名贵动物药材穿山甲的DNA条形码分子鉴定研究

利用COI序列作为DNA条形码对名贵珍稀动物药材穿山甲及其混伪品进行鉴定,为穿山甲药材分子鉴定提供科学依据。该实验采用试剂盒法提取穿山甲及其混伪品的基因组DNA,通过PCR扩增和双向测序,应用CodonCode Aligner软件进行校对拼接,采用MEGA 6.0软件对所有7个物种的56份样品进行序列比对,构建邻接（NJ）树。结果表明穿山甲药材COI序列扩增成功,所构建的NJ树结果显示穿山甲及其混伪品均可明显区分。因此,基于COI序列,应用DNA条形码技术可有效鉴定名贵动物药材穿山甲及其混伪品,为其市场监管提供了新的技术手段。     

基于ITS2条形码鉴定柴胡与大叶柴胡

为准确鉴定柴胡与大叶柴胡,该研究共48份柴胡、大叶柴胡药材,扩增ITS2 序列并进行测序,采用CodonCode Aligner软件进行序列拼接,用软件MEGA5.0分析比对确定不同的单倍型,并基于K2P模型进行遗传距离等分析。采用相似性搜索法、最近距离法、构建邻接树（NJ树）法对柴胡与大叶柴胡进行鉴定。结果显示柴胡与大叶柴胡种间最小K2P距离为0.049,远远大于柴胡种内最大K2P距离0.013。NJ树显示大叶柴胡独自聚为一支,可明显与柴胡区分。因此应用ITS2条形码可以准确鉴定柴胡及大叶柴胡。     

使君子药材产地生态适宜性研究

目的：确定传统儿科用药使君子生态适宜种植区域,为引种扩种和可持续利用提供依据。方法：根据气候相似性原理,应用中药材产地适宜性分析地理信息系统（TCMGIS）对使君子进行产地生态适宜性分析。结果：全国共有17 个省（市、区）为使君子的生态适宜产地。生态相似度100%的区域主要分布于广西、广东、湖南、福建等16 个省（市、区）,总适宜面积为1 012 895.98 km2。其中,广西适宜面积最大（195 313.64 km2）,其次为广东（150 276.36 km2）、湖南（128 925.29 km2）、福建（101 471.16 km2）和云南（100 660.83 km2）。生态相似度95%~100%的区域主要分布于云南、四川、贵州、湖北等16 个省（市、区）,总适宜面积为362 366.25 km2,其中以云南适宜面积最大（92 399.04 km2）,其次为四川（76 122.32 km2）、贵州（43 902.38 km2）、湖北（31 760.32 km2）和江西（29 770.09 km2）。结论：TCMGIS 系统分析的结果与实际调查结果、历史记载及文献报道基本符合。该分析结果可以作为引种地选址的基本依据,但同时也要做好实地调研和田间预实验,并进一步检测药材品质,因地制宜的进行规范化种植。     

药材天麻ITS2 特异性引物的筛选

目的：药材天麻由于隶属于单子叶植物兰科天麻属,天麻中含有大量多糖、蛋白质以及大量次生代谢物质,使其提取的DNA 质量不高,影响后续的PCR 扩增。且ITS2 通用引物在单子叶植物部分物种通用性很差。本研究通过对DNA 提取过程、PCR 扩增过程进行优化,设计出一对用于鉴别天麻药材的ITS2 引物,为中药材天麻的鉴定提供一种新方法。方法：以通用ITS2 引物扩增出的两条序列为研究对象,经Primer Premier 5.0 设计出3 对特异性引物,通过对22 份样品进行研究,筛选出一条高特异性的ITS2引物。结果：在54益的退火温度下,TM2F-2R 对天麻的鉴定效率高达90.9%。结论：TM2F-2R 可作为天麻ITS2 序列的特异性引物,为天麻的分子鉴定提供了一套准确、稳定的鉴定方法。     

基于COI 条形码的鹿类中药材DNA 条形码分子鉴定

目的：利用COI 序列建立统一的鹿类药材分子鉴定方法。方法：对鹿茸、鹿角、鹿鞭、鹿筋、鹿尾、鹿胎分别进行DNA 提取、COI 序列扩增和序列测定,构建鹿类药材COI 序列数据库,并对市售鹿类药材进行调查分析。结果：所有鹿类药材均可以使用COI 通用引物进行PCR 扩增和测序;鹿类药材COI 序列数据库包含8 个物种101 份样品,物种之间相互区分明显;市售40 份药材中18 种为药典规定物种,22种为非药典规定物种。结论：COI 序列的DNA 条形码分子鉴定方法可以作为鹿类药材的统一鉴定方法,并为市售鹿类药材的鉴定提供科学依据。