肺成纤维细胞三维立体培养条件对肺纤维化组织重塑的影响

背景：组织细胞三维立体培养是肺纤维化破坏与组织收缩研究的理想模型,特别是在纤维化的进展过程中,几种细胞因子如肿瘤坏死因子、白细胞介素、前列腺素、胰岛素以及渗出的血浆成分可能在纤维化的损伤修复和组织重塑中起重要的作用。目的：观察三维立体培养条件下肺成纤维细胞在血清和血清蛋白、胰岛素和细胞因子前列腺素E2、转移生长因子β、肿瘤坏死因子α的细胞外胶原基质收缩和细胞凋亡,探讨肺纤维化过程中细胞因子、胰岛素、血清及血清蛋白对肺组织重塑和纤维化形成的影响。设计：随机对照实验。单位：解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科。材料：实验于2005-08/2006-01在解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科实验室完成。人胚肺成纤维细胞（AmericanTypeCultureCollection）,DMEM培养液和胎牛血清（GIBCO）,胰岛素、转移生长因子（R＆D）,前列腺素E2（Sigma）,Ⅰ型胶原提取自大鼠尾部肌腱。方法：为观察初始浓度对成纤维细胞收缩力的影响及细胞数量对胶原收缩的影响,提取大鼠尾部的胶原,与双蒸水、4×DMEM及成纤维细胞混合成胶原含量为0.75-1.5g/L的立体组织胶原,细胞浓度为0.2×10^7-4×10^7L^-1,置入含体积分数0.05的CO2培养箱37℃培养。每天测定胶原的面积,最后计算终面积与初始面积的比值。将0.01%-0.5%血清、0.1%的血清白蛋白和0.1%球蛋白分别加入到培养液中,观察胶原的收缩。加入10mg/L转移生长因子、10mg/L白细胞介素1、1mmol/L胰岛素和0.1μmol/L前列腺素E2,观察细胞因子对成纤维细胞介导胶原收缩的影响,对胶原中DNA含量进行测定及细胞存活率检测。主要观察指标：不同细胞因子或血清成分对肺成纤维细胞介导胶原收缩的影响,胶原内成纤维细胞数量对胶原收缩的影响,以及不同浓度胶原对胶原收缩和对细胞增殖和凋亡的影响。结果：①胶原的收缩有细胞依赖性,细胞浓度越高则胶原收缩越强烈。②血清和白蛋白的加入引起了剧烈的胶原收缩。③转化生长因子和胰岛素增强胶原的收缩,前列腺素E和白细胞介素1抑制胶原的收缩。④胶原的初始浓度越低,胶原收缩的速度越快越强烈,胶原终面积就越小,其中的成纤维细胞凋亡就越多。结论：肺成纤维细胞介导的胶原收缩可被白细胞介素1和前列腺素E抑制,胰岛素和转化生长因子则促进了胶原收缩。血清及血清成分在受损肺组织的渗出可以导致肺组织胶原的稀释与强烈收缩,而导致成纤维细胞增殖的抑制和凋亡的增加,肺纤维化进一步发展,成为无细胞胶原成分。     

