增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。     

玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗儿童感染后咳嗽的疗效观察

目的对玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗儿童感染后咳嗽的临床疗效进行分析和探讨。方法将我院2011年8月至2013年8月收治的120例感染后咳嗽患儿按随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组60例。治疗组患儿给予玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗,对照组患儿给予孟鲁司特+布地奈德治疗。分析和比较两组患儿的治疗效果。结果治疗组显效38例;有效15例,无效7例;总有效率为88.33%。对照组患儿显效22例,有效18例,无效20例;总有效率为66.67%。两组间的比较具有统计学意义(P<0.05)。治疗组患儿咳嗽缓解时间为(5.6±1.5)d,咳嗽消失时间为(7.1±1.2)d,半年内因感染咳嗽就诊的次数为(1.4±0.9)次。对照组患儿咳嗽缓解时间为(7.0±2.5)d,咳嗽消失时间为(8.6±1.8)d,半年内因感染咳嗽就诊的次数为(2.6±1.7)次。两组间的比较差异显著(P<0.05)。结论应用玉屏风颗粒联合孟鲁司特及布地奈德治疗儿童感染后咳嗽效果显著,安全可靠,可有效降低患儿气道的高反应性,在改善患儿临床症状的同时大大提高了患儿的机体免疫力,值得临床推广使用。     

三种肺炎支原体检测方法的比较

目的比较3种检测肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，Mp）的方法，寻求肺炎支原体的快速、准确和特异的检测手段。方法选择198例社区获得性肺炎（CAP）患者中临床证实的45例肺炎支原体感染者的痰液、血清标本，分别经肺炎支原体培养、肺炎支原体核酸PCR扩增和血清学检测（IgM和IgG），采用Х^2检验比较3种方法的检测结果。结果3种方法检测Mp的阳性率分别为44．4％、71．1％和86．7％和，PCR法与培养法比较差异有显著性（Х^2=17．764，P〈0．001）；血清学与培养法比较差异有显著性（Х^2=6．559，P〈0．01）；PCR法与血清学比较差异无显著性（Х^2=3．269，P=0．071）。结论PCR法和血清学检测是肺炎支原体病原体诊断的有效手段。     

核酸疫苗Sj14-3-3联合CpG和mIL-12免疫小鼠抗日本血吸虫攻击感染的研究

目的 在证明核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上，联合使用CpG和pcDNA3．1（＋）-mIL-12，观察此二种佐剂在攻击感染小鼠的免疫效果及其抗血吸虫感染的保护机制。方法 分别用pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12、pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG、pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG免疫小鼠。攻击感染后6W计数成虫负荷和肝虫卵数；检测免疫后0W、6W和12W小鼠血清总IgG、IgG1和IgG2a水平；检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4；流式细胞术检测免疫鼠脾细胞中CD4^＋和CD8^＋T细胞的比率。结果 pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12和pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG免疫小鼠的减虫率分别为41．2％和28．7％；减卵率分别为52．6％和41．2％。单独使用pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG也有一定的免疫保护作用。保护性免疫主要通过诱导宿主产生CTL、TH1型和体液免疫应答。结论 pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG具有较强的增强核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3抗血吸虫攻击感染作用。     

社区获得性肺炎的病原体调查与药物敏感性分析

目的研究社区获得性肺炎CAP病原体种类、药物敏感性等,为临床有效诊断、治疗提供依据。方法对154名社区获得性肺炎患者的标本进行细菌培养和血清学检测,并进行药物敏感性试验。用PCR检测社区获得性肺炎非典型病原体。结果在社区获得性肺炎患者中多重感染十分常见;在典型病原体感染中,以肺炎链球菌最为常见;在非典型病原体感染中,以肺炎支原体最为常见,非典型病原体感染在8～14岁阶段检出率最高;明确了各种病原体对常用抗菌药物的敏感性。结论明确了该地区社区获得性肺炎的病原谱,及其对药物敏感性的差异,为临床有效治疗提供了依据。     

