针刺治疗对卵巢早衰大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨针刺与药物治疗对卵巢早衰大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:50只SPF级雌性SD大鼠随机取10只为正常组,其余40只连续5d腹腔注射环磷酰胺30mg/kg,建立卵巢早衰动物模型。将造模成功的35只大鼠随机分为模型组(9只)、药物组(9只)、针刺Ⅰ组(9只)、针刺Ⅱ组(8只)。正常组、模型组不干预;药物组采用乙烯雌酚灌胃治疗,每天1次;针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组分别取不同腧穴进行针刺治疗,每天2次,均治疗4周。治疗结束后,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测各组血清雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体生成素(luteotropic hormone,LH)水平,卵巢组织进行病理苏木精-伊红(HE)染色以及RNA和蛋白提取,分别检测雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptor beta,ERβ)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase/serine/threonine kinase,PI3K)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,PKB,Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA的表达量。结果:大剂量短期内给予环磷酰胺可以建立卵巢早衰动物模型,成功率为87.5%。与正常组比较,模型组大鼠阴道细胞涂片呈雌激素缺乏征象,早期卵泡减少,卵泡结构破坏,成熟卵泡数目减少,血清E2水平明显降低(P0.05),P、FSH和LH水平升高(均P0.05),与雌激素相关的ERβ、PI3K、Akt和mTOR mRNA表达量均降低(均P0.05);与模型组相比,药物组和针刺组成熟卵泡有所增加,血清E2水平明显升高(均P0.05),FSH含量下降明显(均P0.05),相关信号通路的PI3K、Akt和mTOR mRNA表达量呈升高趋势(均P0.05);针刺组与药物组各指标组间比较差异无统计学意义(均P0.05)。结论:针刺治疗卵巢早衰具有一定的优势,并且取得与雌激素相当的治疗效果,作用机制可能与上调PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因和蛋白表达水平有关。     

半夏泻心汤对小鼠Cajal间质细胞表型维持及相关钙离子通道蛋白的影响

目的通过观察小鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)表型变化及相关蛋白,讨论半夏泻心汤调节胃肠运动的细胞分子机制。方法制备半夏泻心汤药物血清,以去离子水灌胃所得血清为对照。取对数生长期的ICC,随机分为空白组、对照组、低浓度组(5%半夏泻心汤药物血清)、中浓度组(10%半夏泻心汤药物血清)和高浓度组(20%半夏泻心汤药物血清),分别给予相应药液,于12小时、24小时和48小时后进行指标检测。采用免疫荧光双染法检测ICC标记蛋白c-kit/α-SMA、c-kit/desmin和c-kit/SMMHC表达,镜下观察半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持的影响;采用免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测ICC中钙离子通道蛋白三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-triphosphate receptors,IP3R)、兰尼碱受体(ryanodine receptor,RyR)、磷脂酶C(phospholipases C,PLC)及其mRNA的表达。结果与低浓度和中浓度组相比,高浓度组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05),α-SMA阳性表达明显减少(P<0.01),SMMHC表达和desmin表达差异不显著(P>0.05)。与药物干预24小时、48小时组相比,12小时组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05);与48小时组相比,12小时组α-SMA阳性表达明显降低(P<0.05);与24小时相比,12小时组α-SMA、desmin和SMMHC平均灰度值无明显差异(P>0.05)。与空白组、对照组比,药物组IP3R、RyR、PLC蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.05)。结论20%半夏泻心汤药物血清干预12小时能显著增强ICC表型的维持,加强c-kit表达,其机制可能与调节钙库受体蛋白IP3R、RyR、PLC表达水平,进而影响相关离子通道蛋白有关。     

半夏泻心汤含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞凋亡相关蛋白表达及eNOS、NO分泌的影响

目的 探讨半夏泻心汤治疗胃肠动力障碍性疾病的可能作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为半夏泻心汤组和去离子水组,每组15只,分别给予半夏泻心汤及去离子水12.15g/(kg·d)灌胃7天,制备半夏泻心汤药物血清及去离子水血清.小鼠胃Cajal间质细胞(ICC)分为空白组,去离子水血清组及5％、10％、15％半夏泻心汤血...     

"阴火"与"客气"的比较分析

"阴火"指脾胃元气虚损,阳气郁闭而产生的内伤之火,可广泛存在于五脏六腑中,或虚或实,寒热错杂."客气"出自于仲景之著,起于中气不足而生寒热.两论对临床治疗寒热错杂型消化道系统症候群均有积极指导意义,"阴火"可谓是对"客气"进一步的继承与发扬.本文从病因病机、病证特点、治则治法入手,对两论作简要分析,以希加深对两论认识,对临床消化道疾病治疗提供新的思路与方法.     

《伤寒论》中炙甘草应为今之炒甘草

《伤寒论》中方剂选药精当、组方严谨、疗效显著,因此在今天也被广泛应用。炙甘草是方中用药频次最多的药物之一,随着炮制技术的发展,今天所用炙甘草是生甘草加入辅料蜂蜜炮制而成,而笔者认为仲景所用炙甘草仅为简单炒制得来,原因有二:一是经查阅文献发现当时对炙字的应用是指火炒或烤义,同时仲景所用药物大多原始,蜜法制药虽早已有之,但将其应用于甘草却是始于唐朝;二是蜜炙甘草后有甘缓、甘壅、腻滞敛邪及滑肠等弊端,原书中对于蜂蜜的应用也是取其延缓药力、滋阴润燥等特点,结合书中疾病病因病机特点,配伍于方中并不恰当。因此结合本书时代背景及组方临证应用特点可认为《伤寒论》炙甘草即是现代的炒甘草。     

白通加猪胆汁汤组方机制新解

《伤寒论》第315条白通加猪胆汁汤治疗少阴下利急症,传统医家对其组方机制以成无己为代表者,认为组方机制多被解释为在白通汤破阴回阳的基础之佐以苦寒的猪胆汁和人尿反佐,为从治之法,防止药性格拒,从而发挥回阳救逆的作用。然原文找不到任何依据说明不用猪胆人尿,就会发生格拒。且假热格拒温度之热,不等于格拒药性之热。猪胆人尿本就可以疏利气机,结合现代药理也可知胆汁以及人尿本就可以用于急救,因此以反佐来解释猪胆人尿在亡阳证中的应用,不仅于理不合,也是对这两种甚至是两类药物的严重低估。本文将对此进行详细论述。     

桂枝汤在复法大方中的运用

桂枝汤因其配伍精妙、应用广泛,被称为"经方第一方".然有麻黄升麻汤、薯蓣丸、鳖甲煎丸、大黄(蔗虫)虫丸等数首方剂,集寒热温凉气血攻补之药于一体,药味复杂,但可视为多首经方组合而成的大复方,且均有桂枝汤之身影.这种组方现象归因于桂枝汤调和营卫之功,营卫二气周流气化,处于动态平衡之中,对人体气、血、津、液的代谢至关重要.本...     

从通法探讨桂枝去桂加茯苓白术汤的病机内涵

中医的治法可概括为八法,汗吐下为通法,温清补为平法,和消为通平并用。通法的过程即人体通过调节气血津液排邪,邪去正伤,阴阳二气同归和谐。本文通过总结贯穿伤寒论全书的通法的基本原理,揭示了28条的病机内涵,同时为研究仲景医学思想和条文提供了新的思路。不仅要研究条文的症候,更要梳理条文内和条文间隐藏的实质,透过现象把握仲景的治疗基本思想,以期更好地理论研究和临床实践。