铜胁迫对茅苍术3种药效成分积累及其生物合成2种关键酶基因表达的影响

目的研究铜胁迫对茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮和苍术素积累及其生物合成关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因表达的影响。方法在铜胁迫下,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定茅苍术HMGR、FPPS的表达量;采用高效液相色谱法测定茅苍术3种药效成分的含量;采用SPSS软件对两者进行相关性分析,DPS软件进行灰色关联度分析。结果当铜胁迫在100 mg/kg以内时,茅苍术根茎内FPPS表达量与苍术酮含量略有增加;但铜浓度继续增加时,HMGR、FPPS表达量与3种药效成分含量呈不同程度的下降趋势。铜胁迫下HMGR、FPPS的表达量与β-桉叶醇、苍术酮和苍术素的含量呈显著正相关(P0.05)。灰色关联度分析发现铜胁迫下茅苍术根茎中β-桉叶醇、苍术酮的含量与HMGR、FPPS的表达量关联较大,FPPS基因的表达对β-桉叶醇和苍术酮合成贡献较大,但苍术素含量与这2种关键酶基因的表达关联度较小。结论阐明了铜胁迫下茅苍术2种关键酶基因表达量与3种药效成分含量的变化规律,揭示了铜胁迫下茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮与萜类生物合成关键酶HMGR、FPPS的关系,有助于进一步深入研究铜胁迫下茅苍术药效成分合成的分子调控机制,为提高茅苍术药材的品质提供理论基础。     

茅苍术水溶性成分的HPLC指纹图谱分析

目的:建立茅苍术水溶性成分的HPLC指纹图谱并测定苍术苷A含量,为该药材的质量控制与资源开发提供参考。方法:利用HPLC建立茅苍术的指纹图谱并测定苍术苷A含量,流动相乙腈(A)-0.25%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~17min,2%~5%A;17~25 min,5%~12%A;25~35 min,12%A;35~50 min,12%~17%A;50~70 min,17%~34%A;70~80min,34%~40%A),检测波长221 nm,流速0.6 m L·min-1。采用外标法测定苍术苷A在10批茅苍术药材中含量。结果:建立了茅苍术水溶性成分的HPLC指纹图谱,检出共有峰18个,精密度、稳定性、重复性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均<3%。10批茅苍术水提物中苍术苷A含量较稳定,平均质量分数2.775 mg·g-1。结论:HPLC指纹图谱方法与苍术苷A的含量测定方法准确、稳定、简便,可有效控制茅苍术药材的内在质量。     

利拉鲁肽和格列美脲对胰岛素泵强化效果欠佳2型糖尿病患者疗效的临床研究

目的探讨利拉鲁肽和格列美脲对连续皮下注射胰岛素泵治疗效果欠佳2型糖尿病患者的临床效果。方法选择2017年8月~2018年11月哈励逊国际和平医院治疗的2型糖尿病住院患者166例,随机数表法分为对照组(53例)和观察组(113例)。两组患者均给予连续皮下注射胰岛素泵(胰岛素用量>0.7 IU/kg)治疗1周,血糖仍不达标,对照组联合格列美脲治疗;观察组联合利拉鲁肽治疗,治疗后对患者进行12周随访,比较两组空腹及餐后2 h血糖、胰岛素(INS)、C肽水平。结果治疗12周后,观察组空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)水平及糖化血红蛋白(HbA1C)水平、胰岛素使用量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);空腹及餐后2 h C肽水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组治疗过程中腹泻便秘、低血糖反应、药物过敏、血压一过性升高、肾功能异常发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利拉鲁肽用于连续皮下注射胰岛素泵治疗效果欠佳的2型糖尿病患者,可使患者血糖水平降低,体重明显下降,胰岛素抵抗减轻,有助于改善患者胰岛功能,减少胰岛素用量,值得推广应用。     

