酸枣仁汤对失眠小鼠血清、肝脏和回肠中胆汁酸分子水平的调控作用

为了从内源性胆汁酸调控角度探讨酸枣仁汤疏肝治疗失眠的机制,对酸枣仁汤护肝作用、失眠模型小鼠及酸枣仁汤治疗后小鼠血清、肝脏和回肠中胆汁酸分子水平变化进行考察。采用睡眠剥夺法建立小鼠失眠模型,灌胃给予酸枣仁汤(48.96 mg·kg^-1·d^-1)7 d后,对各组小鼠基本药效指标饮水饮食量、体质量以及谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)含量等进行检测,并观察肝脏和回肠病理学变化;运用UPLC-MS/MS技术并结合主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)方法对各组小鼠血清、肝脏和回肠中23种胆汁酸分子水平和分布情况进行分析。结果显示,酸枣仁汤可以改善模型组小鼠饮水饮食量减少、体质量减轻及AST和ALT显著升高的现象,并有效逆转肝脏和回肠出现的损伤及炎症。失眠模型小鼠肝脏胆汁酸处于失代偿期,小鼠血清、肝脏和回肠胆汁酸出现下降或上升现象。酸枣仁汤可使这些部位的部分胆汁酸异常水平得到恢复。血清PLS-DA分析筛选出了甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、牛磺-α-鼠胆酸(T-α-MCA)、α-鼠胆酸(α-MCA)、牛磺脱氧胆酸钠(TDCA)、牛磺-β-鼠胆酸(T-β-MCA)和LCA等7种胆汁酸,可作为酸枣仁汤调控作用的主要判别成分。综上,酸枣仁汤对肝脏具有一定的保护作用,胆汁酸分子可作为药物治疗失眠性肝功能异常的药效学生化指标;酸枣仁汤疏肝解郁,镇静催眠的机制可能与胆汁酸信号分子水平调控有关。     

芫花氯仿萃取物对大鼠及人肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响

考察芫花氯仿萃取物对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)及UGT1A1活性的影响,为预测芫花致肝损伤可能发生机制提供实验依据。采用体外肝微粒体孵育模型,分别以4-硝基酚和β-雌二醇为底物检测UGTs及UGT1A1活性;利用UV和HPLC测定底物或代谢物含量。结果表明,HPLC测得氯仿萃取物中3种黄酮类成分芹菜素、羟基芫花素和芫花素质量分数分别为1.00%,6.40%,18.38%;UV法测得总二萜质量分数为37.39%。与空白组相比,在大鼠肝微粒体(RLM)孵育体系,氯仿萃取物能显著抑制UGTs活性,而在人肝微粒体(HLM)孵育体系,抑制作用不明显;对UGT1A1,在RLM和HLM孵育体系中,氯仿萃取物均表现为中等强度的抑制作用(以芫花素计,IC50=8.76,10.36μmol·L-1);抑制类型分别为非竞争性抑制和反竞争性抑制。综上,氯仿萃取物对UGTs及UGT1A1活性均可产生抑制作用且存在种属差异性,推测这种抑制作用可能是芫花致肝损伤的机制之一。     

川芎嗪眼部植入剂的制备及体内外释药相关性研究

目的:制备川芎嗪(TMPZ)眼部缓释植入剂,考察其体外释放、兔眼玻璃体内药动学行为及体内外相关性.方法:使用微量锥形双螺杆混合机,采用热熔融挤出法,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为基质材料制备川芎嗪眼部植入剂,HPLC测定川芎嗪植入剂植入兔眼后玻璃体的浓度,考察其体内缓释行为,并对体内外相关性进行研究.结果:载药量为10％～ 30％时,可制备得到川芎嗪植入剂,含量均匀度符合2010年版《中国药典》规定.体外释放符合零级释放模型.以PL-GA 5050,2.5A为载体,载药量为30％的川芎嗪植入剂在玻璃体内可缓慢释放药物达到3周以上,体内外释放相关性良好.结论:热熔融挤出法制备川芎嗪眼部植入剂工艺可行,川芎嗪眼部植入剂在兔眼玻璃体内释药平稳,缓释效果良好.     

