蛋白质定量方法的局限性及合理应用

常用的蛋白质定量方法有BCA法、Lowry法、考马斯亮蓝法和紫外分光光度法。试剂盒中,最常用的标准品是牛血清白蛋白(BSA)。本文探讨合理选用蛋白质定量方法及标准品的选择原则。1　材料和方法1.1　试剂　牛血清白蛋白、卵白蛋白、溶菌酶、胰酶抑制剂,均为Sigma公司产品;胃蛋白酶     

CDR1as在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨环状RNA ciR 7(CDR1as)在喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）中的表达及临床意义，并分析CDR1as与miR 7的相关性。方法收集2011—2013年手术切除并病理确诊为鳞状细胞癌的标本61例，同期选取病理确诊为炎症或正常黏膜的癌旁组织（距肿瘤切缘大于0.5 cm）标本48例，采用实时荧光定量PCR方法检测喉癌及癌旁组织中CDR1as、miR 7的转录表达水平。结果Real time PCR显示，在LSCC组织中，CDR1as mRNA表达水平均显著高于癌旁组织（P＜0.001）;miR 7 mRNA表达水平均显著低于癌旁组织（P＜0.0001）; CDR1as在淋巴结转移患者的LSCC组织中表达水平较无淋巴结转移患者的LSCC组织中显著增高(P＜0.01)；CDR1as在不同TNM分期患者的喉癌组织中表达水平差异具有统计学意义(P＜0.05)；CDR1as在LSCC组织中表达水平与患者的预后相关 (P=0.02)；同时，CDR1as表达水平与miR 7表达呈负性相关(r=-0.643，P=0．001)。结论CDR1as参与LSCC的发生和发展，其表达可以作为判断预后的一项指标，CDR1as与miR 7呈现出的一定的相关性，CDR1as可能通过靶向调控miR 7的表达影响喉癌进展。     

防蚴润肤霜防御日本血吸虫尾蚴感染的研究

目的：实验评价新型少肤防护剂一防蚴润夫霜防御日本血吸虫尾蚴感染的效果，并了解其对皮肤的急性刺激反应。方法：采用模拟现场试验方法，分别在小白鼠腹部和尾部涂布防蚴润肤霜，并经泥水浸泡洗刷4-8h后接种日本血吸虫尾蚴，饲养40d解剖小鼠观察感染情况。以小鼠感染率、平均虫荷数和减虫率为评价指标，同时进行皮肤急性刺激试验。结果：防蚴润肤霜涂布小鼠腹部、尾部后减虫率达100％；家兔皮肤急性刺激试验结果为阴性。结论：防蚴润肤霜涂布皮肤后4-8h具有完全防御日本血吸虫尾蚴感染的作用，对皮肤无刺激作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血抗原特异性CD8~+T细胞功能的初步分析

目的评价慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血抗原特异性CD8+T细胞的功能及与临床相关指标的关系。方法采用主要组织相容性复合物(MHC)-抗原肽四聚体标记技术检测CHB患者外周血乙型肝炎病毒(HBV)抗原特异性CD8+T细胞,并对其细胞因子分泌能力进行检测,分析其与临床生化和病毒学指标的关系。结果 35例人类白细胞相关抗原(HLA)-A基因型为A02或A24的患者中有9例患者至少检出1种被四聚体识别的HBV抗原特异性CD8+T细胞,其白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的分泌能力明显低于其自身的外周血总CD8+T细胞。检出抗原特异性CD8+T细胞患者的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平明显高于阴性患者,而HBV DNA水平低于阴性患者。结论 CHB患者外周血抗原特异性CD8+T细胞存在明显的功能缺陷,可能因病毒抗原持续刺激造成功能耗竭,但外周血出现抗原特异性CD8+T细胞仍表明患者体内出现较强抗病毒免疫反应。     

南水北调工程对血吸虫病传播扩散影响的调查

目的 了解南水北调东线、中线工程对血吸虫病传播与扩散的可能性，提出防止血吸虫病传播扩散的防范措施。方法 收集有关南水北调工程进展和影响血吸虫病传播扩散的主要因素资料，座谈工程对血吸虫病传播可能产生的影响并提出防范设想。结果 新建工程对原血吸虫病流行区的疫情扩散问题，主要出现在江苏段工程中的苏中里下河地区、引江济淮工程的安徽巢湖地区、引江济汉工程的湖北四湖地区。而对南水北调能否引起钉螺北移问题，在全球气候变暖的影响下，钉螺有可能向洪泽湖、巢湖周围地区扩散。结论 东线工程中，如能结合血防工程，所产生的社会和经济效益不可估量。否则，极有可能造成已控制地区重新出现血吸虫病流行。     

