从兔股骨头中提取总RNA的方法特点

目的:建立一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法。方法:实验于2005-01/2006-01在昆明医学院实验动物中心和中国科学院昆明动物研究所中科院细胞与分子进化重点实验室完成。取健康新西兰大白兔1只,截取其股骨头,迅速置于液氮罐中保存,于研钵中研磨,使骨组织始终保存于液氮中,继续研磨,如此重复3次,然后利用Trizol使骨细胞结构迅速破坏,将粉末转入离心管,室温静置5min。随后加入氯仿等有机溶剂处理、离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA。最后鉴定RNA的质量、纯度及产率,取2μL提取出的RNA在体积分数为0.008的甲醛变性琼脂糖凝胶上进行电泳,主要观察RNA的28S、18S及5S三个条带是否清晰,有无降解和DNA污染。以99μLDEPC水稀释1μLRNA样品,紫外分光光度计测量其吸光度(A)值,A260/A280之比值表示RNA的纯度,同时根据吸光度值计算其质量浓度。结果:①对提取的兔股骨头RNA进行琼脂糖凝胶电泳,可显示清晰的28S、18S两个条带,5S条带亦可见,表明了RNA是完整的。②用紫外分光光度法测定兔股骨头中提取出的RNAA260/A280,结果表明由本法提取的RNA纯度高,无DNA和蛋白质的污染。③经紫外分光光度计吸收定量,每毫克兔股骨头组织能提取1.0～1.2μg的总RNA。结论:本法提取骨组织总RNA方便、快捷,质量高,可用于骨组织的分子生物学研究。     

先天性髋关节脱臼的干预策略进展

目的:总结手术干预先天性髋关节脱臼取得的进展及发展趋势。资料来源:应用计算机检索CNKI1991-01/2004-06相关先天性髋关节脱臼的文章,检索词“先天性髋关节脱臼,手术”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应为先天性髋关节脱臼手术治疗的方法。排除标准:重复研究、综述、Mata分析类文章。未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法。资料提炼:收集到106篇相关文献,20篇文献符合纳入标准。排除的86篇文章中61篇内容陈旧,25篇系重复研究。资料综合:20篇文献中7篇涉及Salter骨盆截骨术的改良,3篇涉及Pemberton手术的改良,2篇涉及联合手术治疗,3篇涉及关节置换术,4篇涉及髋臼成形术和造盖术,1篇涉及有限元分析方法。结论:先天性髋关节脱臼的手术治疗已经取得长足进步,不同术式各有优缺点,掌握好手术指征和适应证可提高手术效果和患者术后功能恢复。计算机技术的引入有助于提高手术质量。     

恒古骨伤愈合剂对骨质疏松症树鼩Wnt/β-catenin信号通路激活作用的实验研究

目的:探讨恒古骨伤愈合剂(osteoking,OK)通过激活Wnt/β-catenin信号通路增加骨形成缓解OP的作用机制。方法:50只雌性树鼩随机分为5组,正常对照组正常喂养,OP模型组去除双侧卵巢每天进行生理盐水灌胃,OK低、中、高剂量组分别给予OK 0.5、1.5、3.0 mL/d灌胃。10周后,检测骨密度(BMD);处死树鼩,取血清和骨骼,ELISA法测定血清雌二醇(E_2)、骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX)的含量;采用RT-q PCR和Western blot法检测骨组织Wnt1和β-catenin的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组树鼩血清E2含量和BMD下降明显(P0.05),CTX、TRACP-5b、OC、PINP和BALP的含量均显著上升(P0.05),经OK治疗后上述现象均改善明显,且具有剂量依赖性;RT-q PCR与Western Blotting结果显示Wnt1和β-catenin的表达水平经OK治疗后均明显升高。结论:OK能够通过增加E_2分泌、抑制骨吸收和促进骨形成增加骨密度缓解OP,其作用机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染兔骨髓间充质干细胞*☆