检验结果危急值报告制度的建立与临床应用

检验结果危急值报告制度是中国医院协会在“患者安全目标”中提出来的。该制度的建立与应用既是检验科实施《医疗机构临床实验室管理办法》的目标之一,也是保障患者医疗质量和医疗安全的需要^[1]。我院自2007年建立和应用检验结果危急值报告制度以来,有效地防止和减少了不良事件、医疗纠纷和事故的发生。     

血清胱抑素C与同型半胱氨酸及脂蛋白(a)和急性脑梗死患者相关性分析

目的探讨急性脑梗死患者血清胱抑素C(Cys C)、同型半胱氨酸(Hcy)、脂蛋白(a)[Lp(a)]的水平变化及临床意义。方法选取急性脑梗死患者54例作为观察组,同时选取同期无脑血管病变患者31例为对照组,比较两组患者空腹血清Cys C、Hcy、Lp(a)的水平差异。结果急性脑梗死组血清Cys C[(1.51±0.75)mg/L]、Hcy[(91.29±9.15)μmol/L]、Lp(a)[(292.11±185.67)mg/L]的水平均明显高于对照组[Cys C:(0.82±0.29)mg/L、Hcy:(13.92±7.07)μmol/L、Lp(a):(177.52±91.29)mg/L](均P0.01)。结论血清Cys C、Hcy和Lp(a)水平升高与急性脑梗死的发生有关。     

金属β-内酰胺酶研究进展

金属β-内酰胺酶是β-内酰胺酶中的B亚群,带有该酶的细菌表现为碳青霉烯类抗生素的耐药,该基因可通过染色体和转移基因在不同种细菌间传递,造成广泛耐药。本篇综述从金属β-内酰胺酶的分类、分子结构、抑制剂,检测方法,流行病学特点和MBL阳性的革兰阴性杆菌感染的处理等方面加以阐述。     

新鲜羊膜移植对大鼠角膜碱烧伤后致炎性细胞因子表达的影响

目的对SD大鼠角膜碱烧伤后行羊膜移植，分别检测碱烧伤及羊膜移植术后角膜上致炎性细胞因子的表达水平，探讨角膜碱烧伤的损伤机制及羊膜的抗炎和免疫调节机制。方法70只SD大鼠，以0．5mol／L的氢氧化钠碱烧伤右眼制作成碱烧伤模型，随机分组，A组（n=32只）为碱烧伤后未行羊膜移植的烧伤对照组，B组为烧伤后立即施行羊膜移植的羊膜移植组（n=32只），另有6只大鼠作为正常对照组即C组（n=6只），术后第1、4、7、10天处死动物，分别在裂隙灯显微镜下对角膜混浊度、角膜新生血管及角膜上皮缺损进行临床评分，取下角膜，酶联免疫吸附实验（ELISA）定量检测致炎性细胞因子IL-1d（interleukin-1α）、IL-6（interleukin-6）和IL-8（in—terleukin-8）的表达水平。结果羊膜移植组角膜上皮缺损、新生血管及角膜混浊度评分第4、7、10天明显低于对照组，在正常角膜中有IL-1α和IL-8的表达，而没有发现IL-6的表达，碱烧伤后IL-1d，IL-6和IL-8均显著表达，IL-1α于烧伤后第4天达到高峰，IL-6和IL-8于第7天达到高峰。羊膜移植组与烧伤对照组比较，羊膜移植组于术后第1、4天能显著降低IL-1α（P〈0．01）的表达水平，第4、7天能显著降低IL-6及IL-8的表达水平（P〈0．01）。结论角膜碱烧伤后早期致炎性细胞因子的过量表达直接关系到急性期角膜炎症，并可能通过激活免疫系统，参与随后的免疫反应，介导免疫损伤。新鲜羊膜移植可以抑制碱烧伤后角膜致炎性细胞因子的过量表达，可能通过调节致炎性细胞1子的表达而发挥抗炎和免疫调节机制。