江苏省243项灭螺工程的费用-效果评价

目的：评价243项灭螺工程费用-效果，为今后灭螺工作提供科学指导。方法：采用现场调查的方法，比较灭螺工程实施前后螺情变化，计算直接投入，以有螺面积下降率作为灭螺效果评价指标，并以有螺面积下降1个百分点的费用为单位进行费用-效果分析。结果：实施灭螺后有螺面积下降率为78.68％，其中江滩地区下降59.93％，其它地区均下降93％以上，不同地区灭螺的费用-效果有较大差别。结果显示药物灭螺有较好的费用-效果，而环境改造灭螺效果好，但费用较大，且费用随环乞讨程度的提高而增加。结论：不同地区不同方法灭螺费用-效果受多种因素影响，灭螺规划必须因地制宜。     

干扰素-β治疗复发-缓解型多发性硬化系统评价

目的评价干扰素-β(IFN-β)治疗复发-缓解型多发性硬化的有效性和安全性。方法检索Cochrane临床对照试验中心注册库、美国国立医学图书馆、荷兰医学文摘、CINAHL、LILACS、PEDRO、中国生物医学文献数据库、临床试验注册中心和世界卫生组织国际临床试验注册平台(检索截止时间:2014年6月);并通过阅读相关论文参考文献,联系参与IFN-β治疗多发性硬化临床试验的研究者和企业,进一步获取研究信息或未发表的数据。由两名评价人员独立筛选研究、提取研究信息和数据、评价偏倚风险。应用Review Manager软件(Version 5.3.3)进行Meta分析,GRADEpro软件评价研究设计和实施过程中的局限性(偏倚风险)、结果的不一致性和不精确性、证据的间接性和发表偏倚对主体证据质量的影响。结果共检索相关文献576篇,阅读标题和摘要后初步筛选出26项研究;进一步阅读全文后纳入5项研究(共2129例复发-缓解型多发性硬化患者:高剂量IFN-β组1076例、安慰剂组1053例)。所有纳入的研究均为IFN-β单药治疗且随访时间≥1年的随机双盲安慰剂对照平行临床试验。大多数研究存在方法学局限性,主要缺陷为随访偏倚风险较高,且数据分析未使用意向治疗原则,仅919例受试者(43.17%)的数据可用于分析随访2年时的主要结局。Meta分析显示,IFN-β可轻微减少随访2年时复发病例数(RR=0.810,95%CI:0.740~0.890;P=0.000)和残疾进展病例数(RR=0.700,95%CI:0.550~0.880;P=0.002);敏感性分析(最差情况的演示分析)显示,IFN-β治疗无效(RR=1.110,95%CI:0.730~1.680,P=0.620;RR=1.310,95%CI:0.600~2.890,P=0.500)。共1581例患者(74.26%)的数据可用于分析随访1年时至少复发1次的病例数(RR=0.740,95%CI:0.590~0.930;P=0.010),绝对危险降低率为13.24%,需治疗的病例数为8例,表明需要治疗8例患者才可防止1例在第1年内复发。但在年复发率方面,IFN-β治疗无效。IFN-β常导致注射部位局部反应、寒颤、发热、肌肉疼痛、流感样症状、头痛、血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平升高等不良事件,但并不增加外周血淋巴细胞和中性粒细胞减少、抑郁、自杀行为或自杀观念的发生。结论高质量证据显示,IFN-β治疗复发-缓解型多发性硬化可轻微降低第1年内的复发病例数,但超过1年的疗效尚不能确定。目前尚无足够证据证明IFN-β在减少残疾进展病例数方面的疗效,尚待高质量的随机对照临床试验评价其长期有效性。     

实时定量PCR应用中的问题及优化方案

实时定量PCR是利用PCR反应过程中所产生的荧光强度进行实时检测的定量PCR反应。目前，该方法已在生命科学领域得到了广泛的应用，本文对其应用过程中存在的主要问题加以分析，探讨优化实验方法。     

实时逆转录-聚合酶链反应绝对定量实验优化的研究

目的　探讨优化实验反应条件 ,使实时逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)绝对定量能获得准确可靠的结果。方法　建立质粒标准品作为外参照 ;以管家基因GAPDH作为内参照 ,并对Mg2 、引物与探针比例、Buffer等进行优化。结果　优化条件后 ,RT PCR反应的扩增效率接近了理论最佳值 ,并可使靶基因与管家基因扩增效率保持一致 ,保证了方法的稳定性和可靠性。结论　为了获得可靠、重复性好的实时RT PCR绝对定量结果 ,应对实验方法进行优化。     

生活饮用水中无机消毒副产物离子色谱法测定

臭氧﹑二氧化氯消毒技术在饮用水中的应用日益广泛,在消毒过程所产生的溴酸盐、亚氯酸盐、氯酸盐和溴化物消毒副产物(disinfection by-product,DBP)安全问题日趋受到人们关注。当饮用水中溴酸盐的浓度>0.05μg/L时,即对人体有潜在的致癌作用〔1〕;氯酸盐和亚氯酸盐的主要危害是对红细胞的影响,引起溶血性贫血,并降低精子的数量和活力〔2〕。国