免疫标记和BRAF V600E突变联合检测在细胞学诊断不确定甲状腺结节中的应用

目的 评估免疫标记半乳糖凝集素-3(Gal-3)、细胞角蛋白-19(CK-19)、间皮细胞角蛋白-1(HBME-1)和BRAF V600E突变联合检测对术前甲状腺细胞学诊断不确定结节的良恶甄别作用.方法 选取四川大学华西医院2014年12月至2019年3月术前细胞学诊断不确定的甲状腺结节患者992例为研究对象,其中行3项免疫标记和/或BRAF V600E突变辅助检测的314例患者为观察组,未行上述辅助检测的678例为对照组,以术后病理学诊断评估上述检测单独或联合应用辅助技术的诊断价值.结果 观察组术后恶性率高于对照组(P<0.001).观察组中,195例患者行Gal-3、CK-19和HBME-1的免疫标记检测,301例患者行BRAF V600E突变检测,其中仅182例患者行3项免疫标记和BRAF V600E突变联合分析.对于单个检测,BRAF V600E突变和CK-19的特异性和敏感性最高,分别为100.0％和90.6％,当联合使用时诊断效能明显提高.BRAF V600E突变检测、Gal-3和CK-19组合的诊断效果最好,准确率最高达92.9％,该组合术前正确分类了168个恶性结节中的161个(95.8％)和14个良性病变中的8个(57.1％),其中159例甲状腺乳头状癌中有158例被本组合正确分类.结论 免疫标记Gal-3、CK-19和BRAF V600E突变检测对细胞学诊断不确定的甲状腺结节有较高的良恶性甄别价值.     

SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。 方法　构建SETD4表达质粒和IL-6 启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6 启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。 结果　双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6 启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。 结论　成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。     

内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用

目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB／c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖（LPS）25mg／kg,使平均动脉压（MAP）降至40mmHg（1mmHg=0．133kPa）造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因（LIG）启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应（PCR）扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。     

迟发性外伤性颅内血肿19例临床分析

对本院收治的19例迟发性外伤性颅内血肿患者的临床资料进行回顾性分析。10例血肿清除加去大骨瓣减压,4例在手术显微镜下小骨窗清除血肿,5例保守治疗。出院时恢复良好6例,中残5例,重残4例,死亡4例,死亡率为21.1%。严密观察患者生命体征、意识和瞳孔,动态复查CT,及时诊断,适时手术是诊治迟发性外伤性颅内血肿的关键。     

大连市主辖区生活垃圾产生量预测

以GDP、社会消费品零售总额和人均可支配收入为主要影响因素,采用多元线性回归法对生活垃圾的人均日产生量进行了预测,并采用GM(1,1)模型对人口增长量进行预测,结果表明:到2020年大连市的生活垃圾年产生量将达1.918 3×10~6t,远超目前的处理能力,亟需建立可持续发展的垃圾减量化、资源化和无害化处理方案。     

急性缺血性卒中患者早期抗栓治疗影响因素的多水平模型分析

目的 探索影响急性缺血性卒中（AIS）患者早期抗栓治疗实施的影响因素，为促进早期抗栓治疗提供参考。方法 选取中国国家卒中登记Ⅱ（CNSR Ⅱ）研究中符合早期抗栓治疗条件的≥50岁AIS患者，收集患者及医院信息。对医院和患者因素与是否进行早期抗栓治疗进行单因素分析。以患者水平为水平1，医院水平为水平2，建立两水平logistic回归模型，分析医院和患者因素对是否进行早期抗栓治疗的影响。结果 共纳入16 910例患者，其中有14 332例（84.75%）接受了早期抗栓治疗。单因素分析结果显示，早期抗栓治疗的患者相关因素包括年龄、医保类型、家庭人均月收入、血脂异常病史；医院相关因素包括医院级别、医院所在地区、是否为教学医院、是否有卒中单元、实行单病种质量控制、神经科床位数比例（P<0.05）。多水平模型显示，早期抗栓治疗的患者相关因素包括性别、年龄、家庭人均月收入、高血压病史、入院美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分；医院相关因素包括神经科床位数比例和医院所在地区（P<0.05）。结论 早期抗栓治疗实施与医院医疗水平相关，应对高龄和入院NIHSS评分高的AIS患者进行重点关注。     

山西营养与慢性病家庭队列人群体质指数与死亡率的关系

目的 分析山西营养与慢性病家庭队列人群BMI与总死亡率的关系。方法 以"2002年中国居民营养与健康状况调查"山西省调查人群为基线建立队列，于2015年12月至2016年3月对研究对象进行随访调查，对逝者进行死因回顾调查。2002年基线信息完整的≥ 18岁研究对象7 007人，随访到5 360人，随访率为76.5%。将研究对象按BMI分为8组，计算死亡率，以死亡率最低组作为参照，采用Cox比例风险回归模型估计全人群、分性别、年龄（≥ 60岁、<60岁）的各组死亡风险比（HR）及95% CI，模型调整基线年龄、性别、吸烟、饮酒、文化程度等因素，并进行敏感性分析。结果 共随访67 129人年，平均随访12.5年，死亡615人，队列总死亡率为916/10万人年。BMI为26.0~27.9 kg/m²组死亡率最低，以该组为参照组，多因素调整后，BMI<18.5、18.5~19.9、22.0~23.9和≥ 30.0 kg/m²组的死亡风险明显升高，调整HR值（95% CI）分别为1.90（1.26~2.86）、1.68（1.15~2.45）、1.49（1.08~2.06）和1.72（1.07~2.76）。对于≥ 60岁老年人，BMI<18.5 kg/m²组的死亡风险明显升高，调整HR值（95% CI）为1.94（1.20~3.15）。结论 BMI ≤ 19.9、22.0~23.9及≥ 30.0 kg/m²均会增加全因死亡风险。除关注肥胖外，低体重营养不良造成的老年人高死亡风险应特别引起重视。     

HPLC-MS鉴定塔中栽培肉苁蓉药材的17个成分

目的:通过HPLC-MS对新疆塔中荒漠栽培肉苁蓉Cistanche deserticola药材60%甲醇提取物的色谱图进行鉴定。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(含0.1%的甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min~(-1),检测波长254 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果:在相同色谱条件下,通过与已分离得到的对照品的保留时间、相对分子质量以及碎片离子进行比较,对新疆塔中荒漠栽培肉苁蓉药材的16个色谱峰中的17个成分进行了准确的鉴定,分别确定为松柏苷,去甲紫丁香苷,紫丁香苷,松果菊苷,肉苁蓉苷A,类叶升麻苷(管花苷A),肉苁蓉苷B,异类叶升麻苷,2'-乙酰基肉苁蓉苷A,肉苁蓉苷C,异肉苁蓉苷C,2'-乙酰基类叶升麻苷,管花苷B,epimeridinoside A,肉苁蓉苷K,肉苁蓉苷J。结论:该研究方法适用于肉苁蓉60%甲醇提取物色谱峰的鉴定,为全面分析该药材的化学成分提供了一定的科学数据。