右归饮联合MSCs介入治疗早期股骨头缺血性坏死的研究

目的 观察右归饮联合MSCs介入治疗早期股骨头缺血性坏死(avascular necrosis ofthe femoralhead,ANFH)的疗效及促进再血管化、再骨化的作用. 方法 取健康雄性成年毕格犬24只,体重(10.0±0.5)kg,随机分为4组:A组(模型组)、B组(右归饮组)、C组(Mscs介入组)、D组(MSCs介入加右归饮组),每组6只.通过液氮冷冻法建立早期ANFH模型.分离、培养并以BrdU标记MSCs.造模3周后,C、D组动脉灌注标记后的浓度为(0.5～1.0)×106个/mL的MSCs l mL,B、D组每天予右归饮100 mL灌胃,A、C组以100 mL蒸馏水灌胃.连续治疗4周及8周后行股骨头大体观察,DSA和MRI观察股骨头供血血管的数量及直径的变化情况,行组织学及免疫组织化学染色观察VEGF、BrdU阳性表达情况,实时荧光定量RToPCR检测VEGF mRNA表达. 结果 治疗后4、8周,A组股骨头外形扁平,呈蘑菇状;B、C、D组股骨头外形基本正常.DSA观察示C、D组治疗后供血血管分支增粗、增多,原阻塞血管再通.治疗后4、8周,C、D组间血管数和血管直径比较差异均有统计学意义(P<0.05);两组血管直径与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),D组血管数与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05).MRI检查示B、C、D组较A组明显改善,D组尤为明显,TIW略低信号,T2W略低信号,STIR略高信号.组织病理学及免疫组织化学染色示:B、C、D组较A组结构有明显改善,D组较其他各组的VEGF阳性表达率均明显增高(P<0.05),D组较C组的BrdU阳性率、阳性成骨细胞数、阳性血管数表达均明显增高(P<0.05).实时荧光定量RT-PCR检测示:D组较其他各组VEGF mRNA表达量增多(P<0.05),B、C、D组的VEGF表达均高于A组(P<0.05). 结论 右归饮联合MSCs介入治疗早期ANFH疗效显著,可改善坏死股骨头的血供、促进修复、预防塌陷.     

干细胞介入治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的 观察干细胞介入治疗股骨头缺血性坏死的疗效.方法 毕格犬18只,随机分为三组:A组(对照组)、B组(右归饮组)、C组(干细胞介入组)各6只.通过液氮冷冻法,建立毕格犬股骨头缺血性坏死模型.分离、培养并标记骨髓问质干细胞.造模后3周,B组给予右归饮灌胃,A组与C组以蒸馏水灌胃;C组动脉灌注标记后的骨髓间质干细胞(5×106～1×107/ml)1 m1,A组及B组灌注生理盐水.治疗后4周及8周观察股骨头大体、影像学、组织病理学改变,及股骨头供血血管的数量、直径.采用免疫组化染色观察VEGF、Brdu的阳性表达,通过RT-PCR测定VEGF、TGF-β、OPG、RANKL的表达.结果 C组供血血管分支增粗、增多,阻塞血管再通,血管数量增多、直径增大.B组、C组关节软骨、骨小梁的结构和形态较A组改善;免疫组化检测C组VEGF阳性表达率较A组及B组高;RT-PCR检测C组VEGF、TGF-β、OPG表达量较A组及B组多.结论 干细胞介入治疗股骨头缺血性坏死有一定疗效,能改善坏死股骨头血供、促进骨坏死修复.实验结果可为早期治疗股骨头坏死、预防病灶塌陷提供理论依据.     

郑小伟主任医师治疗支气管扩张症经验

郑小伟为浙江中医药大学教授、主任医师、博士生导师,知识渊博,融汇古今,学风严谨,善治疑难杂症,临证30余载,屡起沉疴。在呼吸系统疾病的中医药治疗方面有着丰富的经验和独到的见解,对于支气管扩张症疗效尤为显著,兹将吾师诊治支气管扩张症的经验总结整理如下。1病因病机支气管扩张症是现代医学呼吸系统的一种病名,是慢性支气管化脓性疾病,因支气管及其周围肺组织的慢性炎症导致支气管扩张和变形。归属中医的“咳嗽”、“咳痰”、“咯血”、“肺痈”等病范畴,临床以慢性咳嗽、咯出大量脓痰、反复咯血及经常合并感染为主要特征。因其病程长,…     

