茯苓多糖对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运相关蛋白表达的影响＊

目的 探讨茯苓多糖对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运的影响。方法 采用随机数字表法将30只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、茯苓多糖组、辛伐他汀组，每组10只，10只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组给予基础饲料喂饲，其余小鼠给予高脂饲料喂饲12周。茯苓多糖组以0.2 g/kg/d灌胃，辛伐他汀组以2.275 mg/kg/天灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，共干预4周。全自动生化分析仪检测小鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏病理形态学变化，油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况，ELISA检测各组小鼠血清载脂蛋白A1 （ApoA1）、对氧磷酶-1（PON1）含量，Real-time RT-qPCR法及Western Blot法检测肝脏胆固醇酯转运蛋白（CETP）、磷脂转运蛋白（PLTP）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C含量均明显上升，HDL-C含量明显下降（P<0.01），肝细胞脂肪变性明显，肝脏脂质沉积明显，小鼠血清ApoA1、PON1含量均明显下降（P<0.01），小鼠肝脏CETP、PLTP mRNA及蛋白表达明显上升，LCAT mRNA及蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，茯苓多糖组血清TG、TC、LDL-C含量均显著下降（P<0.01），HDL-C含量呈上升趋势（P>0.05），肝细胞脂肪变性、脂质沉积程度均有所减轻，茯苓多糖组ApoA1含量明显上升（P<0.01），PON1含量呈上升趋势（P>0.05），茯苓多糖组CETP、PLTP mRNA及蛋白表达有所下降，LCAT mRNA及蛋白表达有所上升（P<0.05，P<0.01）。结论 茯苓多糖可能通过调控血脂水平与胆固醇逆向转运过程，改善ApoE^-/- AS小鼠肝脏脂质沉积，进而发挥防治AS作用。     

茯苓多糖对肝叶部分切除老年大鼠术后认知功能障碍的影响

目的 探讨茯苓多糖对肝叶部分切除老年大鼠术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)的影响. 方法 将30只老年SD大鼠按照随机数字表法分成假手术组、模型对照组和茯苓多糖组,每组10只.建立肝叶部分切除老年大鼠POCD模型,采用Morris水迷宫实验评价肝叶部分切除老年大鼠的学习记忆能力,ELISA检测大鼠血清中TNF-α和IL-6水平. 结果 与模型对照组比较,术后第1、3、7天茯苓多糖组逃避潜伏期相对缩短、穿越平台次数相对增多;与模型对照组比较,术后第1、3、7天茯苓多糖组血清中TNF-α和IL-6水平分别为(18.9±3.9) ng/L和(14.7±3.8) ng/L,(8.9±2.2)ng/L和(9.9±2.6) ng/L,(6.6±1.8) ng/L和(9.6±2.7) ng/L,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组比较,茯苓多糖组脾脏系数和胸腺系数分别为(2.59±0.92) mg/g和(1.60±0.40) mg/g,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 茯苓多糖能够改善肝叶部分切除老年大鼠POCD的症状,其机制可能是抑制炎症反应和提高机体免疫力等综合方面.     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

羧甲基茯苓多糖含量测定

目的：建立羧甲基茯苓多糖含量测定方法。方法：以无水葡萄糖为对照,采用苯酚-硫酸法测定羧甲基茯苓多糖的含量。结果：葡萄糖在0.002～0.012mg·mL^-1范围呈良好的线性关系,回归方程为Y=49.016X-0.002 9（R=0.999 6）。测得羧甲基茯苓多糖含量为57.72%。结论：该方法操作简便,重现性好,测定结果准确可靠,可用于中药多糖含量的分析。     