芫花主要黄酮成分对肝微粒体UGTs及UGT1A1活性的体外抑制作用

目的 考察芫花主要黄酮成分芫花素和芹菜素对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）及UGT1A1活性的影响。方法 采用体外肝微粒体孵育模型,以4-硝基酚（4-nitrophenol,4-NP）为底物检测UGTs活性,胆红素为底物检测UGT1A1活性;利用UV及UPLC-MS/MS测定底物或代谢产物的含量。结果 对UGTs,在大鼠肝微粒体、小鼠肝微粒体以及人肝微粒体孵育体系中,芫花素和芹菜素均能不同程度地抑制UTGs活性;抑制强弱顺序：在大鼠肝微粒体温孵体系中,芫花素>芹菜素;在小鼠肝微粒体以及人肝微粒体温孵体系中,芹菜素>芫花素。对UGT1A1,在人肝微粒体孵育体系中,芫花素和芹菜素均表现为中等强度的竞争性抑制作用,抑制强弱顺序：芹菜素（IC₅₀=12.40 μmol·L^-1）>芫花素（IC₅₀=23.21 μmol·L^-1）。结论 芫花素和芹菜素对不同肝微粒体孵育体系中UGTs及UGT1A1均可产生显著抑制作用且存在种属差异。芫花素及芹菜素可能存在基于UGT酶的药物相互作用。     

交泰丸对糖尿病、抑郁和失眠症“异病同治”的网络药理学机制分析

目的：从分子水平探讨交泰丸对糖尿病、抑郁和失眠症“异病同治”的作用机制。方法：运用网络药理学技术，通过数据库检索，以交泰丸的有效成分、作用靶点、治疗疾病种类为网络节点，使用Cytoscape构建相互作用网络，MAS进行生物信息学分析。结果：交泰丸中的20个化合物可作用于92个靶点发挥对3种疾病的治疗作用，HTR2A和HTR2C为交泰丸治疗糖尿病、抑郁和失眠的共同靶点。交泰丸治疗糖尿病的靶点主要富集在抗细胞凋亡生物过程和Toll样受体信号通路，治疗抑郁的靶点主要富集在信号转导生物过程和神经活性配体-受体相互作用通路，治疗失眠的靶点主要富集在5-羟色胺受体，磷脂酶C激活途径生物过程和神经活性配体-受体相互作用通路。结论：交泰丸具有多成分、多靶点、多途径的特点，该研究为交泰丸“异病同治”的作用机制提供参考。     

黄芪活性成分抗衰老作用机制的网络药理学研究

目的:运用网络药理学方法探讨黄芪抗衰老的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得黄芪化学成分,以生物利用度(OB)、类药性(DL)为条件筛选主要活性成分;利用TCMSP和PharmMapper数据库预测黄芪活性成分靶点;在OMIM数据库和GeneCards数据库中输入关键词"aging",搜索与衰老相关的疾病靶点;借助Cytoscape 3.2.1软件构建"药物-疾病-靶点"的可视化网络;通过STRING网站构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点;通过CB-Dock网站对成分与靶点进行分子对接验证;应用DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果:筛选得到黄芪24个活性成分,对应385个作用靶点;筛选出衰老相关靶点23 997个,取交集得到黄芪与衰老相关靶点377个,其中核心靶点为蛋白激酶B1(Akt1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、Jun、白细胞介素-6(IL-6)、MAPK8、表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子(EGF)、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)和白细胞介素-8(CXCL8);分子对接结果显示,黄芪活性成分与靶蛋白Akt1和MAPK1的结合能力较好;GO功能显著富集在氧化应激反应、活性氧代谢等生物过程;KEGG富集信号通路161条。结论:黄芪中黄酮和皂苷类化合物可能是其抗衰老的物质基础;黄芪可通过Akt1等靶点调节糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路发挥其抗衰老作用,为其深入研究提供参考。     

靶向叶酸受体和线粒体的载雷公藤红素PAMAM纳米递药系统构建及体外抗炎作用

促炎巨噬细胞在类风湿性关节炎的发生和发展中发挥关键调控作用。本研究构建了一种可靶向叶酸受体和线粒体的载雷公藤红素(celastrol, Cel)聚酰胺-胺树枝状聚合物(polyamide-amine dendrimer, PAMAM)纳米递药系统,实现可靶向炎症巨噬细胞的集化疗和光热于一体的协同治疗。以PAMAM为纳米载体,通过酰胺反应偶联叶酸受体靶向基团叶酸(folic acid, FA)和线粒体靶向基团IR808 (同时作为光热剂),通过静电吸附作用负载抗炎药Cel,制备了FA-PAMAM-IR808/Cel纳米复合物。体外表征结果表明,该纳米复合物中Cel载药量为50.90%,粒径为130～160 nm,平均电位在1.0～3.5 mV,释药呈现pH敏感性,经近红外光照射10 min温度可达42.5℃;体外摄取实验表明,纳米复合物有明显的叶酸靶向性和线粒体靶向性;纳米复合物在近红外光照后可显著增强细胞毒性和诱导细胞凋亡能力,并浓度依赖性降低促炎因子肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、一氧化氮(NO)分泌量。本研究为开发新型...     

