弱阳性HBsAg的ELISA假阴性原因分析

ＥＬＩＳＡ检测肝炎病毒是目前最常见方法之一。但影响因素也较多 ,特别是低浓度样本易导致假阴性。本文通过加样时间、试剂平衡时间和溶血程度方面进行实验 ,以进一步探讨低浓度ＨＢｓＡｇ的干扰因素。1　试剂上海科华生产的ＨＢｓＡｇ试剂盒 ,卫生部临检中心提供的低值ＨＢｓＡｇ质控品。2　方法和结果方法 1是用 1ｎｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ作样本 ,分别在 2 5℃加入反应板后放置 0ｍｉｎ、15ｍｉｎ、30ｍｉｎ、45ｍｉｎ和 6 0ｍｉｎ ,后按说明书操作。结果Ａ值分别为 0 .132、0 .148、0 .16 2、0 .188、0 .191,立即加样与 30ｍｉｎ以上比较差…     

两种方法对比检测乙型肝炎病毒血清标志物

目的 研究乙型肝炎(下称乙肝)病毒感染者血清免疫标志物,利用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测其含量结果与酶联免疫吸附试验(ELISA)法的符合程度,灵敏度及其特异性作比较分析,并了解TRFIA法测定乙肝两对半的准确性,灵敏度及其临床应用价值.方法 分别用TRFIA法和ELISA法测定乙肝病毒感染者血清标本乙肝两对半(HBV-M)结果及含量.结果 分别用TRFIA法和ELISA法对乙型肝炎患者血清作乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测TRFIA法灵敏度高于ELISA法,360例乙肝患者血清中有10例标本ELISA法检测结果阴性,而用TRFIA法可以检测到.另外,对ELISA法检测HBsAg弱阳性的标本,TRFIA法检测结果为阳性,且HBsAg的浓度处在一个较低的范围(0.5～10 ng/ml),两法符合率为97%;对抗乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)的检测,ELISA法有20例阳性,而用TRFIA法检测有28例阳性,两法符合率为98%;对乙肝病毒e抗原(HBeAg)的检测,ELISA法检测31例阴性,而用TRFIA法检测为阳性,两法符合率为91%;对抗乙肝病毒e抗体(抗-Hbe)的检测有44例ELISA法结果阴性,而用TRFIA法检测结果为阳性,两法符合率为88%;对抗乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)的检测有52例ELISA法检测结果阴性的患者,而用TRFIA法检测结果为阳性,两法符合为86%.结论 TRFIA法灵敏度明显高于ELISA法,对于一些弱阳性标本ELISA法检测不到时,TRFIA法仍可以检出.TR-FIA法定量检测乙肝两对半,灵敏度高,特异性强,能及时敏感反映病毒在体内的感染状况.     

恶性浆膜腔积液脱落细胞中P21 ras蛋白表达状况及其意义

目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值.方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞,取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组.对余下脱落细胞作"标准化"处理,包括去除红细胞、多聚甲醛固定、调整细胞浓度、制备细胞涂片,然后进行P21 ras蛋白免疫化学染色(SP法).结果:共108例浆膜腔积液,恶性53例,良性55例.39例恶性积液P21 fas蛋白免疫化学染色阳性(73.6%),且多为强阳性或阳性;12例良性积液P21 ras蛋白染色阳性(21.8%),且多为弱阳性或阳性,两组间阳性率(χ2=29.02,P＜0.001)及阳性强度(Uc=6.786,P＜0.001)的差异均有显著性统计学意义.P21 ras蛋白免疫化学染色诊断恶性积液的敏感度为73.6%,特异度为78.2%,诊断符合率达75.9%.结论:浆膜腔积液中脱落细胞P21 ras蛋白免疫化学染色在肿瘤细胞多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值.     

血清β-羟丁酸检测在儿童1型糖尿病酮症酸中毒中的应用

儿童糖尿病均是1型糖尿病,有自发糖尿病酮症(DK)及酮症酸中毒(DKA)倾向.以往一般以尿酮体定性、血糖、渗透压、阴离子间隙等指标来指导临床治疗,但严重DKA患儿血中β-羟丁酸等酮体和脂肪酸增高,尿酮体呈弱阳性或阴性,容易掩盖酸中毒,延误诊治.     

