miR-375调控PDGFC基因表达抑制肝癌血管生成

  目的  miR-375已被证明能够抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进肝癌细胞凋亡，本研究旨在探索miR-375对肝癌新生血管生成的影响及其分子机制。  方法  利用血管生成相关的功能实验探索miR-375对肝癌新生血管生成的影响；使用生物信息学方法预测miR-375潜在的与血管生成相关的功能靶基因；在肝癌细胞系中过表达和下调表达miR-375，验证miR-375对靶基因的调控作用，并利用双荧光素酶报告实验明确其分子机制；靶基因功能挽救实验明确miR-375通过调控靶基因的表达发挥抑制肝癌新生血管生成的作用。  结果  miR-375能够抑制肝癌新生血管生成；血小板源性生长因子C（PDGFC）是miR-375的潜在功能靶基因；miR-375能够直接作用于PDGFC基因mRNA 3'-非编码端（3'-UTR）而抑制PDGFC基因表达；miR-375能够通过抑制PDGFC基因表达抑制肝癌新生血管生成。  结论  miR-375能够调控PDGFC基因表达抑制肝癌新生血管生成。      

柴胡桂枝汤联合盐酸羟考酮缓释片治疗癌性疼痛的临床疗效观察

目的:探讨柴胡桂枝汤联合盐酸羟考酮缓释片治疗癌性疼痛的疗效。方法:80例癌痛患者随机分为对照组和治疗组各40例，参照癌痛规范化疗治疗要求，观察患者生活质量评分改善、不良反应、日均吗啡消耗量、爆发痛频次等指标。结果:治疗组便秘发生率（5.0% vs 22.5%）、总不良反应发生率（47.5% vs 85.0%）均显著低于对照组（P＜0.05）；治疗组生活质量评分改善［（22.25±6.60）分］显著高于对照组［（17.00±6.07）分］（P＜0.05）；治疗组日均吗啡消耗量［（203.82±52.58）mg］显著低于对照组［(245.09±67.57) mg］(P＜0.05)；治疗组累积爆发痛频次（10.58±1.80）显著低于对照组（13.55±2.58）（P＜0.05）。结论:柴胡桂枝汤联合盐酸羟考酮缓释片治疗癌痛具有增效减毒之效，更能提高癌痛患者生活质量。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a TPase与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315株基因组,插入片段最长者648 bp,最短者334 bp,9个插入片段中含14个编码基因,...     

HOXB7基因在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测同源盒基因B7（HOXB7）在肺腺癌中的表达情况,并探讨其临床意义。方法 分别应用逆转录PCR（RT PCR）和Western blotting法检测人正常肺支气管上皮细胞系HBE及4株肺腺癌细胞系A549、H1975、H1650、H322中HOXB7的表达情况。应用免疫组织化学染色及Western blotting法检测HOXB7在75例肺腺癌及配对癌旁正常组织中的表达,并分析其表达与肺腺癌临床病理特征及预后的关系。结果 4株肺腺癌细胞系中HOXB7 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于正常肺支气管上皮细胞系（P＜0.05）。HOXB7蛋白在肺腺癌及对应癌旁正常组织中的高表达率分别为76.0％（57/75）和9.3％（7/75）,差异有统计学意义（P＜0.05）。HOXB7蛋白在肺腺癌组织中的表达水平与临床分期、病理分级及淋巴结转移有关（P＜0.05）,而与性别、年龄无关（P＞0.05）。HOXB7低表达者的中位生存期为68个月,高于高表达者的51个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论HOXB7在肺腺癌中高表达,且与肿瘤的侵袭转移和疾病进展相关,有可能作为肺腺癌早期诊断及评估预后的新靶标。     

