臭茉莉叶总黄酮提取工艺优化及月周期变化研究

目的:采用超声辅助正交试验法优化臭茉莉叶总黄酮的提取工艺,并进一步研究臭茉莉叶中总黄酮1年内每月含量变化趋势,探讨臭茉莉叶最佳采收时间。方法:以提取液中总黄酮含量为指标,选择乙醇浓度(%)、超声时间(min)、料液比、提取温度(℃)等为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定臭茉莉叶提取液中总黄酮的最优工艺。结果:臭茉莉叶所含总黄酮最优提取工艺条件:乙醇浓度70%、超声时间60min、料液比1∶25、提取温度50℃。3月份总黄酮/药材量是0.0235mg·g-1为最高。结论:该提取工艺快捷以及操作简便,适用于臭茉莉叶总黄酮的提取。结合总黄酮月周期变化规律,可以确定1年中5月份和7月份为最佳采摘期。     

响应面法优化天葵子总生物碱提取工艺及其体外抗氧化活性研究

目的采用响应面法优化超声波辅助提取天葵子总生物碱的工艺,并探讨其体外抗氧化活性。方法利用Design Expert 8.0.6软件设计,以乙醇浓度、液料比、超声时间、超声功率为考察因素,进行4因素3水平的响应面研究。采用DPPH法、ABTS法和总还原能力测定法进行体外抗氧化研究。结果所得的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度为86%,液料比为37∶1 mL·g~(-1),超声时间为32 min,超声功率为140 W。提取物有一定的还原力,清除DPPH自由基的IC_(50)值为0.631 mg·L~(-1),清除ABTS自由基的IC_(50)值为0.747 mg·L~(-1)。结论所优选的工艺条件简便可行,抗氧化活性大小与总生物碱的质量浓度呈明显的量效关系。     

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后氧化应激和炎症反应的影响研究

研究大黄素对大鼠急性脊髓损伤后氧化应激和炎症反应的影响,探讨大黄素对急性脊髓损伤后神经元的保护机制。以Allen's法制备脊髓损伤模型。将195只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、大黄素20 mg·kg-1组(C组)、大黄素40 mg·kg-1组(D组)、大黄素80 mg·kg-1组(E组),术后3,7,14,28 d予BBB评分,斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后7 d,甲苯胺蓝染色观察神经元尼氏小体,电镜观察脊髓神经纤维改变;Western blot法检测Nrf2,HO-1,NQO1,GFAP,NF-κB蛋白表达;ELISA检测TNF-α,IL-1β,IL-6含量;免疫荧光检测GFAP,NG2,ED-1表达。BBB评分与斜板实验显示,术后7,14,28 d,C,D,E组较B组明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05);术后7 d,B,C组尼氏小体开始融合,D,E组较B,C组融合明显减轻;电镜显示,B,C组脊髓神经纤维出现明显脱髓鞘改变,D,E组髓鞘变性较B,C组减轻;Nrf2,HO-1,GFAP,NF-κB蛋白表达C,D,E组与B组比较,NQO1蛋白表达D,E组与B组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。C,D,E组TNF-α,IL-6含量较B组,D,E组IL-1β含量较B组显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。C,D,E组GFAP,NG2表达较B组增加,D,E组更明显;C,D,E组ED-1表达较B组显著降低。大黄素对脊髓急性损伤后神经细胞具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2-ARE通路,降低NF-κB,ED-1,TNF-α,IL-1β,IL-6表达,促进GFAP,NG2表达有关。     