微波辅助水提取茯苓多糖的安全性研究

目的对微波辅助水提取的茯苓多糖进行安全性评价,了解其毒性。方法 80只SD大鼠随机分成0.750g.kg^-1、1.50g.kg^-1与3.00g.kg^-13个剂量组及1个空白对照组,公母各半。将茯苓多糖均匀拌入饲料中连续喂养30d,每周称体重、进食量,在第30d测定脏器系数、血常规、血生化等指标以及病理学组织的检查。结果茯苓多糖各剂量组喂养大鼠三十天后,大鼠的体重进食量、食物利用率、脏器系数、血常规、血生化指标及病理组织学与对照组比较均无显著差异（P〉0.05）。结论微波辅助水提取的茯苓多糖对机体无潜在的毒副作用。     

化学修饰的茯苓多糖抗肿瘤效应的免疫组织化学观察

目的:揭示化学修饰的茯苓多糖抗肿瘤效应与凋亡相关基因蛋白Fas、Bcl-2和Bax的关系。方法:①在背部皮下接种了Sarcoma 180肿瘤细胞(5×106)的7-8周龄BALB/c小鼠,被随机分为茯苓多糖治疗组和PBS缓冲溶液阴性对照组,每组10只。进行腹腔注射,每天1次,连续注射7 d。于第9天处死小鼠取出肿瘤组织。②用免疫组织化学SP法测定荷瘤小鼠肿瘤组织中Fas、Bcl-2和Bax基因蛋白的表达。结果:实验组Fas阳性率为64.99%,阴性对照组阳性率为4.12%,两组间差异有显著性意义(P<0.01);实验组Bcl-2阳性率为17.97%,阴性对照组阳性率为47.96%,两组间差异有显著性意义(P<0.01);实验组Bax阳性率为48.05%阴性对照组阳性率为2.45%,两组间差异有显著性意义(P<0.01)。结论:化学修饰的茯苓多糖对小鼠Sarcoma 180肿瘤细胞有诱导凋亡的作用。     

茯苓多糖的降解及其衍生物的黏度、分子量的测定

目的：探讨茯苓多糖的降解方法及其衍生物的黏度、分子量的测定。方法：将新鲜茯苓提取纯化茯苓多糖,经过酸水解得到不同衍生物,分别测定其黏度和分子量。结果：经过降解得到5种不同降解产物,部分衍生物分子量为1万以下,具有很好的溶解性。结论：酸浓度、反应温度是影响多糖降解的主要因素,为进一步研究输液制剂提供依据。     

茯苓皮中茯苓多糖的提取工艺优化

目的 利用响应表面实验设计优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法和工艺条件。方法 利用单因素实验优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法，在单因素实验的基础上利用响应表面实验设计考察碱法提取过程中碱浓度、提取时间、料液比对多糖提取量的影响。结果 茯苓皮中多糖的最佳提取方法为碱法提取，其提取条件可用回归方程Y=7．89＋15．249X1-35．4X1^2＋8．375X2-0．885X2^2＋7．333X1X2描述。结论 最佳提取方法为碱法，最佳提取工艺条件为：NaOH浓度0．84moL／L，时间8．89h，料液比1：150。     

茯苓多糖的免疫效应和抗肿瘤作用研究进展

茯苓多糖抗肿瘤机制具有多靶点,多层次,多途径的优势,临床的开发和应用具有广阔的前景;茯苓多糖不但具有提高机体免疫监视清除功能,增强机体对肿瘤细胞的杀伤能力,还可以打破机体免疫耐受,逆转肿瘤细胞免疫逃逸,增强机体的抗肿瘤免疫效能;现对近几年的国内外关于茯苓多糖免疫效应和抗肿瘤方面的研究进行综述,深入研究其药理作用,为其成为临床抗肿瘤新药奠定理论基础。     

茯苓中茯苓多糖的含量测定方法及提取工艺优选

目的优选茯苓中茯苓聚糖的提取工艺,测定不同产地茯苓中茯苓聚糖的含量。方法本文采用苯酚-硫酸法,测定茯苓聚糖吸光度。结果对来自不同产地的十二个样品进行测定。结论茯苓聚糖采用稀碱法提取效果最好,最佳提取工艺为石油醚提取2h,80%乙醇提取2h,碱用量为50mL。