苦参碱作用K562细胞表面分化抗原表型的改变

近年来 ,肿瘤诱导分化剂的研究日渐增多 ,从中药和天然药物中寻找和提取诱导分化剂是一种新途径。苦参碱是传统中药苦参的有效成分 ,文献报道具有抗癌活性[1] ,对白血病细胞有抑制生长和诱导分化作用 [2 ]。本课题组在前期研究的基础上 [3,4 ]通过流式细胞仪检测进一步表明 :一定浓度的苦参碱可诱导 K5 62细胞向成熟方向分化 ,并具有多向诱导分化作用。1　材料与方法1 .1　苦参碱 :纯度 99% ,由实验室自备。1 .2　细胞培养 :K5 62细胞在含 1 0 %新生小牛血清的 RMPI- 1 640培养液中传代培养。1 .3　苦参碱对 K5 62细胞的作用 :收集对数生…     

苦参碱诱导 K562 细胞分化相关 cDNA 的克隆

目的 克隆苦参碱诱导人白血病Ｋ５６２细胞分化的相关基因,以求了解白血病分化及苦参碱的作用机制。 以人白血病细胞Ｋ５６２为研究对象,在苦参碱诱导其分化的基础上,利用ｍＲＮＡ差异显示技术对Ｋ５６２细胞在苦参碱诱导前及诱导后４８小时的基因表达情况进行分析。结果 在苦参碱诱导前后Ｋ５６２细胞之间存在明显的基因表达差异。一些基因在诱导后表达增强,而一些基因经苦参碱作用后表达减弱甚至完全抑制。经克隆和筛选获得     

苦参碱的氚标记,鉴定

苦参碱（ｍａｔｒｉｎｅ）是提纯于中药苦参、山豆根等豆科槐属植物的一种生物碱活性成分。经现代研究证实其有多种药理作用,尤以其诱导人类白血病细胞分化引人关注。为探明其作用机制,根据其结构特点、理化性质,并结合研究需要,我们尝试用同位素催化置换法对苦参碱进行氚（３Ｈ）标记。标记结果：放射性总活度（ＲＴＡ）＞１．８５×１０Ｂｑ：放射性比活度（Ｓ）＝１０．０６×１０Ｂｑ／μｇ;放射性化学纯度（ＲＣＰ）＝９５．２％。并对标记产物的理化性能及生物学效应作以鉴定。证明用氚标记苦参碱的方法是成功的,能满足进一步研究的要求。     

中药苦参碱对K562细胞骨架结构与功能的影响(英文)

目的从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法0.1g/L苦参碱处理K562细胞24h前后,采用微管吮吸技术检测其黏弹系数的改变,并运用基因芯片技术分析细胞骨架蛋白基因表达的改变情况。结果0.1g/L苦参碱作用K562细胞24h后:弹性系数K1由725.7±215.1下降432.5±67.2;弹性系数K2由433.1±119.3下降242.5±31.2;黏性系数μ由71.5±38.0下降至49.5±15.3。细胞骨架类基因prefoldin与ezrin的mRNA表达增强。结论苦参碱能够导致K562细胞的骨架结构与功能发生变化。     

C-erbB-2癌基因及其表达产物的检测在临床上的应用

已有大量报道证实C－erbB－2癌基因的扩增及其产物的过度表达与肿瘤的发生、发展及预后联系密切。尤以乳腺癌、卵巢癌等的研究为多。本文简要综述C－erbB－2及其表达产物的检测及临床价值。     

对血清谷丙转氨酶测定中卡门氏单位与国际单位换算的见解

血清谷丙转氨酶(ALT)是诊断肝脏功能的重要指标。在常规检验工作中应用非常广泛。在临床常规应用中,有两种分析方法已被广泛接受:Reit-man—Frankal 法(赖氏法),ALT 活性测定是将反应产物丙酮酸转化为它的苯腙;第二种方法是Karman—Wroblewski 法(偶联酶促紫外监测法),是将 ALT 反应偶联到乳酸脱氢酶(LDH)反应,测定反应的产物。其中偶联酶促紫外连续监测 NADH     

定点突变的人胰岛素原基因在体细胞中的表达

目的　研究在非β细胞中表达成熟胰岛素 ,探讨替代胰岛素注射或胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的方法。方法　采用重叠区扩增基因拼接法 (geneSOEing)自胰岛素原基因组基因中扩增胰岛素原的cDNA ,并于C肽的两端引入蛋白酶furin的识别和切割位点Arg Xaa Lys/Arg Arg ,将获得的突变体重组表达载体 pcDNA3 .1 /C .mINS通过脂质体法转染体外培养的Hela、2 93和L0 2细胞 ,转染后 48、72h取细胞培养液 ;并将L0 2细胞经G41 8(450mg/L)筛选 2个月后 ,得到稳定表达胰岛素的细胞株 ,同时用放射免疫和免疫组织化学的方法监测细胞内外胰岛素的表达水平。结果　成功地对胰岛素原cDNA的 3个位点进行了突变 ,空载体转染的细胞无胰岛素表达 ,而在转染突变后胰岛素原基因cDNA的细胞培养液中胰岛素的表达量各不相同 :每天 8.45～ 1 88.0 0 μIU/2 .0× 1 0 6 Hela细胞、每天 1 59.88～ 2 4 2 .1 4 μIU/ 2 .0× 1 0 6 2 93细胞、每天 2 .56～ 61 .95μIU/ 2 .0× 1 0 6L0 2细胞 ;免疫组织化学显示细胞浆内有囊泡状分泌颗粒。结论　突变的胰岛素原cDNA能成功转染非胰岛β细胞并表达胰岛素     

肝癌相关基因差异表达分析

为了研究肝癌发生和发展的分子机理，用cDNA Microarray技术比较肝癌(HCC)和癌旁组织（nonHCC)基因差异表达情况，并选择4个差异表达基因用RT－PCR验证。在1176个肿瘤相关基因中，491个在HCC中表达，345个在nonHCC中表达。HCC中表达上调的基因172个，表达下调的基因89个，RT－PCR结果与cDNA Microarray的结果基本一致。差异表达最多的基因是与细胞信号传导和细胞分裂相关的基因。肝癌中生长因子及其受体相关基因表达上调，Ras-Raf-MAPK信号传导途径活化，与细胞周期相关基因的异常表达加速了细胞分裂进程。所有这些变化与肝癌的发生和发展密切相关。