天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化

目的建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据。方法采用单因子试验和正交设计法,研究Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响。结果天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25μL的反应体系中含模板DNA 40 ng、Mg2+1.25 mmol/L、dNTP 320μmol/L、引物1.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U。在此基础上,从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结论建立的天门冬ISSR-PCR反应体系,经过17份天门冬种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于天门冬遗传分析。     

天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化

目的 建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序，为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据。方法 采用单因子试验和正交设计法，研究Mg²⁺、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响。结果 天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25 μL的反应体系中含模板DNA 40 ng、Mg²⁺ 1.25 mmol/L、dNTP 320 μmol/L、引物1.2 μmol/L、Taq DNA 聚合酶1.5 U。在此基础上，从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物，并通过梯度PCR试验，确定引物最佳退火温度。结论 建立的天门冬ISSR-PCR反应体系，经过17份天门冬种质检验，证明该体系稳定可靠，可用于天门冬遗传分析。