超氧化物歧化酶的体内吸收与超氧化物歧化酶受体

综述了有关肝等细胞内吞SOD过程中的形态学方面的证据和配体印迹等方面的结果,揭示在某些细胞膜表面存在与SOD特异性作用的受体或相关的蛋白质.     

超氧化物歧化酶的体内吸收及超氧化物歧化酶受体

综述了有关肝等细胞内吞ＳＯＤ过程中的形态学方面的证据和配体印迹等方面的结果，揭示在某些细胞膜表面存在与ＳＯＤ特异性作用的受体或相关的蛋白质。     

抗癌胚抗原微型抗体基因在昆虫细胞中的表达

目的获得生物活性更高的癌胚抗原(CEA)微型抗体用于放免显像。方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,经大肠杆菌DH10Bac体内转座,产生重组杆状病毒BacHT-VH-L,将其转染粉纹夜蛾(Tn-5B1-4)细胞,经扩增后在细胞内进行表达。结果SDS-PAGE分析结果表明,在Tn-5B1-4细胞中表达产生一条特异性蛋白质,其分子量为26kd左右;以Westem blot分析表明,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH-L蛋白能特异性的结合CEA,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。     

口服外源SOD的完整生在分子吸收的研究

分别用Ｇｕ＾２＋,降解成多肽的无活性的ＳＯＤ和完整ＳＯＤ对ＩＣＲ小鼠灌胃,发现Ｃｕ＾２＋８不引起血液中红细胞ＳＯＤ的活性变化,而降解后的无活性的ＳＯＤ却能使红细胞中ＳＯＤ活性开高,可见降解后的ＳＯＤ片段可能诱导了内源ＳＯＤ的生成,口服 整的ＳＯＤ也能使其生升高,通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析,找到了完整的ＳＯＤ分子经胃肠吸收、穿过了红细胞膜,进入了红细胞内的证据。     

分泌癌胚抗原肿瘤靶向性Cu,Zn—SOD的基因克隆及表达

将Cu，Zn-SOD与抗癌胚抗原（CEA）单链抗体基因（ScFvgene)融合，重组到含T7启动子的表达载体p ET-22b(＋）中，构建表达质粒pETSOD－ScFv，并转化大肠杆菌BL21（ED3），进行了高效表达，表达物占菌体可溶性总蛋白的18％。SDS－PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为41kD，与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在磊肠杆菌中为分泌型表达，有利于纯化。RIA测定表明产物能特异性地与抗原CEA结合，邻苯三酚法测定也表明产物具有SOD酶的活性，该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗、化疗后的恢复提供新的途径。     

人EC-SOD的克隆及高效表达

将编码人胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a( )中构建表达质粒pET-EC-SOD，表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达3h-5h后，产生较多的重组人EC-SOD，并形成包含体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表明，表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上。经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1200U。将EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞，经扩增后在细胞内进行表达。SOS-PAGE分析结果表明，粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带，Western blot分析表明，该特异条带即为EC-SOD蛋白，连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U。     

口服外源SOD的完整生物大分子吸收的研究

分别用Cu2+,降解成多肽的无活性的SOD和完整SOD对ICR小鼠灌胃,发现Cu2+不引起血液中红细胞SOD的活性变化,而降解后的无活性的SOD却能使红细胞中SOD活性升高,可见降解后的SOD片段可能诱导了内源SOD的生成,口服完整的SOD也能使其活性升高,通过Western-blotting分析,找到了完整的SOD分子经胃肠道吸收、穿过了红细胞膜,进入了红细胞内的证据.     

人GPx1基因的克隆及其序列分析

 目的克隆中国人谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1)的cDNA。方法用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR),以中国人胎盘组织总RNA为模板,扩增中国人谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1)的cDNA,进行序列分析。计算机分析其二级结构并比较已发现的人GPx家族的5种GPx氨基酸序列。结果从中国人胎盘组织中克隆的GPx1基因,与国外文献报道相比,只有1个氨基酸残基发生变异,即leu²²变为Val²²,该变化不影响GPx1活性中心的结构;人GPx的硒结合区及活性中心区域的氨基酸序列是高度保守的。结论首次克隆了中国人体特异的胞质内GPx1基因,为其生物学活性及结构与功能的关系的研究创造了条件。     

抗癌胚抗原微型抗体基因是在昆虫细胞中的表达

目的 获得生物活性更高的癌胚抗原（CEA）微型抗体用于放免显像。方法 将抗癌胚抗微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,经大肠杆菌DH10Bac体内转座,产生重组杆状病毒BacHT-VH－L,将其转染粉纹夜蛾（Tn-5Bl-4）细胞,经扩增后在细胞内进行表达。结果 SDS－PAGE分析结果表明、在Tn-5Bl-4细胞中表达产生一条特异性蛋白质,其分子量为26kb左右;以Western blot分析表明,该特异条带即为VH－L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH－L蛋白能特异性的结合CEA,较大肠杆菌表达物活性更高。结论 昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。