中国北方汉族CD14 启动子C(-260)T基因点突变及血浆IL-6含量与冠心病的相关性

目的探讨冠心病（CHD）患者CDl4启动子C（-260）T基因点突变情况及血浆1L-6含量变化与CHD的相关性。方法采集115例CHD病人和60例健康人抗凝血，用PCR-RFLP法测定CDl4启动子C（-260）T基因点突变情况，ELISA法检测血浆IL-6含量。结果CHD组CDl4启动子C（-260）T基因点突变频率与对照组无统计学差异（X^2=2．644，P=0．267）；CHD组血浆IL-6水平高于健康对照组（t=3．553。P〈0．01）；CHD病人不同基因型组血浆IL-6含量无统计学差异（F=0．294，P=0．749）。结论CDl4启动子C（-260）T基因多态性可能不是CHD的基因决定性危险因子，但作为炎性因子的lL-6在CHD的发生、发展中起着重要的作用，     

应用酵母双杂交技术筛选与pGBKT7-CT813编码产物相互作用蛋白的研究

目的以pGBKT7-CT813作为诱饵质粒与HeLa细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库进行酵母双杂交试验,以进一步探讨沙眼衣原体包涵体膜蛋白的生物学功能。方法根据STD基因库提供信息设计引物,用PCR法获取目的基因片段CT813,经酶切处理的CT813和pGBKT7质粒,在T4连接酶作用下连接,连接产物转入感受态细胞BL-21,培养后进行菌落PCR验证,对阳性质粒进行测序分析。质粒转化入酵母菌株Y187和AH109中,检测其有无自激活及毒性作用。阳性重组酵母菌株AH109与cDNA文库菌株Y187进行配合,待三叶草（或米奇）形状合子形成后涂布于腺嘌呤、组氨酸、亮氨酸、色氨酸缺陷型培养基和铺有X-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板上初筛,再经过2次筛选,收集阳性菌落。将阳性菌液点种在滤纸上,在液氮中反复冻融2次,然后浸泡在Z缓冲液-β巯基乙醇-X-Gal混合液中室温温育8h。对筛选出的显色阳性菌液进行PCR验证。选取22个PCR阳性菌液提取酵母质粒,将22个质粒再转入感受态细胞E.coli,BL-21,对阳性菌落提取质粒,进行回交试验,对验证阳性的菌落对应的质粒进行测序。结果成功构建了pGBKT7-CT813诱饵质粒,该质粒的表达产物对AH109和Y187均无自激活和毒性作用。将回交试验筛选的阳性菌落对应的质粒进行测序,对测序结果做BLAST检索分析,确定筛选出与pGBKT7-CT813特异性相互作用的基因可能编码的蛋白是：半乳糖凝集素-1（LGALS1）、环腺苷酸应答原件结合蛋白3（CREB3）、核糖体核糖体蛋白L10a（RPL10a）和微管蛋白37E-16（RP1-37E16）。结论筛选出的4种蛋白可能与沙眼衣原体的致病机制相关,但仍需要进一步验证。pGBKT7-CT813编码产物与多种蛋白有相互作用,为进一步研究其生物学功能打下了基础。     

框架式教学法在医学免疫学教学中的应用

目的研究框架式教学法应用于医学免疫学教学的效果。方法以河北北方学院2010级两个医学本科班学生为研究对象,将其分为实验班和对照班,教学之前,先对两个班学生进行免疫学基础知识问卷调查;教学时,实验班采用教师讲授并结合＂框架式＂教学法,对照班采用以教师为主体的传统教学模式。通过对比框架式教学法与传统教学模式对实验班和对照班两个班学生期中和期末考试成绩的影响,分析在课堂教学中实施框架式教学法的教学效果。结果教学前两个班的基础知识差异无统计学意义（P〉0.05）,教学后,两个班期中和期末考试成绩各组分数均呈正态分布,可信度较高。实验班成绩均高于对照班,经统计学处理,分数差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论框架式教学法应用于医学免疫学教学,能够增加学生的学习兴趣和主动性,提高学习效率和教学效果。     

冠心病患者MBL基因启动子区多态性

目的研究冠心病患者甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区-550和-221位点的多态性,探讨冠心病的可能发病机制。方法提取72例冠心病患者(A组)和57例健康对照人群(C组)外周血基因DNA,采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测MBL基因启动子区-550(H/L)和-221(X/Y)位点的多态性,并行非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳对这2个位点的多态性进行分析。结果 A组MBL基因启动子区-550位点基因型H/L、H/H和L/L分别占2.78%、95.83%和1.39%;C组未检测出H/L和L/L基因型,H/H基因型频率为100%;A组和C组在-550位点H/L、H/H和L/L基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MBL基因启动子区-221位点多态性可能与冠心病的发生、发展有关;而-550位点的多态性与冠心病的发生、发展可能不存在相关性。     