丹参酮Ⅱ_A磺酸钠促进低温保存的大鼠坐骨神经同种异体移植后神经再生

探讨丹参酮Ⅱ_A磺酸钠(tanshinoneⅡ_Asulfonate)对深低温保存大鼠坐骨神经活性以及同种异体移植后神经再生、功能恢复的保护作用及其可能的作用机制。将SPF级标准雄性SD大鼠坐骨神经片段15 mm,分别在含有不同浓度丹参酮Ⅱ_A磺酸钠(A 0 mg·L~(-1),B 80 mg·L~(-1),C 160 mg·L~(-1),D 480 mg·L~(-1))中低温(-80℃)保存24周,另设有新鲜对照组,通过电镜观察保存后神经超微结构,calcein-AM/PI荧光染色激光共聚焦显微镜观察活细胞、死细胞数量,Western blot法检测Bax,Bcl-2的蛋白表达变化;冻存后神经体外培养7 d,PCR,Western blot法检测NGF,GDNF的mRNA以及蛋白表达水平。用保存24周的SD大鼠坐骨神经,修复对应的Wistar雄性大鼠坐骨神经10 mm缺损(A',B',C',D'组),术后16周,电生理检测肌肉复合动作电位潜伏期和神经传导速度,甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果显示,大鼠坐骨神经保存24周,与A,B组相比,C,D组脱髓鞘、空泡化程度较弱,活细胞数量较多,Bax表达降低,Bcl-2表达升高;与此同时,保存24周后的坐骨神经NGF,GDNF mRNA及蛋白表达,C,D组均显著高于A,B组。同种异体移植16周后,与A',B'组相比,C',D'组再生有髓神经纤维数量较多,分布广泛、髓鞘较厚,肌肉复合动作电位潜伏期缩短,神经传导速度升高。这表明丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对-80℃长期保存的大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生,其中以中、高浓度(C,D组)效果更好。     

筋骨痹痛汤药物血清对白细胞介素-1β诱导的兔软骨细胞凋亡的保护作用

目的 观察筋骨痹痛汤药物血清对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的兔软骨细胞Bcl-2、Bax表达及细胞凋亡的影响,探讨筋骨痹痛汤治疗骨性关节炎的机制。
方法 随机取雄性成年新西兰兔8只分成4组,分别灌服生理盐水、补肝肾中药（骨碎补、续断和淫羊霍）、独活寄生汤和筋骨痹痛汤,制得空白血清和药物血清。分离制备幼兔软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定软骨细胞。取第3代软骨细胞,随机分5组实验：空白组（A组）、模型组（B组）、补肝肾中药对照组（C组）、独活寄生汤对照组（D组）、筋骨痹痛汤组（E组）。A组用含10%空白血清的DMEM培养36h,其余各组均先采用含IL-1β的DMEM诱导培养12h,然后B、C、D、E组分别给予含10%空白血清、10%补肝肾中药药物血清、10%独活寄生汤药物血清、10%筋骨痹痛汤药物血清的DMEM培养24h。实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR)和免疫印迹法检测兔软骨细胞Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡比例。结果 经鉴定分离制备的细胞为软骨细胞。软骨细胞培养24h后,C、D、E组Bcl-2 mRNA和蛋白表达高于B组,D、E组高于C组,E组高于D组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Bax mRNA和蛋白表达,以及软骨细胞凋亡率,C、D、E组低于B组,D、E组低于C组,E组低于D组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 筋骨痹痛汤药物血清对IL-1β诱导的兔软骨细胞凋亡具有明显保护作用,其机制可能是通过促进Bcl-2表达和抑制Bax表达,调节Bcl-2与Bax的比例来实现。     

无创呼吸机正压通气治疗呼吸衰竭50例临床观察

目的观察无创呼吸机面／鼻罩正压通气治疗急性呼吸衰竭的临床疗效。方法50例急性呼吸衰竭患者随机分为元创呼吸机正压通气治疗25例（通气组），常规药物治疗25例（常规组）。通气组在常规药物抗呼吸衰竭治疗基础上联用无创呼吸机面／鼻罩正压通气治疗；常规组仅用常规药物（氨茶碱、酚妥拉明、抗生素、强心、利尿）等治疗。结果总有效率通气组为80％，常规组为52％（P〈0．05）。通气组无创通气后PaO：、SaO：均明显升高，PaCO2明显降低，pH明显改善，与常规组治疗后比较，均差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论无创呼吸机正压通气治疗低氧血症起效迅速，疗效确切，对改善CO：潴留有一定疗效。     

