多指标正交试验优选鳖血柴胡的炮制工艺

目的: 优选鳖血柴胡的炮制工艺。 方法: 以柴胡皂苷a,c,d及醇溶性浸出物含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、鳖血用量、炮制温度对鳖血柴胡炮制工艺的影响。采用HPLC测定柴胡皂苷a,c,d的含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~50 min,25%~90%A;50~55 min,90%A),检测波长210 nm。 结果: 炒制时间对炮制工艺具有显著性影响。最佳炮制工艺为150 ℃炮制10 min,加鳖血量0.05 mL ·g^-1。醇溶性浸出物及柴胡皂苷a,c,d质量分数分别为12.42%,0.85%,0.23%,0.90%。 结论: 优选的炮制工艺合理可靠、重复性好,为规范鳖血柴胡饮片的炮制加工提供参考。     

有机硒增强BCG细胞免疫效果的初步探讨

目的:探讨酵母硒(Yeast-based selenium,Se)对卡介苗(BCG)免疫效果的影响.方法:将小鼠分为4组:A组BCG皮内接种 喂硒、B组BCG皮内接种、C组单纯喂硒、D组对照组(control).于接种4周、8周后取单个脾淋巴细胞,通过检测淋巴细胞增殖指数(Stimulation idex,SI)、IL-2、IFN-γ、细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活力及淋巴细胞颗粒酶B及穿孔素的表达量来评价机体抗结核的细胞免疫能力.结果:6项指标A与B组均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组的SI、IL-2、IFN-γ、CTL杀伤活力,免疫4周后分别为2.61±0.24、(172.56±9.34)pg/ml、(131.89±3.32)pg/ml、(43.91±3.21)%(8周值分别为2.32±0.31、(138.04 4-9.67)pg/ml、(129.17±2.41)pg/ml、(39.92±6.45)%,均显著高于B组(4周值:(1.62±0.14)、(134.06±9.60)pg/ml、(105.89±4.62)pg/ml、(30.46±7.97)%;8周值:1.61±0,19、(101.42±7.76)pg/ml、(102.00±5.41)pg/ml、(28.14 ±5.70)%),P＜0.05.结论:BCG与硒酵母有免疫协同作用,能诱导机体产生较强的抗结核的细胞免疫应答反应.     

核酸纯化对蝎型探针定量PCR准确检测结核分枝杆菌DNA的必要性研究

目的探讨经煮沸、Chelex100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测中的有效性,以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的痰标本,对其分别用上述3种方法平行处理后,采用蝎型探针荧光定量PCR法进行检测,并分析其结果。结果核酸纯化法处理的标本阳性检出率为100%,明显高于煮沸法57.14%和Chelex100树脂法52.38%(分别为P=0.0103,P=0.0233);尤其是外观呈血性和菌阴性的标本,采用核酸纯化法处理标本后检测所得结核DNA量较其他方法处理所得量高约1~2个数量级。结论标本的处理对于结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量PCR检测十分重要,煮沸(裂解)法和Chelex100树脂法不适合用以处理临床标本,而应使用核酸纯化法。     

脑挫裂伤手术治疗102例临床分析

目的 探讨脑挫裂伤手术治疗的方法、指证.方法 回顾总结我科2003年1月至2008年8月行手术治疗的脑挫裂伤 102例的临床资料,分析诊治和预后.结果 良好60例(58.8%)中残13例(12.7 %)重残11例(10.8%)植物生存7例(6.9%) 死亡11例(10.8%).结论 严格手术指征,及时实施规范化手术,能有效提高脑挫裂伤的疗效,保证医疗质量.     

肺炎链球菌毒力因子PspA的原核表达、纯化及鉴定

目的:通过构建原核表达载体,获得肺炎链球菌毒力因子PspA重组蛋白.方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将PspA序列克隆到原核表达载体PET-32(a)上,用酶切及测序鉴定.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,进行蛋白纯化,获得的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果:克隆的DNA序列与GenBank中的数据相符,获得的重组蛋白PspA纯度达到90%.结论:成功表达和纯化了PspA,为肺炎链球菌多肽联合疫苗研制和该蛋白的结构生物学分析奠定了基础.     

亚硒酸钠诱导K562细胞凋亡作用及机制探讨

目的:探讨亚硒酸钠诱导K562细胞凋亡的作用及机制.方法:不同浓度亚硒酸钠作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖抑制,电镜和TUNEL法检测K562细胞的凋亡,RT-PCR检测Bcl-2和Bax的mRNA表达变化,分光光度法检测Caspase-3的活性变化.结果:亚硒酸钠能抑制K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡.20μmol/L亚硒酸钠作用K562细胞48h后,Bcl-2表达明显降低,Bax表达明显升高,Caspase-3活性升高,与对照组相比具有显著的统计学意义(P＜0.01).结论:亚硒酸钠能够诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,活化Caspase-3有关.     

复方斑蝥胶囊血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞蛋白质组差异表达分析

目的：考察复方斑蝥胶囊血清对SMMC-7721细胞蛋白质组的影响,从分子水平探讨复方斑蝥胶囊的抗癌作用机制。方法：用血清药理学方法制备复方斑蝥胶囊血清并处理人肝癌SMMC-7721细胞,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定复方斑蝥胶囊对癌细胞中有影响的蛋白质。结果：双向电泳分离到SMMC-7721细胞蛋白质组约450个点,其中47个点在对照组和实验组之间有2倍以上量变,质谱鉴定发现实验组出现膜联蛋白A5、热休克70×10³蛋白表达显著上调,真核翻译起始因子5A和硫氧还蛋白过氧化酶2表达显著下调。结论：研究发现了4种与肿瘤的增殖、免疫、凋亡相关的差异表达蛋白质,为进一步研究复方斑蝥胶囊的作用机制提供了线索。血清药理学与蛋白质组学相结合能够有效地展示与药物作用相关的蛋白质,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台。     

Cys C的原核表达载体构建和鉴定

目的:构建人胱抑素C(Cys C)的原核表达载体,为进一步表达纯化Cys C重组蛋白奠定基础.方法:从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,再将目的基因克隆至PET32a( )表达载体中,构建人Cys C原核表达质粒PET32a( )/Cys C;再将此重组子进行双酶切电泳鉴定和测序鉴定.结果:酶切电泳鉴定结果显示Cys C基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符.结论:获得了人Cys C原核表达质粒PET32a( )/Cys C,为进一步表达和纯化Cys C重组蛋白奠定了工作基础.     

结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究

目的探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制。方法(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率;(2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶BmRNA的表达。结果(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P<0.05),略高于BCG组;(2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P<0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P<0.05),但颗粒酶BmRNA的表达量两组无差异。结论结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关。     

HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究

目的:HtrA基因可编码肺炎链球菌的一种重要蛋白酶,本文目的是探索HtrA基因缺陷对细菌毒力的影响. 方法:用插入复制失活的方式使HtrA基因缺失,通过RT-PCR分析毒力因子表达,并通过动物试验观察HtrA基因缺陷株毒力改变情况. 结果:RT-PCR显示HtrA缺陷株毒力因子表达低于野毒株,两组比较P＜0.05;转化试验发现缺陷菌株转化力下降;小鼠毒力试验表明野毒株半数致死时间22 h,而缺陷株半数致死时间8 d,P＜0.01,有显著性差异;缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野毒株. 结论:HtrA基因缺陷使肺炎链球菌多种毒力因子表达减弱,自然转化能力下降,毒力降低.