1，6-二磷酸果糖对肺微循环和肺功能的保护性作用

目的：观察内毒素致大耳白兔急性肺损伤过程中的肺微循环障碍及1,6-二磷酸果糖对其的影响,探讨1,6-二磷酸果糖对内毒素所致的兔急性肺损伤的保护性作用.方法：①实验于2003-05/12在解放军总医院呼吸科实验室完成.选用清洁级雄性成年大耳白兔24只.随机将兔分为对照组（静脉注射生理盐水2 mL/kg）、致伤组（将内毒素按500 μg/kg溶于2 mL生理盐水后于5 min内经颈静脉一次注射完毕,随后注射生理盐水1次）、干预组[内毒素使用剂量和方法同致伤组,静注内毒素后缓慢静脉给予1,6-二磷酸果糖（300 mg/kg）的生理盐水溶液],共3组,每组8只.②各组均于静脉注射内毒素前,静脉注射内毒素后0.5,2.0,4.0,6.0 h 5个时间点观察血压、心率及呼吸频率变化,并进行采用自动血细胞分析仪和血气分析仪检测各组兔动脉血氧分压及外周血白细胞数量.静脉注射内毒素后6.0 h按解放军总医院东亚放免所提供试剂盒说明测肺组织血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α和内皮素1的含量.另取右侧膈叶肺组织采用光镜（&;#215;100）和透射电镜做病理学观察.③符合正态分布和方差齐性等条件者做t检验,否则,做秩和检验.结果：兔24只均进入结果分析.①静脉注射内毒素后0.5 h,致伤组兔呼吸频率和心率明显高于对照组（P＜0.01）,血压、动脉血氧分压、白细胞计数明显低于对照组（P＜0.01）.②静脉注射内毒素后4.0和6.0 h,干预组动脉血氧分压明显高于对照组（P＜0.01）,致伤组外周血白细胞数量明显少于对照组（P＜0.05）.③实验后6.0 h,致伤组动物肺组织出现明显的病理损害,肺微血管严重受损.干预组动物肺组织和肺微血管损伤较轻,与对照组相似.致伤组和干预组肺组织血栓烷B2含量明显高于对照组（P＜0.01）.干预组肺组织6-酮-前列腺素F1α含量明显高于对照组和致伤组（P＜0.01）.结论：①经静脉进入体内的内毒素可通过增加血栓烷B2和内皮素1的释放等方式导致肺微循环障碍,进而诱发并加重肺损伤.②1,6-二磷酸果糖则具有改善肺微循环的功能,从而对肺组织起一定的保护作用.     

急性肺损伤中氧化应激反应的变化和1,6-二磷酸果糖的拮抗作用

背景：1，6-二磷酸果糖是细胞内糖代谢的中间产物，具有改善细胞能量代谢、稳定生物膜、抑制炎症细胞因子释放和抗氧化等多种生物学作用。目的：观察内毒素致大耳白兔急性肺损伤过程中氧化应激反应的变化和1，6-二磷酸果糖的拮抗作用，探讨1，6-二磷酸果糖对急性肺损伤的治疗性作用。设计：完全随机分组设计，对照实验。单位：解放军总医院呼吸科。材料：实验于2003—05／2003—12在解放军总医院呼吸科实验室完成。选用清洁级雄性大耳白兔24只。随机将兔分为3组：对照组、致伤组和干预组，每组8只。方法：①对照组：静脉注射生理盐水2mL／kg。致伤组：将内毒素按500μg／kg溶于2mL生理盐水后于5min内经颈静脉插管一次注射完毕，随后注射生理盐水1次（两次液体总量为2mL／kg）。干预组：内毒素使用剂量和方法同致伤组，随后缓慢经静脉注射1，6-二磷酸果糖（300mg／kg）的生理盐水溶液（2次液体总量为2mL／kg）。②各组均于实验0，0．5，2，4，6h后采外周血和动脉血，采用自动血细胞分析仪进行血细胞计数，采用血气分析仪进行血气分析。测定实验6h末，分别采用巴比妥酸比色法和邻苯三酚自氧化抑制法测定兔肺组织中脂质过氧化物的含量和超氧化物歧化酶的活性。另取右侧膈叶肺组织，采用透射电镜做病理学观察。③符合正态分布和方差齐性等条件者做t检验，否则，做秩和检验。主要观察指标：①实验前及实验0．5，2，4，6h后各组兔血气分析和血细胞计数测定结果比较。②实验后6h兔肺组织中脂质过氧化物含量、超氧化物歧化酶活性和肺组织病理学变化。结果：①实验0．5h后．致伤组动物血氧分压和外周血白细胞计数明显低于对照组（t=-4．27，P〈0．01，z=2．64，P〈0．01）；干预组血氧分压和外周血白细胞计数与对照组差异不明显（P〉0．05）；干预组血氧分压明显高于致伤组（t=4．32，P〈0．01）。②实验4h后，干预组动脉血氧分压明显高于对照组和致伤组（t=4．98，2．40，P〈0．01，0．05），致伤组外周血白细胞计数明显低于对照组（z=2．42，P〈0．05）。③实验6h后，干预组动脉血氧分压明显高于对照组（t=3．39，P〈0．01），致伤组外周血白细胞计数明显低于对照组（z=2．16，P〈0．05）。致伤组肺组织脂质过氧化物含量明显高于对照组（t=3．70，P〈0．01）、超氧化物歧化酶活性明显低于对照组（t=-4．12，P〈0．01），肺组织出现明显的病理损害。实验6h后，干预组肺组织脂质过氧化物含量和超氧化物歧化酶活性与对照组比较．差异不明显（P〉0．05），肺组织病理损害较轻。结论：机体氧化应激反应能力的相对不足可以加重氧化损伤，是急性肺损伤发病过程中的重要致病因素；1，6-二磷酸果糖可改善机体的氧化应激反应能力、抑制氧化损伤，对内毒素所致的大耳白兔急性肺损伤具有一定的保护作用。     