基于特异质大鼠胆红素相关转运体功能抑制探讨首乌藤肝损伤机制

考察全粉及提取物对正常和特异质(LPS)大鼠胆红素相关转运体Oatp1a1,Oatp1b2和MRP2活性及mRNA表达的影响,探讨首乌藤致肝损伤的可能机制。正常及LPS大鼠分别连续灌胃首乌藤全粉及提取物7 d后,静脉注射转运体底物磺溴酞钠(BSP),测定其药动学参数,考察各转运体的活性,同时取肝组织检测转运体mRNA的表达。结果首乌藤全粉及提取物可使BSP的t_(1/2)和AUC显著升高,CL显著降低;AST和ALT显著性降低;Oatp1a1,Oatp1b2及MRP2的mRNA表达水平明显下降(P0.05),但未见二者与LPS的协同作用。综上首乌藤及其提取物对胆红素相关转运体功能的抑制作用,可能是其是否造成肝损伤的原因之一。     

HPLC-MS/MS法鉴定黄连碱在糖尿病大鼠尿液、粪便、胆汁中的代谢产物＊

目的 黄连碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱，具有较好的抗糖尿病药理活性。探讨黄连碱在正常和糖尿病大鼠体内的代谢产物及其代谢途径是否存在差异。方法 本实验采用SD大鼠禁食12 h后腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型。造模成功后分别单次灌胃正常和糖尿病大鼠黄连碱（剂量20 mg/kg），收集给药后0~48 h的尿液和粪便以及0~36 h的胆汁样品，采用高分辨HPLC-MS/MS技术对生物样品中的药物原型及代谢物进行鉴定。选用Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，柱温25℃。质谱使用电喷雾离子源（ESI），正、负离子检测模式，扫描范围m/z 50~700。对各色谱峰质谱图进行分析，根据准分子离子峰判断相对分子质量，进一步根据各色谱峰的主要碎片离子、保留时间等信息以及相关文献数据，推测化合物的结构。结果 黄连碱在正常和糖尿病大鼠体内可发生较广泛的Ⅰ相和Ⅱ相代谢，在大鼠尿液、粪便、胆汁共鉴定出14个代谢产物，其中尿液10中个、粪便中11个、胆汁中8个；Ⅰ相代谢物5个，主要为羟基化物和去甲基化物，Ⅱ相代谢物9个，主要为葡萄糖醛酸化物，但由COP脱氢后生成的M1再次硫酸酯化的产物M4在糖尿病大鼠胆汁中未检出。结论 本课题组推测M1在糖尿病和正常大鼠胆汁中代谢过程的差异是黄连碱产生降糖作用的关键，但其他代谢产物量上的差异有待进一步研究确定。本研究为黄连碱的药效学和药理学研究提供一定的物质基础。     

HPLC-MS/MS分析黄连碱在大鼠体内外的代谢产物

目的:探讨黄连碱的体内外代谢产物及其代谢途径。方法:体内代谢采用单次灌胃大鼠黄连碱(剂量25 mg·kg~(-1)),收集给药后0～48 h的尿液和粪便,0～24 h的胆汁以及给药0. 25,1,2 h后的血浆和脑组织样品;体外代谢采用大鼠肝微粒体及肠道菌群孵育的方法;运用高分辨HPLC-MS/MS技术对生物样品中的药物原型及代谢物进行鉴定。选用ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0. 1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1. 0 mL·min~(-1),柱温25℃。质谱使用电喷雾离子源(ESI),正、负离子检测模式,扫描范围m/z 50～1 200。对各色谱峰质谱图进行分析,根据准分子离子峰判断相对分子质量,进一步根据各色谱峰的主要碎片离子、保留时间等信息,与文献数据进行比较,推测化合物的结构。结果:在大鼠尿液、粪便、胆汁、血浆、脑组织、肝微粒体温孵和肠道菌群温孵样品中发现了黄连碱的17个代谢产物,Ⅰ相代谢产物11个,Ⅱ相代谢产物6个。这17个代谢产物是黄连碱在大鼠体内羟基化、去甲基化和脱氢作用、硫酸酯化、葡糖糖醛酸化后产生的。结论:黄连碱可在大鼠体内发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢反应,代谢物主要存在于尿液中,主要代谢部位为肝脏;黄连碱胃肠道吸收较差,代谢少,大部分经粪便以原型排泄,为黄连碱的药效学和药理学研究提供了一定的物质基础。