疏肝活血止痛散外敷联合常规疗法治疗非特异性肋软骨炎临床研究

目的:观察疏肝活血止痛散外敷联合常规疗法治疗非特异性肋软骨炎的疗效。方法:将90例气滞血瘀证患者随机分为对照组和观察组各45例。2组均口服布洛芬缓释胶囊、复合维生素B片,并施予常规护理措施。观察组同期采用疏肝活血止痛散外敷患处,2组均连续治疗4周。治疗前后应用视觉模拟评分法(VAS)评价胸痛程度,应用健康相关生活质量问卷(SF-12)评价生活质量,应用阿森斯失眠量表(AIS)评价睡眠质量。比较2组的临床疗效与护理满意度。结果:治疗后,观察组临床疗效优于对照组(P0.05)。2组SF-12 8个维度的评分均较治疗前升高(P0.01),观察组8个维度的评分均高于对照组(P0.01)。2组AIS评分均较治疗前下降(P0.01),观察组AIS评分低于对照组(P0.05)。治疗7、14、21、28 d,2组VAS评分均较前一个时间点下降(P0.01),观察组4个时间点的VAS评分均低于对照组(P0.01)。观察组护理满意度高于对照组(P0.05)。结论:在常规西药治疗与护理的基础上加用疏肝活血止痛散外敷治疗非特异性肋软骨炎,可起到较好的止痛效果,减轻了疼痛对睡眠的影响,改善了患者的生活质量。     

右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头血管修复的实验研究

目的：观察右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头的血管修复及疗效,探讨该方法在治疗冷冻坏死股骨头的作用机理。方法：毕格犬24只,随机分为4组：A组（模型组）、B组（右归饮组）、C组（干细胞介入组）、D组（干细胞介入加右归饮组）。液氮冷冻法造模;分离、培养、增殖骨髓基质干细胞（MSCs）;造模完成,C、D组行动脉灌注MSCs 1mL（细胞密度：5×10^6-1×10^7/mL）;术后,B、D组每天予以右归饮100mL;治疗4周及8周后分批处死。采用DSA、病理学,免疫组织化学和RT-PCR观察股骨头坏死修复、血管修复及VEGF、TGF-β表达情况。结果：DSA观察：D组的血管数量及直径较C组明显改善（P〈0.01）;组织病理学及免疫组织化学：各治疗组较A组的结构有明显改善,D组较其他各组的VEGF、TGF-β阳性表达率都明显增高（P〈0.01）;RT-PCR：D组VEGF、TGF-β较其他各组表达量增多（P〈0.01,P〈0.05）,各治疗组的表达都高于A组（P〈0.01）。讨论：右归饮联合干细胞介入法能够促进VEGF、TGF-β的表达增强,能够有效地改善坏死股骨头的血供,促进坏死修复。     

骨髓基质干细胞在骨内示踪方法的研究

目的探讨狗骨髓基质干细胞（MSCs）的骨内示踪技术。方法体外培养、增殖骨髓基质干细胞,并在体外以Brdu、PKH-26标记,将标记好的细胞移植回狗股骨头内,观察细胞的示踪情况。结果Brdu、PKH-26均能有效的标记骨髓基质干细胞,其标记率分别为85％、93％;移植细胞1个月后狗股骨头内可见到明显的Brdu着色的成骨细胞,PKH-26标记法可见股骨头内明显的PKH-26着色,但有染料外渗现象发生。结论Brdu是外源性细胞体内示踪理想的标记方法,PKH-26如能注意要点,也是一种比较有效、实用的标记方法。     

