重组GnRH主动免疫对公猪体重及生长激素和IGF-I的影响

目的:探讨重组GnRH六聚体-麦芽糖结合蛋白(MBP-GnRH-6)主动免疫对公猪体重、生长激素和胰岛素样生长因子-I的影响。方法:7头公猪在9周龄时用重组GnRH主动免疫,17周龄时加强免疫,免疫和屠宰前1天称猪体重,酶联免疫分析法检测血清猪生长激素,放射免疫分析法检测血清IGF-I和睾酮水平,Pearson相关分析血清睾酮与IGF-I的相关性。结果:MBP-GnRH-6主动免疫猪血清睾酮浓度显著地低于阳性对照组(P<0.05),体重显著重于阴性对照组(P<0.05),但不影响公猪血清生长激素水平(P>0.05)。在17~21周龄时,免疫组公猪血清IGF-I浓度显著低于阳性对照组(P<0.05),21~25周龄时免疫组公猪血清IGF-I显著高于阴性对照组(P<0.05)。相关分析表明血清睾酮与IGF-I呈正相关。结论:MBP-GnRH-6主动免疫改变了公猪生长性能,增加体重,其作用途径可能是睾酮通过调控血清IGF-I水平来调控的。     

Sox2- R9- EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定

构建、表达、纯化、鉴定Sox2- R9 - EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性.以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET- 28a- EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL...     

连续核移植对异种山羊(Bore)克隆胚胎发育的影响

目的探讨连续核移植与异种山羊克隆胚胎发育之间的关系。方法分别以波尔(Bore)山羊耳部成纤维细胞、山羊-兔异种克隆桑椹胚卵裂球为核供体,以兔卵母细胞为受体,进行连续核移植。结果共构建145枚异种原代重构卵、73枚继Ⅰ代及20枚继II代重构卵,经电融合后,获得重构胚数分别为90、58和14枚,融合率分别为62.1%、79.5%和70%;162枚重构胚在同等条件下进行体外共培养,卵裂率分别为72.2%、75.9%和28.6%,囊胚率分别为10%、13.8%和0%;融合率方面,原代、继I及继II重构卵之间无显著差异(P>0.05);早期发育率无显著差异,但继Ⅰ代重构胚高于原代重构胚,相反,继II代远低于前两者,差异极显著(P<0.01)。结论波尔山羊体细胞核经第1次核移植过程中异种受体卵胞质作用后,比高度分化的体细胞更有利于重构胚的发育,但异种山羊克隆胚卵裂球反复多次暴露在异种卵胞质中,可能不利于细胞核的发育。     

精原干细胞移植的研究进展

睾丸生殖细胞中精原干细胞(SSC)是雄性动物睾丸内惟一向子代传递遗传信息的干细胞,具有高度自我更新和分化潜能,也是雄性动物精子发生的基础.目前SSC移植法是研究精子发生过程的主要手段,也是制作转基因动物,研究基因功能,治疗雄(男)性不孕和保护濒危动物等的关键环节.常用的移植法有睾丸生殖细胞移植法和睾丸组织块移植法,现将用这2种移植法的研究进展作如下综述.     

免疫去势和未去势猪睾丸上生长激素释放肽的定位及其基因表达

目的:探讨生长激素释放肽在猪睾丸中的定位及其基因表达,以及免疫去势对猪睾丸中生长激素释放肽表达的影响.方法:14头9周龄公猪随机分为免疫去势组和对照组(未去势组),25周龄时屠宰,取血清和睾丸组织,放射免疫法检测血清睾酮的水平,免疫组织化学PV-9000两步法确定生长激素释放肽在睾丸中的细胞定位,实时荧光定量PCR法分析睾丸中生长激素释放肽mRNA的变化.结果:免疫去势组猪血清睾酮水平显著地低于未去势组;免疫组织化学显示表达生长激素释放肽的细胞为精原细胞、初级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞,且免疫去势猪阳性细胞数显著多于未去势猪.另外,猪睾丸中有生长激素释放肽mRNA,但免疫去势组与未去势组间差异无统计学意义.结论:猪睾丸中广泛存在生长激素释放肽及其mRNA,免疫去势导致生长激素释放肽的表达增多.     