背景：碱性成纤维细胞生长因子对于创伤修复具有明显的促进作用,但局部应用难以持久地发挥作用。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞后的表达情况。 设计、时间及地点：细胞基因学体外观察,于2009-03/08在云南大学生命科学院完成。 材料：日本大耳白兔1只,购于昆明医学院动物科。pCDNA3.1质粒为美国Invitrogen产品。 方法：抽取兔髂前上棘骨髓,采用贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,待细胞融合至培养瓶底80%时消化传代。参考GeneBank碱性成纤维细胞生长因子cDNA序列设计合成基因,电泳纯化后xholⅠ、BamHⅠ双酶切回收凝胶,以限制性核酸内切酶对PcDNA Vector质粒进行酶切、电泳和凝胶回收,连接碱性成纤维细胞生长因子DNA与PcDNA Vector质粒,构建pCDNA-碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体,运用脂质体转染法将重组体转染至兔骨髓间充质干细胞中,并筛选稳定转染株。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞表面抗原的表达,Western blot法检测目的蛋白的表达。 结果：流式细胞仪检测结果示所培养细胞表面抗原呈CD90,CD44阳性,CD45呈阴性;免疫组化检测结果示骨髓间充质干细胞血管源性细胞表面抗原CD34呈阴性,而相对特异性标记物CD44呈阳性。转染碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞提取的细胞裂解液中,在Mr 23 000处有一条明显阳性杂交带;而转染pCDNA3.1(-)空载体的骨髓间充质干细胞提取蛋白未见阳性条带。 结论：实验成功地将碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞,该目的基因可稳定表达。     

脊柱外科病例管理及功能评定系统的开发

目的:开发适合脊柱外科医师需要的数字化病历管理系统。方法:基于中文WindowsXP系统,运用Access2002进行开发。结果:该系统可以快捷建立、编辑和储存文本、图片、音像、影像和统计资料,并集成了脊柱外科通用的疾病诊断分类、创伤评分、功能判断、生活质量评估标准,以及运动系统正常的生理学、解剖学测量标准,治疗方案模拟系统和疗效评价系统等。通过Internet,该系统还可实现远程医疗合作、远程科研合作和远程病例随访。结论:该系统功能强大,性能稳定,有助于提高脊柱外科临床工作与科研工作的质量与效率,具有广阔的应用前景。     

“融入”而非“隔离”:英国现代精神卫生政策的范式转换

长期以来,精神疾病是困扰人类社会的重要难题.在英国,政府借助于公共政策,介入于精神卫生问题的历史由来已久.纵观英国精神卫生政策的发展历程,"融入"而非"隔离"的理念逐渐成为该领域的主导哲学,并由此引发传统的精神卫生政策向现代精神卫生政策的范式转换.     

双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究

[目的]制备一种双相陶瓷牛物活性骨,并了解其细胞相容性.[方法]分离培养兔骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),将浓度为1×106/ml目的第3代MSCs接种于复合有Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白(bone morphogenetk protein,BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)目的双相陶瓷生物骨(bniphask ceramic bioiogic bone,BCBB)上,联合培养,用倒置差显微镜、扫描电子显微镜观察,测定光密度(OD)值,了解双褶陶瓷牛物活性骨BCBB/BMP/bFGF目的细胞相容性.[结果]BCBB孔内充满Ⅰ型胶原、BMP及bFGF.MSCs在双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF上黏附生长,第6 d时细胞在材料表面形成致密细胞层,增殖达稳定状态.[结论]该研究制备目的双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF具有良好目的细胞相容性.     

云南红河地区哈尼族髋部骨折流行病学调查

目的调查云南省红河地区哈尼族髋部骨折流行病学情况.方法运用国际疾病分类编码第10版（ICD-10）为统一的诊断标准,采取随机整群抽样和调查者入户调查及现场访谈检查的方式对云南省红河地区哈尼族人群进行调查.结果本次共调查25834人,其中发现髋部骨折患者2人,均为60岁以上男性.本次调查60岁及以上人群2543人（男性1144人,女性1399人）中髋部骨折发病率为39.32/10万,患病率为0.79‰.结论云南省红河地区哈尼族髋部骨折发病率、患病率较低.     

国内不同海拔地区中老年妇女骨质疏松的比较研究

目的本研究通过收集分析不同地区提供的骨密度(BMD)数据,探讨不同海拔与BMD的相关性。方法收集近十年来在国内期刊公开发表的文献资料的29个不同海拔地区骨密度检测结果,将BMD用统一的公式转化为同一年龄组的骨密度T值,再进行统计分析。结果不同海拔地区的骨密度存在差异(r=0.32),海拔与骨密度及日照时间存在正相关关系(P0.05)。结论海拔对中老年妇女骨质疏松有重要的影响。