导作用.这可能在蛋白尿诱导的肾小管间质损伤和肾脏病进展中起重要作用.  相似文献
5.
成人胰腺干细胞转分化为胰岛细胞过程中的形态学观察   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的:观察成人胰腺干细胞转化化为胰岛过程中的形态学变化,以便更深入了解有关机制。方法:人胰腺组织经胶原酶消化后,用梯度离心法将胰腺外分泌细胞和胰岛分离,混于外分泌组织中的导管上皮细胞即具有转分化潜能的干细胞。在体外经CMRL1066及不含血清的DMEM/F12加多种营养因子的培养液中培养27d,在培养的不同时间点取细胞作PDX-1、CK-19等单抗的免疫组化染色。光镜和电镜观察不同时间点的形态学变化。结论:上述方法可获得大量以往在胰岛分离时丢弃的胰腺导管上皮细胞。经体外一定条件的培养后,其形态学变化过程为:导管上皮细胞迅速分裂增殖转变为有分化能力的干细胞继而转分化为胰岛细胞。结论:成人胰腺的导管上皮具有干细胞潜能,并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛。用此方法获得大量的胰岛可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新的途径。  相似文献
6.
Wilms瘤1基因在肾小管上皮细胞转分化中的表达及作用   总被引:11,自引:0,他引:11       下载免费PDF全文
目的 探讨Wilms 肿瘤1基因(WT1)在肾小管上皮细胞(TEC)向肌成纤维细胞转分化中的可能作用&#65377;方法 将体外原代培养TEC分别置含IL-1α(10 ng/ml)&#65380; IL-1α+抗WT1中和抗体(10 μg/ml)的DMEM/F12培养基中培养, 观察TEC的形态变化及免疫学特征&#65377;采用RT-PCR检测各组TEC中WT1及α-SMA的表达&#65377;结果 经IL-1α掺入培养5 d后,体外培养的TEC形态特征趋于成纤维细胞化,细胞拉长&#65380;梭形变,失去原有的呈铺路石样的生长方式&#65377;电镜下细胞极性丧失,表面微绒毛消失&#65377;正常情况下,成年TEC不表达WT1&#65377;经IL-1α掺入培养1 d后,TEC重新表达WT1,同时伴有α-SMA的表达;3 d后WT1表达消失,呈一过性特征,而α-SMA的表达则随时间的延长而逐渐增强&#65377;在培养中掺入抗WT1抗体以中和WTl基因产物后,尽管仍给予IL-1α刺激,TEC大都保持原有特征不变,α-SMA及WT1 mRNA仅呈微弱表达&#65377;结论 高浓度IL-1α可导致TEC向肌成纤维细胞的转分化&#65377;在TEC的转分化过程中,WT1基因的重新&#65380;一过性表达可能起着重要作用&#65377;成年TEC重新获得WT1表达,可能是其发生转分化的内在启动机制&#65377;体外中和WT1的基因产物可明显抑制TEC的转分化进程,并可能籍此影响肾脏的纤维化发生&#65377;  相似文献
7.
8.
骨成形蛋白7对人肾小管上皮细胞增殖和转分化的影响   总被引:8,自引:1,他引:7  
目的观察骨成形蛋白7(BMP-7)对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响,以探讨其延缓小管间质纤维化病变的作用及其可能机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1 50ng/mlBMP-7组、TGF-β1 100ng/mlBMP-7组。应用MTT比色法测定BMP-7对人肾小管上皮细胞增殖的作用;间接免疫荧光法测定人肾小管上皮细胞α-SMA、角蛋白、波形蛋白的表达;流式细胞仪检测表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分率;RT-PCR检测细胞中α-SMAmRNA的表达。结果与空白对照组相比,不同浓度的BMP-7处理HK-2细胞24、48h后,HK-2细胞均明显增殖(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,经TGF-β1刺激后,角蛋白表达减弱,α-SMA和波形蛋白表达增强;加入50ng/mlBMP-7处理24、48h后,细胞中α-SMA和波形蛋白表达减弱。流式细胞仪检测发现,加入50ng/mlBMP-7处理24、48h后,表达α-SMA的HK-2细胞阳性率逐渐下降,与TGF-β1处理组相比差异有显著性意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,空白对照组无α-SMAmRNA表达,5ng/mlTGF-β1组与空白对照组相比,α-SMAmRNA表达明显上调(P<0.05),而TGF-β1 50ng/mlBMP-7组、TGF-β1 100ng/mlBMP-7组与TGF-β1组相比,α-SMAmRNA表达有下降趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论TGF-β1促进肾小管上皮细  相似文献
9.
成人胰腺干细胞转分化为胰岛的研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
Song Z  Gu K 《中华外科杂志》2002,40(11):807-810,W001
目的:通过对成人胰腺干细胞转分化为胰岛过程的研究以便更深入了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法:成人胰腺组织经胶原酶消化后,用密度梯度离心法将胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛分离、纯化,导管上皮细胞即具有转分化潜能的干细胞,在体外先后以CMRL1066和无血清DMEM/F12培养液共培养27d,在培养的不同时间点取样本于光镜和电镜下观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX-1,CK-19蛋白等单抗的免疫组化染色,并测定培养液中的淀粉酶和胰岛素含量。结果:上述方法可获得大量以往在胰岛分离时丢弃的胰腺导管上皮细胞。经体外一定条件的培养后,第1天即可见PDX-1,CK-19阳性细胞,胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后,平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论:成人胰腺的导管上皮具有干细胞潜能并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛,用此方法获得大量的胰岛可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新的途径。  相似文献
10.
The hallmark of failing renal transplants is tubular atrophy and interstitial fibrosis (TA/IF). Injury to tubular epithelial cells (TEC) could contribute to fibrogenesis via epithelial-mesenchymal transition (EMT). We examined the features of EMT in renal transplants that developed TA/IF. Biopsies from 10 allograft kidneys with impaired function and TA/IF and 10 biopsies from transplants with stable function were compared to their implantation biopsies. Relative to implantation biopsies, TEC in TA/IF kidneys showed loss of epithelial markers (E-cadherin, cytokeratin) with altered distribution. Some TEC also showed new cytoplasmic expression of mesenchymal markers vimentin, S100A4, and alpha smooth muscle actin (alpha-SMA) and collagen synthesis marker heat shock protein (HSP-47), both in deteriorating and atrophic tubules. Double immunostaining showed coexpression of cytokeratin and vimentin, S100A4 and HSP-47, indicating intermediate stages of EMT in TA/IF. These changes were absent or much less in transplants with stable function. EMT features in the TA/IF group correlated with serum creatinine (vimentin, S100A4, HSP-47), history of T-cell-mediated rejection (cytokeratin, S100A4) and proteinuria (cytokeratin). These findings support a model in which the TEC damage induces loss of epithelial features and expression of fibroblast features, as a common pathway of deterioration by either immunologic or nonimmunologic processes.  相似文献
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