呼出气一氧化氮在亚急性咳嗽中的诊疗进展

咳嗽是初级保健中寻求医疗健康最常见的原因之一。亚急性咳嗽病程3~8周,咳嗽是其主要症状,胸部医学影像检查正常。长期咳嗽对患者生活质量会产生影响,而且长时间的咳嗽导致抗生素的滥用。据统计,全世界每年在镇咳药物上的花费为40亿美元。亚急性咳嗽较多是因上呼吸道感染引起,导致支气管黏膜的慢性炎症和广泛的上皮完整性的破坏[1]。     

脓毒症与炎性因子的研究进展

<正>脓毒症(sepsis):指各种感染引起的全身炎症反应综合症,是感染性疾病常见的危重症,死亡率较高,脓毒症的发病是多重因素综合作用的结果,传统的观点认为脓毒症是由炎症反应过度所致。机体受到病原体感染时,病原体表面的抗原被机体炎症效应细胞表面的受体识别,并通过抗原、抗体反应及酶的活化途径,激活细胞内转录因子(如核因子NF-κB),并诱导多种促炎因子和炎性介质的生成及释放[1]。这些促炎因子和介质之间通过正反馈形式     

急性肺损伤中氧化应激反应的变化和1,6-二磷酸果糖的拮抗作用

背景:1,6-二磷酸果糖是细胞内糖代谢的中间产物,具有改善细胞能量代谢、稳定生物膜、抑制炎症细胞因子释放和抗氧化等多种生物学作用。目的:观察内毒素致大耳白兔急性肺损伤过程中氧化应激反应的变化和1,6-二磷酸果糖的拮抗作用,探讨1,6-二磷酸果糖对急性肺损伤的治疗性作用。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:解放军总医院呼吸科。材料:实验于2003-05/2003-12在解放军总医院呼吸科实验室完成。选用清洁级雄性大耳白兔24只。随机将兔分为3组:对照组、致伤组和干预组,每组8只。方法:①对照组:静脉注射生理盐水2mL/kg。致伤组:将内毒素按500μg/kg溶于2mL生理盐水后于5min内经颈静脉插管一次注射完毕,随后注射生理盐水1次(两次液体总量为2mL/kg)。干预组:内毒素使用剂量和方法同致伤组,随后缓慢经静脉注射1,6-二磷酸果糖(300mg/kg)的生理盐水溶液(2次液体总量为2mL/kg)。②各组均于实验0,0.5,2,4,6h后采外周血和动脉血,采用自动血细胞分析仪进行血细胞计数,采用血气分析仪进行血气分析。测定实验6h末,分别采用巴比妥酸比色法和邻苯三酚自氧化抑制法测定兔肺组织中脂质过氧化物的含量和超氧化物歧化酶的活性。另取右侧膈叶肺组织,采用透射电镜做病理学观察。③符合正态分布和方差齐性等条件者做t检验,否则,做秩和检验。主要观察指标:①实验前及实验0.5,2,4,6h后各组兔血气分析和血细胞计数测定结果比较。②实验后6h兔肺组织中脂质过氧化物含量、超氧化物歧化酶活性和肺组织病理学变化。结果:①实验0.5h后,致伤组动物血氧分压和外周血白细胞计数明显低于对照组(t=-4.27,P<0.01,z=2.64,P<0.01);干预组血氧分压和外周血白细胞计数与对照组差异不明显(P>0.05)鸦干预组血氧分压明显高于致伤组(t=4.32,P<0.01)。