针刺治疗慢性咽炎临床观察

【目的】比较针刺与药物治疗慢性咽炎的临床疗效。【方法】将60例患者随机分成治疗组和对照组各30例。治疗组给予滋阴降火、清利咽喉针刺疗法治疗,取穴照海、列缺、天突、廉泉、天容、合谷、鱼际,并依据证候体征加减配穴,每日1次,每周治疗6次;对照组给予西药治疗,包括咽部涂10 mg/L碘甘油制剂和含服西地碘口含片。2组治疗均以4周为1个疗程,共治疗2个疗程。评价2组临床疗效,观察2组治疗前后症状体征积分和慢性咽炎证候不适感等级问卷表评分(VAS)变化。【结果】(1)治疗组总有效率为93.3%,优于对照组的73.3%,组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。(2)治疗后,2组的症状体征积分和VAS评分较治疗前均显著降低(P0.05或P0.01);且治疗组在改善各项症状体征积分和VAS评分方面均优于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。(3)在治疗过程中,治疗组除轻微针刺疼痛、出血外,无晕针、滞针等任何不良反应,对照组也未发现过敏及毒副反应。【结论】针刺疗法可明显改善慢性咽炎患者各项症状体征和不慢性咽炎是咽部黏膜及黏膜下组织、淋巴组织的弥漫性慢性炎症,以咽中不适为主症,咽部常有异物感或干燥灼热感,咽痒欲咳,痰涎黏稠不易咳出,易引起恶心、干呕,偶有轻微咽痛,一般晨轻夜重。本病多因急性咽炎治疗不当、反复发作或邻近组织的慢性炎症所致。此外,过多吸烟、饮酒,粉尘、烟雾及环境污染和有害气体的刺激,教师、演员长期用声过度也是常见的致病因素。本病症状顽固,病程长,缠绵难愈,易反复,对患者生活和工作造成了严重影响。笔者根据多年临床经验发现,在治疗本病过程中,采用滋阴降火、清利咽喉针刺疗法常取得较好的临床疗效,现报道如下。1对象与方法1.1研究对象选择2013年1月至2014年1月在天津中医药大学第一附属医院门诊就诊的明确诊断为慢性咽炎的患者,共60例。其中男性37例,女性23例;年龄20~65岁,平均(44.08±11.81)岁;病程6个月至10年,平均病程(26.20±18.87)个月。按照就诊顺序随机分为治疗组和对照组,每组各30例。适感,其疗效优于药物治疗。     

建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究

泽泻鲨烯合酶(Ao SS)催化法呢基焦磷酸[(farnesyl diphosphate,FPP)]合成鲨烯,是碳源流向原萜烷型三萜生物合成的关键调节酶。为深入研究Ao SS基因的功能及表达,课题组将前期克隆获得的建泽泻鲨烯合酶基因(accession No.JX866770)的开放阅读框(ORF)构建到原核表达载体p Czn1上,并在大肠杆菌BL21(Roseta)中进行诱导表达,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经纯化获得高纯度的目的蛋白;以此目的蛋白进行体外酶促反应验证其功能,其结果显示该目的蛋白具有催化法呢基焦磷酸生成鲨烯的活性;为进一步研究其表达规律,在此基础上,利用该蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体并纯化,ELISA检测抗体效价大于1∶51 200,Western blotting检测表明其具有较好的特异性;用制备得到的抗体免疫检测建泽泻Ao SS在不同组织中的表达情况,结果显示建泽泻块茎中Ao SS表达最高,其次为叶,根中表达甚微。原核表达载体的成功构建、基因功能的进一步验证及快速免疫检测方法的建立,为进一步开展Ao SS基因功能及其调控的研究奠定基础,为泽泻资源性成分原萜烷型三萜的合成生物学应用提供科学依据。     

