同种异体冻干下颌骨移植修复下颌骨缺损的临床应用

目的：探讨同种异体冻干下颌骨移植修复下颌骨缺损的可行性，并讨论其抗原性、生物力学特性、骨愈合机制及优缺点。方法：对进行同种异体冻干下颌骨移植修复下颌骨大节段肿瘤切除后缺损和颞下颌关节移植置换的7例患者进行随访研究，根据临床检查及X线片对手术效果进行评估。结果：手术切口均一期愈合，未发生排斥反应及骨折现象，移植骨愈合良好，外形及功能恢复满意。结论：同种异体冻干下颌骨移植是修复下颌骨大节段肿瘤性缺损和颞下颌关节移植置换的可行方法。     

2019-2020年山东省A(H1N1)pdm09亚型流感病毒抗原性及血凝素基因特征分析北大核心CSCD

目的了解山东省2019-2020年分离株A(H1N1)pdm09亚型流感病毒的抗原性及血凝素(hemagglutinin, HA)基因变异情况。方法采用单向红细胞凝集抑制试验对2019-2020监测年分离的15株A(H1N1)pdm09亚型流感病毒进行抗原性分析;PCR扩增病毒的HA基因并测序,进行进化分析,以及糖基化位点、抗原变异位点、受体结合位点的变异分析。结果 2019-2020年流行株A(H1N1)pdm09亚型流感病毒均为疫苗株A/Brisbane/02/2018的类似株。HA基因均属于6B.1分支,毒株HA基因核苷酸序列与当季疫苗株A/Brisbane/02/2018的同源性为98.5%~99.0%,与最新疫苗株A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019的核苷酸同源性为99.3%~99.8%。所有毒株与当季疫苗株相比均出现了T185I位点变异。结论 2019-2020监测年度山东省流行的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒与WHO推荐的疫苗组分匹配性良好,疫苗株推荐存在滞后性。HA基因与其编码的氨基酸持续变异,因此应加强对病毒变异的监测,为疫苗筛选及流感防控措施的制定提供参考。     

深低温处理在同种异体移植中对组织免疫源性研究进展

组织移植是恢复先天、后天因素导致的畸形或组织缺损的有效方法,然而移植过程中存在许多影响因素,其中免疫排斥反应就是急需解决的难题之一.任何异体材料置入体内均会产生免疫反应,同种异体移植物的识别和排斥,是包括效应细胞和调节因子在内的多种细胞间复杂相互作用的结果[1],因此许多专家学者对于如何减少免疫排斥反应做了大量研究,其中深低温冷冻保存可对组织抗原性存在影响,现就此问题综述如下.     

三种去污剂对红内期恶性疟原虫虫体抗原的影响

采用三种去污剂（ＮＰ－４０、十二烷基磺酸钠－ＳＤＳ和皂素－Ｓａｐｏｎｉｎ）加上多种蛋白酶抑制剂混合物制备红内期恶性疟原虫抗原，并使用ＥＬＩＳＡ法比较三种可溶性提取物的抗原性。结果发现，碳酸盐缓冲液包被虫体抗原比ＰＢＳ包被效果好。前者可增加抗原的吸附性。ＮＰ４０提取物仍然含有抗原性，尽管其抗原含量远远低于另两种提取物。ＮＰ４０－ＳＤＳ和Ｓａｐｏｎｉｎ－ＳＤＳ提取物对许多病例表现出抗原性差异。以上结果提示在用疟原虫虫体抗原作现场免疫学筛选时，最好用ＮＰ４０提取物、ＮＰ４０－ＳＤＳ提取物和Ｓａｐｏｎｉｎ－ＳＤＳ提取物作混合抗原以提高检测的敏感性。     

