富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白片段克隆表达及纯化

目的:表达并纯化富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activation protein,FAP）片段。方法:利用T细胞表位预测软件及酶切位点预测软件分析FAP全长,选取FAP蛋白内富含T细胞表位又缺少酶切位点的多肽AA264^AA449（NP₀32012.1）作为目的表达片段。该多肽所对应的核酸片段为mRNA798¹418（GenBank:BC019190.1）。利用PCR技术从含有FAP基因全长的质粒pCDNA3.1-FAP中扩增目的基因mRNA798¹418,并将该基因与原核表达载体pET-28a（+）连接,在BL21工程菌中实现重组蛋白His6-FAP264-449的表达,并利用His标签进行纯化。结果:成功构建了富含T细胞表位的FAP原核表达质粒pET-28a（+）-FAP798-1418,对该质粒进行BamH1/Xho1双酶切鉴定,鉴定结果与预期完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAP264-449的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在;利用His标签纯化了该融合蛋白,纯化后灰度分析其纯度达95%。结论:成功表达并纯化了富含细胞表位的FAP片段,为下一步以FAP为靶标的肿瘤免疫治疗策略提供了实验基础。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

对组织学与胚胎学教学的几点思考

由于组织学与胚胎学内容繁多,抽象乏味,学生普遍反映学习兴趣和积极性不高,导致死记硬背,学习效率低下.为此,笔者从教以来,通过走访考察及对学生存在问题的了解,浅谈自己的几点看法及改进措施,希望能够使学生更加容易了解这门课的规律及意义,提高学习兴趣,提升教学成效.     

来源于成纤维细胞激活蛋白α的多肽疫苗FAPτ的抗肿瘤效应

目的 了解来源于成纤维细胞激活蛋白α的多肽疫苗 – FAPτ的抗肿瘤效应。方法 将抗原FAPτ与氟氏不完全佐剂混合均匀,在第1、14、21天于小鼠背部皮下多点注射进行免疫,于第17天给小鼠接种肿瘤细胞,记录小鼠肿瘤体积变化曲线及存活率曲线。肿瘤接种22天后对小鼠进行尾静脉取血并取脾脏分离脾脏淋巴细胞。ELISA检测小鼠血清内FAPτ抗体滴度;脾脏淋巴细胞体外经抗原FAPτ再次刺激,流式细胞仪检测CD8⁺ T细胞内IFN-?γ的产生。结果 FAPτ免疫组小鼠肿瘤生长速度低于PBS对照组,存活率高于PBS对照组。FAPτ 免疫组小鼠血清内产生较高的抗体滴度;其脾脏CD8⁺ T细胞内有更高水平的IFN-?γ表达。结论 多肽疫苗FAPτ能够有效激活机体的体液免疫应答和CD8⁺ T细胞免疫应答,显示出较强的抗肿瘤活性。     

银杏叶提取物对核因子-κB转录通路干预作用的研究

目的:通过探讨HL-60细胞被TNF-α激活后NF-κB及IκBα活化的改变,了解银杏叶提取物(GbE)在治疗哮喘中部分可能的分子机理.方法:以HL-60细胞作为工具细胞,分別经TNF-α、GbE刺激,转染带有报告基因的质粒pNF-κB-Luc,通过荧光素酶的表达情况检测NF-κB活性变化;用免疫印迹方法检测IκBα的活化状况.结果:检测结果显示,以GbE预处理HL-60细胞可以明显抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活的活性;但用GbE预处理细胞并不能拮抗TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和降解,将GbE处理细胞时间延长和加大GbE的浓度同样不能阻止IκBα的磷酸化和降解.结论:GbE能抑制NF-κB激活的基因转录但并不是通过干扰经典的NIK/ IKK/IκBα活化途径,而是通过干扰其它途径或采用其它方式来实现的.     

肿瘤浸润淋巴细胞与胃癌预后关系的研究进展

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,影响胃癌预后的因素较多,患者的肿瘤局部免疫反应就是其中之一。近年来肿瘤浸润淋巴细胞成为胃癌预后的热点研究。本文介绍了胃癌肿瘤浸润淋巴细胞的亚型、临床分型及与患者预后关系的研究进展,认为胃癌内的调节性T细胞（Treg）通常与不利的预后相关,而肿瘤浸润的CD8+细胞毒性T细胞、CD45RO记忆T细胞、B淋巴细胞和淋巴小结通常与良好的胃癌预后相关,为进一步研究胃癌患者肿瘤局部免疫反应的关键机制和临床治疗提供了一定依据。     

miRNA-34c对三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨miR-34c对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及可能的分子机制。方法利用化学合成的miR-34c mimics转染三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过MTS实验、Transwell迁移实验观察过表达miR-34c后细胞增值及侵袭能力的变化;采用流式细胞术检测过表达miR-34c对细胞周期的影响;采用Western blot检测b-catenin及其下游靶蛋白的表达情况。结果 miR-34c过表达明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。过表达miR-34c诱导细胞G1期阻滞。Western blot结果显示,过表达miR-34c的MDA-MB-231细胞b-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1、Snail、MMP2和MMP7的表达明显下调。过表达b-catenin则逆转miR-34c对MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭的抑制作用。结论 miR-34c可能通过抑制b-catenin信号而抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭。     

提高组织学与胚胎学线上教学成效的措施

自新冠肺炎疫情暴发以来,线上教学在各级学校层层展开,可能成为未来很长一段时间内主要的教学模式.由于准备仓促,大部分院校直接将传统的教学内容和方法复制到线上教学.笔者现就如何提高线上组织学胚胎学教学成效提出几点措施.     

银杏叶提取物在哮喘治疗中的分子机制探讨

目的 通过探讨TNFα对激活NF-κB活性的影响,解析银杏叶提取物（GbE）在治疗哮喘中的分子机理.方法 以Hela细胞和HL-60细胞作为工具细胞,分别经TNFα、GbE刺激,用免疫印迹方法检测IκBα的活化状况;转染带有报告基因的质粒pNF-κB-Luc,通过荧光素酶的表达情况检测NF-κB活性变化.结果 以GbE预处理Hela 细胞和HL-60细胞可以明显抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活的活性.但用GbE预处理细胞并不能拮抗TNFα诱导的IκBα的磷酸化和降解,将GbE处理细胞时间延长和加大GbE的浓度同样不能阻止IκBα的磷酸化和降解.结论 GbE抑制NF-κB激活的基因转录并不是通过干扰经典的IKK/NIK/IκBα活化途径,而是通过干扰其它途径或采用其它方式来实现.