血站试剂的质量评估

目的选择适宜的血液筛查试剂,保证临床用血安全。方法 ELISA方法进行试剂确认筛选。结果确认结果与预期结果一致。结论血站在选择试剂时,要尽量选择灵敏度高、特异性好的试剂。     

HIV抗体弱阳性质控血清的制备及应用评价

目的 掌握抗HIV弱阳性外部对照质控血清的制备方法,有效运用到试验过程中。方法 用HIV抗体阴性血清成倍比稀释强阳性血清,采用酶联免疫吸附检验(ELISA)来检测各稀释度OD值,并计算S/CO值来确定某一稀释度为配置稀释度(即临界值2-3倍)。结果 采用倍比稀释法,可获得所需外部质控所用血清浓度,并且连续检测20次,绘制出室内质控图。结论 制备适合自己试验室的弱阳性的外部质控血清方法简单,使用起来方便,也易于保存,适用于HIV初筛实验室日常检测的室内质量控制工作。     

原发性腹腔妊娠的超声所见1例

患者女,35岁。停经51d,尿妊娠弱阳性,轻微腹痛,无阴道出血,来我院就诊,行超声检查:子宫大小正常,内膜厚0.6cm,右侧卵巢大小为2.3cm×1.6cm,回声正常,于右侧卵巢左后方可见2.3cm×2.1cm孕囊样回声,周边有增强的厚壁回声,内可见1.4cm×0.7cm胎芽,并可见心管搏动,左侧卵巢未明确显示。超声诊断:右侧宫外孕,考虑为腹腔妊娠(原发性?)(图1、2)。患者随即住院治疗,手术所见:ROV:右侧卵巢;UT:子宫;GS:孕囊位于右侧卵巢左后方图1原发性腹腔妊娠声像图子宫、双侧卵巢及输卵管正常(右侧输卵管较左侧略粗),于右侧输卵管伞端与右侧阔韧带间见一大小约2…     

胎儿胰岛中干细胞的分离与鉴定

目的:已证实胰腺来源的干细胞或祖细胞在体内外均能分化为胰岛素分泌细胞,但成人胰腺来源的干细胞增殖潜能较差.实验旨在分离并鉴定胎儿胰岛样细胞团中的干细胞,为糖尿病细胞移植治疗寻找可用的种子细胞.方法:实验于2006-10/2007-07在解放军军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室完成.①对象:所用胰腺标本取自流产胎儿,胎龄14～20周,由解放军总医院妇产科提供,胎儿组织的使用得到孕妇本人的知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:无菌条件下取出胎儿胰腺,37 ℃下用0.5 g/L的V型胶原酶进行消化,分离得到胎儿胰岛样细胞团,悬浮培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清、1 mmol/L丙酮酸钠、1 mmol/L谷氨酰胺、71.5 μmol/L β-巯基乙醇、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基,每日转皿除去贴壁细胞,72 h后挑选出悬浮生长的胰岛样细胞团予以贴壁培养,待长成上皮样单层细胞克隆时传代.③实验评估:将悬浮培养的胰岛样细胞团行双硫腙染色.另将少部分胰岛样细胞团及第4代细胞种植于24,96孔板中,采用免疫荧光染色检测细胞表面分子标志物增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、角蛋白19、波形蛋白、胰岛素、胰高血糖素、CD29的表达情况.MTT法分析第6代细胞的生长曲线.结果:①悬浮及贴壁培养的胰岛形态:刚分离出的胰岛呈簇状,边缘不规整,细胞排列较疏松.贴壁后胰岛样细胞团由簇状逐渐展开形成上皮样单层细胞克隆.传代后细胞形态发生改变,呈梭形或分支样,增殖较快.②悬浮培养的胰岛双硫腙染色检测:分离得到的胎儿胰岛样细胞团双硫腙染色呈阳性表达.③细胞表面标志免疫荧光染色检测:贴壁的第1代细胞大部分呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,极少数细胞呈胰岛素、胰高血糖素阳性,而角蛋白19为阴性.传代后仍呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,角蛋白19弱阳性,而胰岛素、胰高血糖素为阴性,所有细胞均不表达CD29.④细胞生长曲线:传代第3天细胞进入对数生长期,第6天进入平台期,细胞生长曲线呈"S"形.结论:由胎儿胰岛成功分离并培养出具有自我更新和良好增殖能力的干细胞,稳定表达多种胰腺干细胞特征性标志,而不表达胰岛细胞标志物,提示该细胞可作为候选的胰岛干细胞用于糖尿病细胞移植治疗.     

室内环境温度对酶联免疫吸附试验的影响

目的探讨室内环境温度对酶联免疫吸附试验的影响。方法在相同的实验条件下,将实验室环境温度分别调至18、25℃。在两种温度下按照试剂盒说明书(二步法)进行操作,每份标本双孔检查,用酶标仪读取各孔A值。结果 60例乙型肝炎病毒表面抗原阳性标本25℃检测全阳性,18℃检测则有17例阴性,漏检标本的A值在0.105 0～0.300 0之间,漏检率28%。结论室内环境温度过低容易造成弱阳性标本的漏检,将室温控制在(25±1)℃,试剂30min恒温后操作可降低弱阳性标本的漏检率,保证结果的准确性及良好的重复性。