沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究

目的初步观察用小分子干扰RNA(siRNA)沉默树突状细胞(DCs)恒定链(Ii)后,DCs疫苗的体外抗肿瘤效果。方法从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100 ng/ml GM-CSF和100 ng/ml IL-4诱导培养6 d后,转染针对DCs Ii链特异的Ii-siRNA,转染后加用50 ng/ml TNF-α继续诱导细胞成熟48 h,然后分别用Western blot检测沉默效果及CCK-8试剂盒检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;此外,DCs共转染Ii-siRNA和小鼠胃癌前体细胞MFC的总RNA后,与同种异体淋巴细胞共培养,通过ELISA检测培养上清IFN-γ/和IL-4的水平,并收集致敏淋巴细胞进行体外杀伤实验。结果Ii-siRNA明显抑制DCs Ii的表达。沉默Ii链能够增强DCs的淋巴细胞增殖能力,并促使淋巴细胞向Th1的方向漂移[IFN-γ:(5107±351)pg/ml,IL-4:(65±13)pg/ml,P＜0．05]。淋巴细胞经共转染Ii-siRNA和MFC RNA的DCs激活后,明显而特异地杀伤靶肿瘤细胞(杀伤百分率: 66．94%±2．75%,P＜0．05)。结论通过siRNA沉默DCs的Ii链可能是一种行之有效的增强抗肿瘤免疫的方法。     

内镜活检对胃癌组织学分类术前诊断的价值

目的 探讨内镜活检对胃癌组织学分类术前诊断的价值。方法 术前对141例胃癌患的内镜活检标本分别根据Lauren分类和世界卫生组织（WHO）分类判断组织学分类，并与手术标本结果对照。结果 内镜活检对胃癌Lauren分类术前诊断的准确率为76.6%。对肠型胃癌诊断的敏感性和特异性分别为85.4%和80.6%。而对弥漫型胃癌则分别为82.7%和80.3%，在59例术前诊断为肠型胃癌的病例中，18例（30.5%)在手术标本中呈弥漫性行生长，而在75例术前诊断为弥漫型胃癌的病例中，仅6例（8.0%)术后诊断为肠型胃癌，内镜活检对胃癌WHO分类术前诊断的准确率为87.2%，其中对乳头状/管状腺癌，黏液腺癌和印戒细胞癌的敏感性分别为91.9%。33.3%和66.7%。结论 内镜活检对胃癌组织学分类的术前诊断具有较高的临床应用价值。     

小鼠胃癌MAGE3抗原H-2K~k限制性抗原肽的筛选

本研究对小鼠胃癌MAGE3抗原H 2Kk 限制性的抗原肽进行了筛选。用CTL表位预测的基序法对易与H 2Kk 结合的多肽序列进行了预测并人工合成了 4个多肽。在体外检测了各多肽刺激H 2Kk 型小鼠T细胞增殖和分泌IFN γ的能力 ,同时测定了各多肽诱导出的CTL对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。结果显示 ,抗原肽MAGE31 3 0 1 3 7可有效地刺激特异性T细胞的增殖和分泌细胞因子IFN γ ,其诱导出的CTL细胞对MFC细胞也有较高的杀伤活性。这些实验结果证实抗原肽MAGE31 3 0 1 3 7可以作为多肽疫苗来对表达MAGE3抗原的H 2Kk 型小鼠胃癌进行免疫治疗。     

肿瘤基因表达谱的研究进展

基因表达谱的研究是近年来新的研究热点.通过对肿瘤基因表达谱的研究,深入了解肿瘤的发生机制,有助于找出肿瘤的早期诊断指标、治疗靶点、治疗应答和预后指标.现综述在基因转录和翻译两个层次上发展的基因表达谱的新技术,即核酸层次上的表达序列标签、基因表达系列分析和新近发展的cDNA微阵列技术,蛋白质层次上的二相凝胶电泳和测序质谱技术即蛋白质组技术,以及生物信息学在表达谱研究中的应用.     

POLO-LIKE KINASE1 GENE EXPRESSION AND ITS CLINICOPATHOLOGICAL SIGNIFICANCE IN GASTRIC CARCINOMA

Objective To clarify the polo-like kinasel （PLK1） expression in human gastric cancer tissue and its clinicopathological significance in gastric carcinoma. Methods PLK1 expression in 60 cancer tissues and their corresponding noncancerous tissues from gastric cancer patients was measured by both real-time quantitative RT-PCR and western blot assay, lmmunohistochemistry was used to detect PLK1 protein expression in eighty-nine paraffin-embedded samples. Results The PLK1 mRNA and protein expression level in the 60 fresh cancer tissues was significantly higher than that in noncancerous tissues （ P 〈 0. 0001, P = 0. 031 respectively）. In paraffin-embedded samples, apart from its increased expression level, PLK1 was found to be in both cytoplasm and nucleus, double-site location only occurred in poor-differentiated cancer, PLKI expression intensity was associated with tumor dif- ferentiation （ P = 0. 03）, invasion （ P = 0. 032 ）, TNM stage （ P = 0. 019） , ki67 expression （ P = 0. 011 ）. The patients with negative PLK1 expression had better survival rate than that with positive PLK1 expression （ P =0. 0292 ）. Conclusion PLK1 may have clinicopathological value in tumor diagnosis, and may become another new biomarker and therapeutic target for gastric cancer.     

