人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞-软骨-重度联合免疫缺陷鼠模型的研制

目的 建立人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)-软骨-重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型,以骨关节炎滑膜成纤维细胞(OASFs)作对照,探讨RASFs在RA发病中的作用及机制.方法 将培养传代至第4代的RASFs/OASFs经5-溴脱氧尿嘧啶核苷体(5-Brdu)标记后注入可吸收明胶海绵,与人的正常软骨一起移植入SCID小鼠背部皮下,第30天处死模型,剪取移植物和鼠双膝关节作组织学观察,免疫组织化学检测5-Brdu和Vimentin阳性细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中人基质金属蛋白酶(MMP)-3和人白细胞介素(IL)-6含量.统计学方法采用两独立样本秩和检验.结果 ①2组血清中均可检测出人MMP-3,仅在RASFs组检测到1例IL-6.②RASFs组移植的软骨侵蚀程度(0.6±0.7与0.3±0.5)和软骨降解程度(2.3±0.8与1.7±1.0)较OASFs组有增高趋势,但差异均无统计学意义(P＞0.05).③RASFs组鼠膝关节的滑膜增生程度(3.1±0.8与1.7±1.0,P＜0.01)和软骨侵蚀程度(1.6±1.7与0.6±1.4,P＜0.05)均显著高于OASFs组.④在SCID鼠皮下、移植软骨处、鼠膝关节滑膜及骨髓中检测出5-Brdu及Vimentin阳性的SFs.结论 传代培养的RASFs在SCID鼠皮下存活并保持其侵袭性生长的特点,且能迁移至远处关节中诱发关节炎症.     

治疗类风湿性关节炎值得注意的几个问题

作者从临床实际出发,对治疗类风湿性关节炎值得注意的寒与热、补与通、内服与外治三个方面作了辩证的探讨。     

嵌顿痔108例诊治分析

嵌顿痔是肛肠科最常见的急症疾病,本文通过对108例临床病例病理分析,探讨肛门内括约肌痉挛对嵌顿痔的作用及影响以及采用手术治疗方法疗效的分析。     

三水白虎汤对滑膜成纤维细胞增殖及IL-6、IL-17分泌的影响

目的 观察三水白虎汤含药血清对体外培养的类风湿关节炎（RA）、骨关节炎（OA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖及分泌白细胞介素-6（IL-6）、IL-17的影响,探讨三水白虎汤的作用机制。方法 组织块培养法收集RA、OA患者的关节FLS,体外培养传代,取3～6代细胞,加入20%三水白虎汤含药血清培养72 h,MTT法连续检测FLS的增殖率,ELISA法检测上清液中IL-6、IL-17的水平,以来氟米特和生理盐水含药血清作对照。结果 三水白虎汤含药血清对RA、OA FLS增殖有显著抑制作用,同时还能显著抑制RA-FLS分泌IL-17,抑制效率与来氟米特相当;但对RA-FLS的IL-6分泌无影响。对OA-FLS的IL-17、IL-6的分泌均无显著影响。结论 复方中药三水白虎汤能抑制FLS的增殖,并能抑制RA-FLS分泌IL-17,这可能是该方治疗RA的药理机制之一。     

三水白虎汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖的蛋白质组学影响

目的 探讨三水白虎汤(SSBH)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的蛋白质组学影响.方法 组织块培养法收集RA患者的关节FLS,体外传代培养,取3～6代细胞,分别加入SSBH含药血清培养(SSBH组)及加入生理盐水制备的血清培养(对照组).培养72 h后提取细胞总蛋白,用双向凝胶电泳(2-DE)分离细胞总蛋白,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白位点;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对差异蛋白位点进行鉴定.结果 两组FLS蛋白2-DE图谱均出现差异蛋白质点.在差异蛋白表达量超过3倍的蛋白质点中,选取27个差异蛋白位点进行质谱分析,共鉴定出包括表达上升的IL-1受体拮抗蛋白等25种蛋白质.结论 SSBH可能通过上调RA患者FLS中IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,这可能是该方剂治疗RA的药理作用机制之一.     

Felty综合征继发干燥综合征1例报告

１病例报告患者，女，５５岁。因双手对称性关节肿痛６年余；低热１月于１９９６年１０月８日第１次入院。患者于６年前开始出现双手近端指间关节对称性肿痛，晨僵，伴雷诺氏现象。３年前开始右侧腮腺肿大，口眼干燥，唾液少。曾在外院经腮腺造影诊断为干燥综合征，先后服...     

人CD4和HLA-DR0401表达载体转化扩增及其在L929细胞中的表达

背景:转基因小鼠的开发已成为类风湿关节炎动物模型的必然趋势,HLA-DR是通过何种分子机制导致类风湿关节炎的发病是目前研究热点.目的:拟对含有人CD4基因质粒pcDNA3-CD4和含HLA-DR0401基因质粒pLNCX2-DR*0401进行体外转化扩增,并观察其在小鼠成纤维细胞内的表达.设计、时间及地点:开放性实验,于2007-0612008-01在南方医科大学中医药学院实验中心、南方医科大学动物实验中心分步完成.材料:含人CIM基因载体pcDNA3-CD4和含HLA-DR0401基因载体pLNCX2-DR*0401分别由美国宾西法尼亚大学微生物学系和马里兰巴尔的摩县大学生物化学系惠赠.大肠杆菌DH5α为北京天根生化科技有限公司产品.小鼠成纤维细胞(L929)细胞株为南京凯基生物科技发展有限公司产品.方法:取pcDNA3-CD4和pLNCX2-DR*0401质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选培养,挑取阳性克隆菌落进行培养后抽提质粒,并取样进行限制性内切酶鉴定和测序.采用脂质体转染L929细胞,通过流式细胞仪和直接免疫荧光法对人CD4和HLA-DR0401的表达进行检测.主要观察指标:①质粒扩增情况.②质粒酶切及测序鉴定.③质粒转染L929细胞后的表达.结果:经转化扩增后,pcDNA3-CD4、pLNCX2-DR*0401质粒的纯度及浓度均较高.人CD4表达载体经酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且与GenBank一致,HLA-DR0401表达载体酶切鉴定正确,测序鉴定HLA-DRα基因正确.流式细胞仪检测转pcDNA3-CD4载体的细胞约61%呈阳性,直接免疫荧光结果显示人CD4在转基因细胞中得到表达,分布于胞膜及胞质内.流式细胞术检测仅有1%的转pLNCX2-DR*0401载体的细胞呈阳性,直接免疫荧光无特异性荧光检出.结论:成功转化并扩增了人CD4和HLA-DR0401表达载体,并转染小鼠成纤维细胞系L929,为下一步转基因鼠模型的构建奠定了实验基础.