新生儿血液细菌培养结果分析及质量控制

目的：新生儿血液培养结果分析及质量控制。方法：采集新生儿血液1～5mL注入血液增菌瓶中35℃孵育。按照《全国临床检验操作规程》有关章节进行实验，并收集相关资料进行分析。整个环节规范操作，做好质量控制。结果：细菌检出阳性率17．6％，以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主。结论：新生儿血液细菌感染以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主，应引起重视。试验中做好质量控制，以确保检验结果的准确性。     

Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体的构建及序列分析

目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体,并对序列进行分析,为进行高抗原性的真核表达重组gD蛋白奠定基础.方法PCR扩增HSV1-gD成熟肽基因,将该段基因克隆于pGEM-T克隆载体,转化鉴定后,与巴斯德毕赤酵母表达载体(pPIC9K)酶切连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选测序确定构建了pPIC9K-gD的真核表达载体,对克隆的序列进行分析,预测表达产物的理化特性及抗原性.结果获得了重组的酵母表达载体pPIC9K-gD.测序结果证实为HSV1-gD成熟肽基因,序列分析其高度保守,预测蛋白分子量为40.52 ku,pI为7.67,包含完整成熟肽分值达1.7的多个抗原决定簇.结论成功构建了HSV1-gD成熟肽基因的毕赤酵母表达载体.     

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体蛋白表达的影响

目的 探讨低剂量棉酚与甾体激素联合应用（棉甾联合用药）对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体(AR)蛋白表达的影响。 方法 采用大鼠喂服棉酚12.5mg／(kg&#8226;d)+激素［去氧孕烯125μg／(kg&#8226;d)+炔雌醇25μg／(kg&#8226;d)+十一酸睾丸酮100mg／(kg.d) ］联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察Cdc25A、CyclinB1及AR蛋白表达的变化。 结果 各时间点（6周、8周和10周）激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在顶体和间质中的表达较对照组减弱,均有显著性差异（P＜0.05）。用药6周和8周时,棉酚组、激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在精母细胞中表达较对照组增强（P＜0.05）;用药10周后,只有激素组显著下降（P＜0.05）。各时间点激素组和棉甾联合用药组中CyclinB1在间质细胞中的表达量明显降低(P<0.05),但在圆形精子细胞中的表达量无明显改变。各时间点激素组和棉甾联合用药组间质细胞的AR阳性出现在细胞核,而对照组定位于细胞质。Western blotting结果显示,各用药组大鼠睾丸组织中Cdc25A的表达量与免疫组织化学染色结果的变化趋势基本一致。CyclinB1的含量在各组中无明显差异。 结论 棉甾联合用药影响Cdc25A、cyclin B1和ＡＲ蛋白在生精细胞和Leydig细胞中的表达,进而影响减数分裂和圆形精子的变态过程;甾体激素的重要作用是抑制间质细胞的功能发挥。     

快速检测HSV-ⅡIgM抗体酶联试剂的实验研究

目前检测血清单纯疱疹病毒II型(HSV-Ⅱ)特异性IgM抗体多用间接ELISA法,该方法温育时间多在1 h以上,耗时较长,不适合临床快速诊断和流行病学调查。我们从缩短反应时间着手,建立了检测HSV-II IgM抗体的快速ELISA法。1材料与方法1.1血清标本与试剂23份HSV-II-IgM阳性标本和187份阴性标本由晶美生物工程有限公司进口分装试剂所检测。常规法HSV-II IgM诊断试剂由本单位研制,经一系列试验鉴定,符合中国生物制品标准化委员会编写的中国生物制品规程中的酶联诊断试剂的基本要求;快速ELISA法试剂用棋盘滴定法确定最佳抗原包被浓度…     

快速酶联免疫吸附试验检测TORCH-IgM抗体的研究

目的建立快速检测TORCH-IgM抗体的方法。方法利用聚乙二醇（PEG）能加速抗原、抗体反应的特点，在常规间接ELISA法检测TORCH—IgM抗体基础上，在样本稀释液、酶标记物稀释液中各加入3％PEG，以缩短反应时间。结果温育时间缩短到15min（37℃）的快速ELISA法对检测人TORCH—IgM抗体强阳性、弱阳性、阴性标本具有稳定性好，精密性、特异性强的特点；稀释液中不加PEG的常规15min法，采用37℃、15min试验条件，可能会造成弱阳性标本漏检情况。结论快速ELISA法的建立为TORCH病原体感染的快速检测和流行病学调查提供了新的手段。     

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的影响

目的 研究低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸生精细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响. 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg.d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg.d)+炔雌醇25μg/(kg.d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d)]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过原位缺口末端标记(TUNEL)染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化. 结果 TUNEL染色显示,在正常对照组,阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中.棉甾联合用药组和激素组,阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01).iNOS免疫组织化学显示,在正常对照组,在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性.在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在IX-XII期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达.在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05).iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至最低,3时间点表达量无统计学差别. 结论 iNOS蛋白在低剂量棉酚加甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;生精细胞凋亡数增加,可能与iNOS的表达增多有关.     