羊胎盘复方制剂对小鼠免疫功能的影响

目的:研究羊胎盘复方制剂对小鼠免疫功能的影响.方法:将实验小鼠分为羊胎盘复方制剂低、中、高剂量组和空白组,分别进行灌胃给药,检测各组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能和炭廓清能力.结果:复方制剂低、中、高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬能力显著高于空白组,且高剂量组达到了极显著水平;3剂量组小鼠的炭廓清指数与对照组相比没有明显著异,但数值随剂量增加而增大,而中、高剂量组的炭廓清矫正指数与对照组相比达到显著水平.结论:羊胎盘制剂具有提高小鼠机体免疫功能的作用.     

羊胎盘复方制剂对小白鼠免疫功能和缺氧耐受力的影响

目的以山羊胎盘为主要原料配制成胎盘复方制剂,研究其对小白鼠免疫功能与缺氧耐受力的影响。方法雌性小鼠40只随机等量分成羊胎盘复方制剂高(1 g/kg.体重)、中(0.5 g/kg.体重)、低(0.1 g/kg.体重)3个剂量组和1个对照组(生理盐水),灌胃30 d后测定各指标(免疫器官指数、耳重差、中毒与缺氧的存活时间)。结果免疫功能试验中,与对照组相比,高、低剂量组有显著差异(P<0.05),中剂量组有极显著水平(P<0.01)。小鼠脾脏指数与对照组相比,高、低剂量组能显著影响小鼠的脾脏指数(P<0.05)。迟发型变态反应试验中只有高剂量组耳重差与对照组耳重差相比差异极显著(P<0.01);在缺氧耐受力试验中,除中毒存活试验的中剂量组存活时间与对照组相比差异不显著(P>0.05)外,其它剂量组存活时间与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论羊胎盘复方制剂具有提高小鼠机体免疫功能和增强机体缺氧耐受力的作用。     

非繁殖季节应用外源生殖激素诱导母羊发情技术研究进展

本文阐述了诱导发情的定义、机理及重要意义,详细介绍了近年来在非繁殖季节利用外源生殖激素诱导羊发情技术的研究进展,并对诱导发情技术的应用前景进行了展望。     

自制载体冷冻小鼠原核期胚胎效果分析

目的 探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性.方法 首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(open pulled straw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果.其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存.之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析.结果 OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P＞0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P＞0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组.结论 OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的.     

重组GnRH主动免疫公猪的效果及对垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ基因表达的影响

目的:探讨重组GnRH六聚体-麦芽糖结合蛋白(MBP-GnRH-6)主动免疫的去势效果和对垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ mRNA的影响.方法:7头公猪在9周龄时用重组GnRH主动免疫,放免法测血清睾酮浓度,ELISA法测抗体效价,实时荧光定量PCR分析垂体中GnRH受体、FSHβ和LHβ mRNA的变化.结果:重组MBP-GnRH-6主动免疫公猪后,血清GnRH抗体效价显著上升,且降低了外周血清睾酮浓度(P＜0.05),睾丸重量也明显下降((P＜0.01),组织切片显示,曲细精管仅有少数退化的精原细胞.免疫组公猪垂体中FSHβ mRNA和LHβ mRNA显著下降(P＜0.05),GnRH受体mRNA与阉割公猪相比差异显著(P＜0.05),但是与未阉割公猪相比差异不显著(P＞0.05).结论:公猪接种重组MBP-GnRH-6能诱发免疫反应,中和内源GnRH的生物活性,降低了垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ基因表达,且抑制睾酮的合成,从而导致性器官发育受阻.