沉默HOXB7基因表达在电离辐射诱导肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移中的作用

目的:探讨HOXB7对电离辐射诱导的肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移能力的影响。方法:采用Western blot 检测蛋白表达变化，划痕实验和 Transwell迁移实验检测电离辐射对肺腺癌A549细胞迁移能力的影响。结果:用不同剂量X-射线辐照A549细胞，发现2 Gy X-射线辐照HOXB7表达量最高；用2 Gy X-射线辐照A549细胞，发现辐照后第3天HOXB7表达量最高；Western blot 检测发现电离辐射明显上调上皮间质转化标志蛋白的表达；划痕实验及Transwell 迁移实验证明电离辐射增强A549细胞迁移能力。沉默HOXB7 后，电离辐射诱导的A549细胞上皮间质转化及迁移能力明显减弱。结论:HOXB7是电离辐射诱导肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移的关键蛋白。     

HOXA10在肺腺癌中的过表达及其临床意义

目的 研究肺腺癌组织和细胞系中HOXA10的表达及其临床意义.方法 运用免疫组织化学方法检测75例肺腺癌及其癌旁组织中HOXA10的表达情况,并分析HOXA10的表达与患者的临床特征及5年生存率的相关性.此外利用反转录PCR、Western blot及免疫荧光染色检测正常肺支气管上皮细胞系HBE以及4种肺腺癌细胞系H322、H1650、A549、H1975中HOXA10的表达情况.结果 HOXA10主要表达于胞浆中,且于75例肺腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01),并与肿瘤的浸润深度(P＜0.05)及淋巴结转移(P＜0.01)有关.而HOXA10高表达与低表达的肺腺癌患者的5年生存率没有显著差异(P＞0.05).反转录PCR、Western blot及免疫荧光染色的结果显示HOXA10在肺腺癌细胞系中的表达明显高于正常肺支气管上皮细胞系.结论 HOXA10高表达于肺腺癌及肺腺癌细胞系中,这可能与肺腺癌的侵袭和恶性淋巴结转移的程度密切相关.     

肽抗生素hPAB-β抗金黄色葡萄球菌L型活性分析

目的 观察毕赤酵母高密度发酵表达的肽抗生素hPAB-β对L型细菌的抗菌活性.方法 采用新青Ⅱ纸片扩散法诱导金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923 L型,通过形态学观察、滤过实验、回复实验以及电镜观察鉴定L型菌;采用酵母高密度发酵制备肽抗生素hPAB-β,通过稀释法检测hPAB-β对L型细菌的抗菌活性并测定其最小抑菌浓度(MIC).结果 用新青Ⅱ可成功诱导金黄色葡萄球菌L型;所得L型菌能通过0.45μm的滤膜;撤去抗生素后,L型能回复为野生菌;电镜下见多数金葡菌L型的细胞壁部分缺失,少数完全缺失;稀释法检测显示hPAB-β对金葡菌L型具有良好的抗菌活性,其MIC值为32μmol/L.结论 肽抗生素hPAB-β对金葡菌L型有良好的抗菌活性.     

肺腺癌HOXA10基因启动子甲基化的改变及其临床意义

目的 探讨肺腺癌HOXA10基因启动子区甲基化改变情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法检测30例肺腺癌标本及其配对癌旁组织标本中HOXA10基因启动子甲基化状态,并分析HOXA10基因甲基化状态与临床病理特征和预后的关系。结果 MSP法检出17例（56.7％）肺腺癌组织HOXA10基因启动子区发生低甲基化改变,其中4例为完全去甲基化改变;而癌旁组织仅有6例（20.0％）HOXA10基因启动子区发生低甲基化改变（P＜0.05）。HOXA10低甲基化与肿瘤大小、临床分期及淋巴转移有关（P＜0.05）,而与性别、年龄、肿瘤分化程度无关（P＞0.05）。生存分析显示,HOXA10基因低甲基化患者的中位无病生存期为27.0个月,明显低于HOXA10基因甲基化患者的46.0个月（P=0.002）。结论 肺腺癌HOXA10基因启动子区低甲基化为频发事件,提示与患者的不良预后有关,可作为判断肺腺癌预后的指标。