中药炮制传统工艺九蒸九晒的调研、优化及评价

九蒸九晒是中药炮制的特色技术,也是大多数中药发挥作用、减轻或避免副作用的常用手段.在古代医学文献记载的43种需要多次蒸晒的中药品种中,以根类及根茎类药物最多.本研究通过查阅、整理、分析和总结相关文献,以何首乌,黄精以及地黄九蒸九晒过程中的成分变化为突破口,对该领域的研究进展、发展策略和遇到的问题进行分析和探讨,希望能帮助找到中药九蒸九晒的优化方法,实现中药加工过程的合理化和效用最大化.     

流感病毒裂解疫苗接种人体后的安全性和免疫原性研究北大核心CSCD

目的评价流感病毒裂解疫苗经工艺改进后的安全性和免疫原性。方法采用非劣效性研究,选择3～〈18岁受试者240人随机分为2组,接种试验疫苗与进口疫苗,比较其安全性和免疫原性;另选择18～〈60岁受试者360人随机分3组,接种3个连续批次试验疫苗,评价试验疫苗批间免疫效果的一致性。结果试验疫苗接种后不良反应发生率为4.17%,与进口疫苗比较,两组反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）;试验疫苗和进口疫苗各型别抗体阳转率、免疫后血凝抑制（HI）抗体几何平均滴度（GMT）和保护率差异无统计学意义（P〉0.05）;3个连续批次试验疫苗各型别抗体阳转率和免疫后HI抗体GMT差异无统计学意义（P〉0.05）。结论经工艺改进后的试验疫苗安全性和免疫原性良好,批间免疫效果稳定。     

丹参酮ⅡA聚合物脂质纳米粒制备及脑部药物递送研究

目的 为了改善丹参酮Ⅱ_A（TanⅡ_A）的溶解性、增加脑组织中的药物浓度，制备TanⅡ_A聚合物脂质纳米粒（TanⅡ_APLNs）并进行体外释放、药动学、脑组织分布研究。方法 建立TanⅡ_A含量测定的高效液相色谱（HPLC）法，以纳米制剂的包封率和粒径为指标，优化TanⅡ_A-PLNs的制备工艺，分别优化TanⅡ_A与蛋黄磷脂（Egg-PC）的比例、Egg-PC与聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）的比例、有机相与水相的比例；进行TanⅡ_A-PLNs的处方验证、稳定性考察、体外释放考察。建立TanⅡ_A在血浆和脑匀浆中的液-质联用（LC-MS）检测方法。SPF级雄性SD大鼠6只，随机分为2组，给药前12 h禁食，一组ig 25 mg·kg^-1的TanⅡ_A混悬液，另一组尾iv 5 mg·kg^-1的TanⅡ_A-PLNs溶液，于给药后5、15、30、60、120、240、360、480、720 min眼眶取血约0.5 mL，LC-MS法进行药动学检测。取KM小鼠4只，尾iv DiR标记的TanIIA-PLNs，给药30、60、120、240 min后处死解剖，通过荧光成像观察TanIIA-PLNs在组织中的分布情况。取KM小鼠12只，随机分成4组，给药前12 h禁食，尾iv 2.5 mg·kg^-1的TanⅡ_A-PLNs溶液，于给药后30、60、120、240 min处死小鼠，剥离完整大脑组织，称质量，加入2倍超纯水匀浆，LC-MS法检测TanⅡ_A水平。结果 TanⅡ_A-PLNs的最优处方为TanⅡ_A∶Egg-PC为1∶4、Egg-PC∶PLGA为5∶2、有机分散体系∶水分散体系为1∶15。以Egg-PC/PLGA作为脂质纳米粒的膜材，采用纳米粒沉淀法制备的TanⅡ_A-PLNs的平均粒径为272 nm，Zeta电位为-4.93 mV，包封率为88.2%，载药量为18%。在避光、干燥（室温）的条件下TanIIA-PLNs冻干粉稳定。TanIIA原料药在48 h内释放完全，累积释放率为（93.75±0.75）%，与Korsmeyer-Peppas释放方程拟合程度较好； TanIIAPLNs在400 h左右释放完全，累积释放率为（89.44±2.22）%，与零级释放方程拟合度最好。药动学结果表明，大鼠尾iv TanⅡ_A-PLNs给药剂量是ig TanⅡ_A原料药剂量的1/5，TanⅡ_A-PLNs的AUC_0-t和t_1/2ß是TanⅡ_A原料药的2.8和1.5倍。组织分布实验结果显示，30 min时肝组织显示荧光； 60 min时脑组织显示出荧光，120 min时脑组织荧光最强，240 min时脑组织荧光变弱。TanⅡ_A-PLNs给药2 h后，TanⅡ_A脑匀浆质量浓度为235.5 ng·g^-1。结论 制备的TanⅡ_A-PLNs均一稳定，包封率较高，聚合物脂质纳米颗粒的应用提高了TanⅡ_A的血药浓度，可增加药物在脑部的暴露。     

大孔树脂纯化葛根总黄酮工艺研究

目的：优选大孔树脂纯化葛根总黄酮的工艺条件。方法：采用紫外分光光度法测定葛根总黄酮的含量,并对工艺进行评价。结果：以1：2.88药材量AB-8型树脂（干重）为纯化树脂,湿法装柱,＂径高比＂为1：8,提取液上柱浓度为0.5 g药材/mL,上柱流速2 BV/h,吸附后,先用5 BV蒸馏水洗脱杂质,再以5 BV 90%浓度乙醇为洗脱剂,全速洗脱纯化效果最佳。结论：该法简单可行,纯化效果好,能满足于大生产的要求。     