雷公藤多甙预处理对大鼠异体神经移植后神经再生的影响

背景:有文献报道,在皮肤移植中使用雷公藤预处理供体皮片后再移植,可减轻排斥反应,促进皮片存活,但采用雷公藤作为免疫抑制剂预处理周围神经再移植的报道罕见.目的:观察中药雷公藤多甙预处理对大鼠异体坐骨神经移植后神经再生情况的影响.设计、时间及地点:随机对照观察实验,于2007-09/2008 07在重庆医科大学完成.材料:雷公藤多甙片由黄石飞云制药有限公司提供.成年健康雄性Wistar大鼠15只为供体.成年健康雄性SD大鼠40只为受体,随机数字表法分为4组:雷公藤多甙预处理组、异体神经移植+雷公藤多甙组、自体神经移植组、异体神经移植组.方法:切取供体双侧15mm坐骨神经共30段,生理盐水冲洗,10段置于雷公藤多甙溶液中.建立大鼠右侧坐骨神经缺损模型.造模后,雷公藤预处理组将在400 mg/L雷公藤多甙的细胞保存液浸泡24 h的供体坐骨神经移植于SD大鼠坐骨神经缺损模型:异体神经移植+雷公藤多甙组进行新鲜异体神经移植,术后口服雷公藤多甙5mg/(kg·d),5周;自体、异体神经移植组进行自体、异体神经移植.主要观察指标:术后2,4,8,14周行坐骨神经功能指数测定,对神经移植片段进行光镜的组织学检查,并在术后14周行神经电生理检查、透射电镜观察、再生轴突图像分析.结果:术后雷公藤多甙预处理组、异体神经移植+雷公藤多甙组神经功能指数均逐渐下降,在14周时接近自体神经移植组(P＞0.05).术后,雷公藤多甙预处理组、异体神经移植+雷公藤多甙组移植段排斥反应稍重于自体神经移植组,但明显小于异体神经移植组;术后14周时雷公藤多甙预处理组、异体神经移植+雷公藤多甙组、自体神经移植组移植神经段神经传导速度、动作电位峰值差异无显著性意义(P＞0.05),再生有髓神经神经纤维的面积,总数和髓鞘厚度差异无显著性意义(P＞0.05).结论:异体神经段经雷公藤多甙预处理后可降低移植物与宿主间的免疫排斥反应,促进周围神经再生.     

经雷公藤预处理大鼠异体神经移植后早期组织形态及免疫学观察

目的 观察经雷公藤预处理大鼠异体神经移植后髓鞘损伤程度及急性期免疫排斥反应,探讨雷公藤早期免疫抑制作用及合适用药浓度. 方法取60只3月龄雄性SD大鼠制备右侧坐骨神经干缺损模型,随机分为A、B、C、D、E组5组(n=12).取18只3月龄雄性Wistar大鼠,切取双侧坐骨神经干约15 mm,置入含200、400、800 mg/L雷公藤多甙细胞保存液(各浓度组浸泡12条神经),4℃下浸泡24 h,作为A、B、C组神经修复供体,修复神经缺损;另取6只3月龄Wistar大鼠,切取12条新鲜坐骨神经桥接于D组神经缺损处;E组将切下的自体坐骨神经立即行原位缝合.术后不同时间对移植神经行大体、光镜、电镜观察,检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)含量变化及免疫组织化学分析移植物CD4 、CD8 T细胞入侵情况. 结果 术后1周,A、B、C组神经纤维形态及结构较完整,炎性细胞浸润程度较D组轻;术后1、2、4周,A、B、C组组织形态学观察结果 相似,移植神经片段外形及结构清晰,与周围结缔组织粘连均较D组轻;术后48h及1、2、4周,各组均有不同程度髓鞘损伤,各时间点坐骨神经MBP含量B组最接近E组,两组差异无统计学意义(P＞0.05).术后1、4周,A、B、C组CD4 ,CD8 分子的IA值与D组比较,差异均有统计学意义(p＜0.05). 结论 雷公藤能有效降低异体神经移植术后早期急性排斥反应,对髓鞘发挥一定的保护作用.     

雷公藤抗排斥反应的分子机制

雷公藤主要用于治疗风湿与类风湿,有祛风湿、活血通络及消肿止痛等作用.现代研究发现,雷公藤的多种提取物具有抗排斥反应作用,可延长异体移植器官的存活时间,抑制受者淋巴细胞浸润,促使浸润的细胞凋亡,防止急性移植物抗宿主病(GVHD)的发生.     

内毒素预处理激活大鼠急性脊髓损伤Nrf2蛋白抑制Caspase-3的表达

目的 研究大鼠急性脊髓损伤及经内毒素预处理后损伤脊髓中转录因子Nrf2及凋亡蛋白Caaspase-3的表达.方法SD大鼠132只,随机数字表法分为假手术组、模型组和LPS预处理组.采用改良Allen's打击法制作SD大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型,在术后1、3、5、7...