糖平煎对2型糖尿病大鼠炎症细胞因子的干预作用

目的:观察糖平煎对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)和血清脂联素(Adip)、瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:采用高糖高脂饲料喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ 30 mg.kg-1)腹腔注射相结合的方法复制T2DM大鼠模型,将T2DM模型大鼠随机分为模型对照组、糖平煎大、小剂量组,以及正常对照组,每组10只。糖平煎大剂量组给糖平煎按生药14.4 g.kg-1.d-1ig,糖平煎小剂量组给糖平煎按生药7.2 g.kg-1.d-1ig,其他两组大鼠给等体积蒸馏水,连续处理4周。观察空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、TNF-α、脂联素和leptin水平的变化,计算胰岛素敏感性指数(IAI)。结果:糖平煎大、小剂量组均能明显降低T2DM模型大鼠的FBG、血清胰岛素、leptin和TNF-α水平,提高Adip活性和IAI,与模型对照组比较有显著差异(P<0.01,P<0.05)。结论:糖平煎可以改善T2DM大鼠的炎症反应,减轻高胰岛素血症,提高胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。     

缺血性脑血管病患者血浆甘露糖结合凝集素检测及其启动子区多态性分析

目的：探讨甘露糖结合凝集素（MBL）血浆含量和存在形式以及启动子区多态性与缺血性脑血管病（ICVD）的关联性。方法：采集81例ICVD患者（ICVD组）和60例健康人群（对照组）抗凝血,ELISA法检测血浆MBL含量,Western blotting法检测血浆MBL寡聚体,SSP-PCR分析MBL启动子区－550（H/L）、－221（X/Y）和+4（P/Q）位点多态性。结果： ICVD组患者血浆MBL含量［(3 372.18±660.90) μg/L ］明显高于对照组［(2 065.29±195.67) μg/L］ (P<0.01);ICVD组患者血浆MBL蛋白单体（约36 000）及寡聚体（约130 000和250 000）表达高于对照组;ICVD组患者与对照组MBL启动子单倍型和基因型构成比均不同,ICVD组患者启动子单倍型HYP（50.62%）和LXP（6.79%）构成比与对照组HYP（34.17%）和LXP（20.83%）构成比比较差异均有统计学意义（P<0.05）。基因型HXP/HYP和 HXP/LYQ仅见于ICVD组,HXP/LXP 和HYP/LXP则仅见于对照组; ICVD组LYQ/LYQ型频数（4.94%）显著低于对照组（15.00%）（P<0.05）。结论：ICVD患者血浆MBL含量及存在形式、启动子单倍型和基因型构成比均与健康人群不同,MBL可能参与了ICVD的发生、发展过程。     

冠心病患者甘露聚糖结合凝集素、肺炎衣原体感染的变化及相关性分析

目的探讨冠心病(CHD)患者血浆甘露聚糖结合凝集素(MBL)含量及肺炎衣原体(Cpn)感染情况及冠心病的可能致病机制。方法采集100例CHD患者和60例健康对照者抗凝血,用ELISA法对血浆中MBL含量及肺炎衣原体(Cpn)IgG进行检测。结果CHD患者血浆MBL含量(3900μg/L)高于健康对照组(2056μg/L)(P<0.01);CHD患者血浆CpnIgG阳性率(51.00%)高于健康对照组(33.33%)(P<0.05);CHD中51例血浆CpnIgG阳性者MBL含量(3819μg/L)与49例血浆CpnIgG阴性者MBL含量(3984μg/L)比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论MBL和Cpn感染与CHD之间存在一定关系,可能参与了CHD的发生、发展过程。Cpn感染阳性和阴性组的MBL含量未显示统计学差异。     

甘露糖结合凝集素与缺血性脑血管病的相关性

目的 检测缺血性脑血管病(ICVD)与甘露糖结合凝集素(MBL)基因单倍型、基因型频率及血浆含量的相关性.方法 采集100例ICVD患者(ICVD组)和60例健康人群(对照组)抗凝血,序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)法检测MBL单倍型,ELISA法检测血浆MBL含量.结果 ICVD组与对照组MBL基因单倍型和基因型构成比均不同(P＜0.05);ICVD组血浆MBL含量明显高于对照组[(3372.18±660.90)μg/L vs.(2065.29±195.67)μg/L](P＜0.01).结论 MBL可能参与ICVD发生发展过程.     

肺炎衣原体0308基因真核表达载体构建及表达检测

目的构建肺炎衣原体AR39株Cpn0308基因真核表达重组质粒,体外转染HeLa细胞并检测表达情况,为Cpn核酸疫苗的研制做准备。方法应用PCR技术从CpnAR39株基因组中扩增Cpn0308全长基因,重组入pcDNA3.1/HisA真核表达载体相应位点,进行酶切鉴定和序列分析后,运用脂质体介导重组质粒转染HeLa细胞,间接免疫荧光技术检测目的蛋白在真核细胞中表达情况。结果 PCR扩增得到393bp的特异性Cpn0308基因,筛选鉴定出pcDNA3.1/HisA-Cpn0308真核表达重组体,序列测定证实与GeneBank登录的CpnAR39株Cpn0308基因一致;间接免疫荧光法检测到重组质粒转染的HeLa细胞能够表达目的蛋白。结论成功构建pcDNA3.1/HisA-Cpn0308真核表达重组体,且该重组体能够在体外真核细胞中表达目的蛋白,为进一步研究CpnDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。