刺五加乙酸乙酯部位对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠肠道菌群的影响

目的 观察刺五加乙酸乙酯部位对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠的影响,探讨其通过调控肠道菌群从而治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法 32只8周龄雄性^-/-小鼠随机分为模型组,瑞舒伐他汀组（10 mg·kg^-1）和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组（75,25 mg·kg^-1）,每组8只。8只C57BL/6小鼠作为空白组。连续给药8周后,取血测定其血脂水平;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测小鼠血清中相关指标含量;苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠主动脉病理形态;收集盲肠内容物采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群。结果 与空白组比较,模型组小鼠斑块面积显著增加并伴有炎性浸润,升高甘油三酯（TG）,总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量,增加炎症因子和血管内皮因子诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）含量,降低高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;与模型组比较,瑞舒伐他汀组和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组能改善小鼠主动脉斑块沉积,降低TG,TC,LDL-C,炎症因子和iNOS含量,升高HDL-C含量。与空白组比较,模型组厚壁菌门和变形菌门相对丰度升高,拟杆菌门相对丰度降低。Alpha和Beta多样性分析显示,各组样本能够显著分离,模型组肠道菌群物种总数和丰度较低;与模型组相比,刺五加乙酸乙酯部位可提高有益菌的相对丰度,降低致病菌的相对丰度。结论 刺五加乙酸乙酯部位主要为黄酮类成分,能够通过调控肠道菌群来治疗动脉粥样硬化,改善高脂饮食喂养ApoE^-/-小鼠主动脉病理变化,作用机制可能与其能够降低炎症因子水平、提高抗氧化能力、修复肠道菌群结构紊乱现象有关。     

基于网络药理学和16SrDNA测序的当归六黄汤合煎与单煎治疗阴虚甲亢作用的差异研究

目的 探讨当归六黄汤的抗阴虚甲亢作用,阐释传统汤剂合煎和单煎的差异。方法 运用网络药理学方法,筛选当归六黄汤的主要活性成分和治疗阴虚甲亢疾病的相关靶点,并对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络分析、基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,构建药材-成分-靶点-通路网络;进一步进行实验验证,构建阴虚甲亢大鼠模型,评价当归六黄汤合煎和单煎对阴虚甲亢大鼠体质量、粪便含水率及相关血清学指标的影响;利用16S rDNA测序技术,揭示合煎和单煎对大鼠肠道微生物群落多样性的影响。结果 筛选获得当归六黄汤方中102个活性成分,检索出与阴虚甲亢有关靶点116个。富集分析获得871条GO条目和158条KEGG相关条目（P<0.05）,其中生物过程（biological process,BP）675条、细胞组分（cellular component,CC）77条、分子功能（molecular fu...     

经典名方甘草泻心汤基准样品的量值传递研究

目的 建立经典名方甘草泻心汤（Gancao Xiexin Decoction,GXD）基准样品的HPLC图谱及指标性成分含量测定方法,研究GXD基准样品量值传递规律。方法 制备15批GXD基准样品,建立特征图谱并选用《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件进行相似度评价,明确特征峰并对其进行归属。测定指标性成分甘草苷、甘草酸、黄芩苷、盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的含量,计算指标成分转移率,分析指标成分在饮片-基准样品中量值传递的规律。结果 15批GXD基准样品指纹图谱相似度均大于0.90,共指认22个共有峰,甘草5个、黄芩5个、甘草和黄芩共有3个、黄连6个、黄芩和黄连共有2个、干姜1个;各指标成分从药材-饮片平均转移率分别为98.69%、98.13%、96.94%、94.59%、91.76%、88.08%、94.16%;饮片-基准样品平均转移率为49.08%、42.24%、28.34%、26.72%、29.32%、33.62%、47.93%。结论 特征图谱与多指标成分含量测定方法相结合,对GXD药材-饮片-基准样品的量值传递过程进行分析研究,为经典名方GXD制剂开发提供参考。     

CO2-超临界流体萃取大黄中蒽醌类成分的工艺研究

目的确定采用CO2-超临界流体法提取大黄中蒽醌类成分的最佳工艺。方法采用正交试验法结合单因素考察法,优选出CO2-超临界流体萃取最佳提取条件,确定最佳工艺。结果确定CO2-超临界流体最佳提取条件为40℃条件下,维持20Mpa压力2h,并以75％乙醇为夹带剂。结论本实验优选的提取工艺合理,CO2-超临界流体萃取法可以用于大黄中葸醌类成分的提取。     

Sonic hedgehog在大肠癌细胞株中表达缺失与其启动子高甲基化有关

目的:研究sonic hedgehog(SHH)在大肠癌细胞株的表达及其调控机制。方法:RT-PCR检测SHH mRNA在大肠癌细胞株HCT-8、SW1116、SW480及LOVO中的表达,去甲基化试验观察5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine)处理细胞株后对SHH mRNA表达的影响,采用亚硫酸盐修饰后测序法检测SHH启动子区甲基化状况。结果:SHH mRNA在HCT-8中仅有弱表达,在SW1116、SW480及LOVO中表达缺失,去甲基化处理后,其表达与对照组相比显著增强(P<0.001);SHH启动子在大肠癌细胞株中为高甲基化状态。结论:SHH在大肠癌细胞株中表达缺失与其启动子高甲基化有关。