芡实及其近缘种药材ITS2条形码鉴定研究

目的:应用ITS2条形码鉴定芡实及其近缘种药材。方法:提取20份芡实及其近缘种药材样品基因组DNA,通过PCR扩增ITS2序列并双向测序,测序后用Sequin 12.3提交至GenBank;从GenBank上下载所有芡实及其近缘种30种102条ITS2序列;对提交与下载的122条序列,应用MEGA5.1软件进行序列比对,计算种内和种间距离,采用相似性搜索法、最近距离法进行鉴定分析,并构建NJ系统进化树直观反映鉴定结果。结果:芡实药材ITS2序列长度均为214 bp,为1个单倍型,与其近缘种之间遗传距离较远,NJ树结果显示芡实及其近缘种药材可明显区分开,表现出良好的单系性。结论:ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确地鉴别芡实药材,为保障临床安全用药提供了新的技术手段,为拓宽DNA条形码技术在中药鉴定中的应用进行了新的探索。     

不同产地太子参环肽B含量测定

目的测定并比较不同产地中太子参环肽B的含量,为太子参资源合理开发利用提供参考。方法采用高效液相色谱法测定太子参中环肽B的含量。结果不同产地太子参栽培品中环肽B含量以江苏为最高,安徽宣城、贵州施秉次之,福建柘荣最低,但均低于江苏野生太子参;柘参2号引种到江苏栽培,环肽B含量明显提高。结论不同产地太子参中环肽B的含量差异明显,为太子参的育种、生产及资源利用提供了理论依据。     

茅苍术及其组培栽培品挥发油气质联用分析

目的 研究茅苍术的挥发油,为茅苍术资源的野生抚育及可持续利用提供基础和科学依据.方法 用气相色谱和质谱联用技术测定不同产地茅苍术挥发油,并进行聚类分析.结果 道地产区茅苍术与其组培栽培品聚为一类,其中主要药效成分苍术酮、苍术素、茅术醇、β-桉叶醇相对百分含量没有显著差异,苍术酮和苍术素含量明显高于非道地茅苍术.结论 研究结果体现了茅苍术药效成分道地性的特征,为茅苍术品质评价提供了依据,组培苗可作为人工补种材料.     

不同胰岛素皮下注射方案T2DM患者的血糖变异性比较

比较胰岛素泵治疗血糖达标的2 型糖尿病（T2DM）患者改用不同胰岛素皮下注射方案后的血糖变异性。方法选取住院T2DM 患者360 例,均给予胰岛素泵控制血糖,待血糖控制达标后,随机分为门冬胰岛素联合地特胰岛素（Asp+Det）组、门冬胰岛素30（Asp30组、诺和灵50R（Nov50R）组,每组各120 例。记录患者出院时的一般资料和生化指标,治疗3 个月后来院复查血糖及相关指标,并采用72 h 动态血糖监测系统,获取患者第3 个24 h 内平均血糖（MBG）、最大血糖波动幅度（LAGE）、1 d 内平均血糖波动幅度（MAGE）、血糖变异系数（CV）及空腹血糖变异系数（CV-FPG）。结果①各组3 个月后体重指数、餐后2 h 血糖（2 hPG）及糖化血红蛋白（HbA1c）比较,差异无统计学意义（p >0.05）。Nov50R 组空腹血糖、胰岛素总用量及低血糖发生率均高于Asp+Det组和Asp30组,Asp+Det组和Asp30组比较,差异无统计学意义（p >0.05）;②各组24 hMBG比较,差异无统计学意义（p >0.05）。Nov50R 组和Asp30 组LAGE、MAGE、CV 及CV-FPG 高于Asp+Det 组,Nov50R 组LAGE、CV 及CV-FPG 高于Asp30 组。结论糖尿病患者胰岛素泵治疗血糖达标后改用Asp+Det治疗较单用Asp30 或Nov50R 血糖控制更平稳,且胰岛素用量和低血糖发生率更低。     

针刺安神穴位治疗血管神经性头痛临床观察

[目的]证实针刺安神穴位对血管神经性头痛的疗效。[方法]临床对60例确诊病人进行观察，对比针刺前后脑血管血流阻力、血管弹性。[结果]总有效率为96．67％，针刺后血管搏动指数(PI)、血管阻力指数(RI)显著降低，经统计学分析有意义。[结论]针刺安神穴位可双向调节颅内外血管血流平衡，对治疗血管神经性头痛有效。