②实验4h后,干预组动脉血氧分压明显高于对照组和致伤组(t=4.98,2.40,P<0.01,0.05),致伤组外周血白细胞计数明显低于对照组(z=2.42,P<0.05)。③实验6h后,干预组动脉血氧分压明显高于对照组(t=3.39,P<0.01),致伤组外周血白细胞计数明显低于对照组(z=2.16,P<0.05)。致伤组肺组织脂质过氧化物含量明显高于对照组(t=3.70,P<0.01)、超氧化物歧化酶活性明显低于对照组(t=-4.12,P<0.01),肺组织出现明显的病理损害。实验6h后,干预组肺组织脂质过氧化物含量和超氧化物歧化酶活性与对照组比较,差异不明显(P>0.05),肺组织病理损害较轻。结论:机体氧化应激反应能力的相对不足可以加重氧化损伤,是急性肺损伤发病过程中的重要致病因素;1,6-二磷酸果糖可改善机体的氧化应激反应能力、抑制氧化损伤,对内毒素所致的大耳白兔急性肺损伤具有一定的保护作用。     

三维立体培养中H460细胞MMP-2、MMP-9的表达

目的:建立肺癌细胞的三维立体培养模型,测定肺癌细胞在三维立体培养中的基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,研究MMPs在肺癌侵袭与转移中的作用.方法:采用非小细胞肺癌H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,观察癌细胞的生长,同时设置平面培养对照组,用明胶酶谱法测定两组不同时间点MMP-2、MMP-9.结果:H460细胞在立体胶原内生长良好,分泌有MMP-2、MMP-9,且分泌量多于平面培养组.结论:三维立体培养肺癌细胞能清晰地表达MMPs,是研究MMPs在癌细胞的侵袭与转移作用机制的一种可行方法.     

临床诊断肺毛细血管瘤病一例报道并文献复习

肺毛细血管瘤病(PCH)是一种罕见的肺组织内血管增生性疾病,主要病理表现为大量薄壁毛细血管增生并浸润肺泡壁、气道、血管甚至胸膜,偶可侵及纵隔及心包,且增生的毛细血管常沿肺泡壁排列并包绕甚至压迫肺血管,可导致肺小静脉内膜增厚和肺小动脉血管重塑等,患者预后多不良。本文报道了1例PCH患者并复习相关文献以分析其可能的发病机制及诊治要点,以提高临床对该病的认识,减少误诊、漏诊。     

老年肺不张患者的纤维支气管镜检查(附425例纤支镜检查分析)

目的 :对 44 0例老年肺不张探讨。方法 :经纤支镜活检、刷检、涂片、病理确诊。结果 :肺癌发病率最高 ,经纤支镜活检确诊 2 2 0例 ,胸水找到癌细胞 15例 ,共占 5 3 4 %。炎症 16 4例 ,占 37 2 %,肺结核 37例占 8 4 %,支气管结石 4例 ,占1%。结论 :目前临床上纤支镜检查仍为明确肺不张病因的主要手段 ,尤其是临床治疗效果不佳时 ,早期行纤支镜检查获得病理结果非常重要。