弓形虫三磷酸核苷水解酶基因克隆、表达与鉴定

目的 对刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶基因（NTPase）进行克隆、表达和鉴定。 方法 采用PCR扩增刚地弓形虫RH株的NTPase基因，克隆入pGEM?-T Easy载体，经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB，并转入大肠埃希菌(E.coli)BL21（DE3）中进行诱导表达。用镍-次氮基三乙酸亲和层析柱纯化重组质粒pBAD-HisB-NTPase表达产生的含组氨酸的重组蛋白，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析蛋白表达产物。 结果 PCR扩增得到特异的刚地弓形虫NTPase-Ⅱ基因序列，经测序鉴定无基因突变。SDS-PAGE结果表明NTPase-Ⅱ基因在E.coli BL21（DE3）中获得高效表达，其融合蛋白相对分子质量（Mr）约70 000，与理论值相近。Western blotting分析结果显示，纯化的重组蛋白可被弓形虫感染的鼠血清及鼠抗重组蛋白血清识别。 结论 所克隆表达的弓形虫NTPase-Ⅱ重组蛋白具有良好的抗原性。     

动态分析老年重症乙肝患者乙肝病毒全基因组及其表达蛋白抗原性变化

目的 动态分析1例老年重症乙型肝炎患者全基因组序列变化，在全基因组水平上阐述HBV基因组变异对其不同基因生物学特性的影响。方法 一次扩增全长乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)DNA基因组，测序鉴定，建立HBV全基因组克隆、转染表达。结果 通过测序鉴定、同源性比较和真核细胞转染分析，显示HBV基因组序列变异集中在S基因，其表达蛋白前后有抗原性变化。结论 S基因变异可以导致S蛋白抗原性变化，打破宿主体内免疫耐受，诱发重症肝炎的发生。     

旋毛虫抗原基因Ts21的原核表达与重组蛋白鉴定

目的 原核表达旋毛虫相对分子质量（Mr）21 000抗原基因（Ts21）并对重组蛋白进行纯化和抗原性鉴定。 方法 将旋毛虫抗原基因Ts21亚克隆入原核表达载体pMAL-c2X，构建重组表达质粒pMAL-c2X-Ts21，经酶切鉴定正确后转化大肠埃希菌TB1，以异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。亲和层析法纯化表达产物。应用十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析鉴定重组蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清，ELISA检测抗体滴度，免疫荧光检测（IFA）确定Ts21蛋白在肌幼虫体内的分布。 结果 SDS-PAGE结果显示，表达产物为Mr 63 500的重组融合蛋白，IPTG诱导4 h后表达量最大，薄层凝胶光密度扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18.2%。Western blotting结果显示该重组蛋白可被旋毛虫、纳氏旋毛虫感染小鼠血清及旋毛虫病患者血清识别，但不能被乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及伪旋毛虫感染小鼠血清识别；与钩虫病、囊尾蚴病、日本血吸虫病患者血清无交叉反应，但与并殖吸虫病、华支睾吸虫病及棘球蚴病患者血清有交叉反应。重组蛋白免疫小鼠可产生高滴度的血清抗体，IFA显示Ts21蛋白主要分布于肌幼虫体壁。 结论 成功制备了旋毛虫Ts21基因的重组蛋白，该蛋白具有较好的抗原性。     

Bcr-abl融合基因片段的克隆及在原核细胞中的融合表达

目的：克隆和表达Bcr-abl融合基因融合位点周围的基因片段。方法：以慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株总RNA作为模板，采用RT-PCR方法扩增包含：Bcr-abl(b3a2)融合位点周围的基因片段。将RT-PCR产物按正确的阅读框架，定向克隆进pGEX-6P-1载体谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的下游，将重组质粒转化大肠杆菌BL21菌株，以1．0mmol／L IPTG诱导Bcr-abl融合基因片段的表达。结果：原核细胞融合表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，证实该融合蛋白为42000大小。用该表达产物免疫ICR小鼠，所制备的抗血清可与K562细胞特异性结合。结论：原核细胞表达的p42^Bcr-abl融合蛋白具有p210^Bcr-abl融合蛋白的特异抗原性，为进一步实验研究奠定了基础。     

黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特...     

刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增TgPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果PCR扩增产物约为750 bp。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性。