不同亚型的半乳凝素-9对结肠癌LoVo细胞和内皮细胞体外黏附作用的影响

目的 研究不同亚型的半乳凝素-9对结肠癌LoVo细胞侵袭转移相关分子表达的调节作用,以及该调节作用对LoVo细胞与内皮细胞体外黏附作用的影响.方法 半乳凝素-9基因不同亚型的表达载体转染结肠癌LoVo细胞24 h后,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测整合素β1、钙黏着素E、选择素E、细胞间黏附分子-1、CD44和基质金属蛋白酶-9表达的变化.LoVo细胞分别在转染半乳凝素-9、转染半乳凝素-9+半乳凝素-9抗体、转染半乳凝素-9+选择素E抗体和转染半乳凝素-9+β-乳糖条件下进行体外LoVo细胞与内皮细胞的黏附实验.结果 半乳凝素-9L能下调选择素E mRNA和蛋白的表达,半乳凝素-9M和半乳凝素-9S能上调选择素E mRNA和蛋白的表达.体外黏附实验中,转染空载体、转染半乳凝素-9L、转染半乳凝素-9M和转染半乳凝素-9S组的平均荧光强度分别为0.90±0.20、0.94±0.24、1.60±0.11和1.45±0.13.半乳凝素-9M和半乳凝素-9S可促进kVo细胞黏附于内皮细胞(P<0.05),而半乳凝素-9抗体、选择素E抗体和β-乳糖均可抑制此作用.结论 3种不同亚型的半乳凝素-9通过不同的方式调节LoVo细胞选择素E mRNA和蛋白的表达,影响LoVo细胞与内皮细胞的体外黏附;3种不同亚型的半乳凝素-9在介导肿瘤细胞转移过程中的作用可能是不同的.     

胃癌细胞在右旋甲硫氨酸中氨基酸代谢的研究

目的:研究胃癌细胞在右旋甲硫氨酸(D-Met)环境中氨基酸的代谢. 方法: 将6株胃癌细胞分别接种于D-Met、Met-和左旋甲硫氨酸(L-Met)培养液中,培养5 d后,用高效液相色谱法检测培养液中20种氨基酸的浓度. 结果: Met-组6株胃癌细胞的Met含量显著低于L-Met组和D-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组SUN-1、KATO-Ⅲ和MKN45细胞的同型半胱氨酸(Hcy)含量显著高于L-Met组(P<0.05);除SUN-1和MKN45外,D-Met组和Met-组各株细胞Gln含量显著高于L-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组KATO-Ⅲ、NCI-N87和AGS的丙氨酸(Ala)含量显著低于L-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组SUN-16、KATO-Ⅲ和AGS的半胱氨酸(Cys)含量显著低于L-Met组(P<0.05). 结论:D-Met环境可影响胃癌细胞代谢,其效果与Met-环境相似.     

低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响

目的:探讨低温冻存时间对生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内2002至2006年间收集的手术切除胃癌标本20对(包括肿瘤组织及配对正常组织),用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定RNA、DNA完整性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测核转录因子-κB(NF-κB)亚单位P65的mRNA表达;蛋白印迹(Western blot)法检测NF-κB蛋白表达。另随机抽取46例胃癌标本,检测其NF-κBP65的单核苷酸多态性(SNP)位点变异。结果:所有抽提DNA的吸光度比值(A260/A280)均在1.7～2.1间,电泳条带清晰,可检测出SNP位点变异。与保存1～2年者相比,储存3年或以上的标本NF-κBP65 mRNA与蛋白表达均有下调(P=0.03,P<0.01)。结论:组织样本低温保存在5年范围内,其DNA分子的完整性与质量均未受影响;RNA与蛋白质分子在低温保存1～2年内尚不影响癌基因表达的分析结果,但低温保存3年或以上的标本中RNA及蛋白质均有不同程度降解。     

DNA甲基化标志在胃肠肿瘤中的临床应用

DNA甲基化是高等真核生物中经常发生的现象,这种表观遗传学改变常发生在基因的启动子区域,并且不改变DNA序列和遗传密码,具有可逆性,在基因转录调控中发挥重要作用.已近知道抑癌基因和一些与正常细胞功能相关基因的转录失活与DNA甲基化有关,在胃肠肿瘤的发生,发展中起重要作用.随着对DNA甲基化的分子机制的进一步认识,以甲基化为基础的标志在临床的应用,尤其是肿瘤的防治,展现了广阔的前景.目前,这一标志及其相关技术在临床的应用涉及到诊断及治疗等方面,诸如患病风险评估、早期诊断、预后判定、复发监测、治疗反应监测和治疗计划的制定以及可作为治疗靶点等.就DNA甲基化肿瘤标志在胃肠肿瘤中的临床应用研究进展作一综述.     

miRNA的生物学特性和功能

近年来,在小分子RNA中发现了一类与基因表达调节密切相关的分子—微RNA(miRNA)。miRNA是一类真核生物内源性小分子单链RNA,长度通常为21～22个核苷酸,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后表达的调控。miRNA具有控制基因表达及细胞分化、增殖和凋亡等多种功能,可能对基因功能研究、人类疾病防治及生物进化探索有重要意义。该文对miRNA的生物学特性及功能进行综述。