心肌线粒体抗体检测在病毒性心肌炎诊断中的临床价值

1994年8月～1996年1月，我们检测了112例病毒性心肌炎（VM）患儿血清中抗心肌线粒体免疫球蛋白G（AMM-IgG），旨在探讨AMM-IgG在VM发病中的作用及其诊断价值。     

HLA-G 14bp插入/缺失多态性与复发流产关联性Meta分析

目的评价HLA-G 14bp基因插入/缺失（In Del）多态性与原因不明复发流产（URSA）的关系。方法检索2016年4月前发表的、来自中国知网（CNKI）、万方数据库、Pub Med和Web of Science的相关文献共384篇,经筛选纳入符合标准文献20篇。采用随机效应模型（REM）和固定效应模型（FEM）,通过Stata 11.0软件进行Meta分析,以OR值和95%置信区间作为衡量标准。结果经过Hardy-Weinberg检验（HWE）及敏感性分析,排除3篇偏离文献。最终纳入URSA患者1 880例,正常对照1 790例。Meta分析结果显示,HLA-G 14bp In Del多态性与URSA（≥2次）的发生无显著相关,但与URSA（≥3次）的发生存在显著相关[等位基因模型I vs.D：OR=1.172,95%CI（1.050~1.308）,POR=0.005,I2=35.4%;显性模型II＋ID vs.DD：OR=1.366（1.001~1.864）,POR=0.049,I2=62.9%;纯合子模型II vs.DD：OR=1.382,95%CI（1.088~1.757）,POR=0.008,I2=23.0%]。以人种分组进行分层分析,HLA-G 14bp In Del多态性与URSA间的关联性在高加索人种和蒙古利亚人种间无显著区别。结论 3次及以上URSA的发生与HLA-G 14bp的插入/缺失多态性存在显著相关性,这种相关性应与欧亚人群种族差异无关。     

基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳的单核苷酸多态性快速检测方法

目的：研究一种简便、快速、灵敏的单核苷酸多态性（SNP）分型方法,使其能够在简单实验条件下进行常规的临床检测。方法基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳技术,设计突变位点的检测探针,通过对检测探针的连接、纯化和通用扩增反应,根据琼脂糖凝胶电泳条带的出现情况判定检测位点的突变类型。以表皮生长因子受体（EGFR）基因的3个 SNP 突变位点 EGFR, c．2573T＞G（L858R）,EGFR,c．2582T＞A（L861Q）和 EGFR,c．2155G＞T（G719C）为检测对象,分别对质粒模板和肺癌血浆循环 DNA 样本进行了检测。结果建立方法操作简便,具有较高的特异性和灵敏度。经过20～30个循环的 PCR 扩增,能够根据扩增条带的有无清晰判断检测位点的基因型。在对不均一样本中混合等位基因检测时,能够最低检测出2．5％的突变型等位基因。本方法和直接测序法分别能够从62例肺癌样本检测出6例和 2例 L858R 位点杂合子突变。结论SNP 突变检测方法适合于在简单实验条件下对不均一样本进行常规突变检测。     

一种β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母中的克隆与鉴定

目的：克隆扣囊复膜孢酵母的β-葡萄糖苷酶基因(BGL1)，为β-葡萄糖苷酶基因的表达作准备。方法：用PCR方法从扣囊复膜孢酵母的总DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶基因连接到pGEM--T载体上，用限制性内切酶切下目的基因，插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中，使之位于α-因子信号肽下游，且与之同框，构建成重组质粒pSHL9K。再将β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母中进行克隆，并进行鉴定。结果：重组pPIC9K转化大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母后，进行酶切和PCR鉴定，证明形成了目的基因的克隆。结论：应用大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母作为受体菌，pPIC9K为载体，成功克隆了β-葡萄糖苷酶基因。