液氮冷冻法诱导犬股骨头缺血性坏死模型MRI影像与病理观察

目的：从MRI影像和病理表现2个方面研究液氮冷冻法诱导的犬股骨头缺血性坏死模型。方法：选取12只健康成年雄性Beagle犬,通过手术暴露其右侧股骨头后用一铁制漏斗套于股骨头,将100～150 mL液态氮倒入漏斗内,并维持冷冻3 min,用37℃温盐水将股骨头复温。左侧股骨作为对照。造模后即开始观察实验犬的一般情况,造模后1个月随机选取6只Beagle犬进行双侧股骨头MRI扫描及病理学检测,造模后2个月对剩余6只Beagle犬进行双侧股骨头MRI扫描和组织病理学检测。结果：①MRI扫描。造模后1个月可见实验侧股骨头内于T1W上出现均质低信号,T2W信号升高,STIR信号升高更为明显,呈散在、点状分布于股骨头内;关节腔内可见少量关节积液;股骨头形态规则,边缘光滑,大小与对侧正常的股骨头一致。造模后2个月实验侧股骨头内于T1W上呈低信号,T2W上呈略高信号,STIR上呈略高信号;关节腔内积液;股骨头边缘不规则,变扁,变小;股骨头碎裂。②组织病理学观察。造模后1个月实验侧骨膜不完整,软骨部分脱落,软骨层变薄,软骨细胞排列紊乱;骨小梁稀疏变细,结构紊乱,有碎片出现,骨细胞陷窝空疏,骨细胞核固缩,部分血管栓塞;骨髓腔内造血组织明显减少,细胞数目及网状结构较正常稀疏,可见到大量脂肪细胞、多形核细胞、炎性细胞浸润,脂肪细胞体积增大,有的融合成泡状。造模后2个月实验侧关节面破坏严重,组织结构紊乱、破碎,关节软骨表层脱落、碎裂,软骨细胞排列紊乱,切线层变薄,同源软骨细胞数减少,软骨下潮线区变薄,钙化带与软骨下骨小梁不连续,呈＂倒钟乳＂状,软骨内可见到破骨细胞性骨吸收,形成髓腔。软骨下血管内可见血栓形成。骨基质中有大量的空骨陷窝,仅见少量骨细胞散在,细胞核固缩偏移。骨小梁稀疏、变细、不完整,出现微骨折,或骨小梁碎裂、紊乱,部分溶解呈片状。破骨细胞散在其间,骨髓组织坏死明显,有纤维组织增生修复,脂肪细胞肥大,也可见到其坏死、崩解后留下的空腔。骨髓内见出血区,造血细胞减少,大量脂肪细胞聚集,部分融合成大泡。结论：液氮冷冻法诱导的犬股骨头缺血性坏死模型符合股骨头坏死病变的一般规律,具有良好的重复性,是股骨头缺血性坏死的理想模型。     

分离培养方法及冻存技术对犬骨髓间充质干细胞生长和增殖的影响

背景：骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏。 目的：建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法。 设计、时间及地点：对照观察细胞学实验，于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成。 材料：健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取。 方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养。将第2代骨髓间充质干细胞与12.5% DMSO混匀置于冻存管中，采用慢冻快融法进行冻存和复苏：将冻存管置于-4 ℃冰箱2 h,然后移入-30 ℃冰箱2 h，再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80 ℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80 ℃冰箱保存。复苏时将冻存管从液氮或- 80 ℃冰箱中取出,立即置37 ℃ 水浴并轻轻摇动, 1~2 min内迅速解冻。 主要观察指标：复苏前后细胞成生长活性及形态变化。 结果：分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强，传代细胞贴壁较快。经过液氮长期冻存后, 将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛。 结论：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞，应用慢冻快融技术进行冻存和复苏，较好的保持了冻存细胞的活力和功能。     

分离培养方法及冻存技术对犬骨髓间充质干细胞生长和增殖的影响

背景：骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化，而失去多分化潜能，因此必须对培养的细胞及时冻存，需要时再进行复苏。目的：建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法。设计、时间及地点：对照观察细胞学实验，于2005-06／2008—06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成。材料：健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞，并进行传代扩增培养。将第2代骨髓间充质干细胞与12．5％DMSO混匀置于冻存管中，采用慢冻快融法进行冻存和复苏：将冻存管置于-4℃冰箱2h，然后移入-30℃冰箱2h，再置于厚壁塑料泡沫盒中，扎紧密封，置-80℃冰箱过夜后，取出冻存管直接放入液氮中保存，或放入-80℃冰箱保存。复苏时将冻存管从液氮或80℃冰箱中取出，立即置37℃水浴并轻轻摇动，1-2min内迅速解冻。主要观察指标：复苏前后细胞成生长活性及形态变化。结果：分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长，贴壁及增殖能力强，传代细胞贴壁较快。经过液氮长期冻存后，将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养，细胞形态及生长状态与冻存前无差异，均呈长梭形均匀分布生长，细胞生长增殖旺盛。结论：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法町获得犬骨髓间充质干细胞，应用慢冻快融技术进行冻存和复苏，较好的保持了冻存细胞的活力和功能。     

股骨头缺血性坏死动物模型的建立及治疗研究进展

中医药治疗股骨头缺血性坏死（ANFH）疗效显著，现将近年来ANFH动物模型的建立方法及中医药治疗方法综述如下。