HGF基因转染脂肪来源干细胞移植改善兔急性心肌梗死后心功能的研究

目的探讨脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)移植和肝细胞生长因子(hepatocyte growthfactor,HGF)基因联合治疗兔急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的疗效及机制。方法家兔30只,复制急性心肌梗死模型。随机分为3组:AMI/ADSC+hHGF组、AMI/ADSC组、AMI未治疗组,每组10只,另外随机选取10只兔作为假手术组。AMI术后3 d,取兔腿部脂肪,分离ADSC培养,流式细胞术鉴定其表面标记。构建pcDNA3.1-hHGF重组表达载体,移植前用脂质体包裹表达载体转染ADSCs,孵育24 h。AMI术后14 d,自体细胞移植,AMI未治疗组接受等量的无血清培养基注射,假手术组只开胸,不注射。细胞移植后28 d,超声心动图检测左室功能指标;取心肌组织,酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织中HGF的含量;计算心肌血管密度和纤维化面积。结果移植后28 d,超声心动图测定显示AMI/ADSC+hHGF组心功能改善明显优于AMI/ADSC组;AMI/ADSC+hHGF组HGF含量高于AMI/ADSC组以及AMI组。AMI/ADSC+hHGF组梗死区血管的数量及心肌纤维化面积等参数明显优于AMI/ADSC组。结论转染肝细胞生长因子基因的脂肪来源干细胞移植可改善兔心肌梗死后的心功能,其疗效明显优于单纯干细胞移植,其可能通过促进血管新生、改善梗死区的血供及抗纤维化效应而起作用。     

曼彻斯特皇家医院访学见闻

2015年4～6月，我们受医院委派至曼彻斯特大学附属曼彻斯特皇家医院，学习英国临床最新诊疗理念和进展，现将一些见闻与大家分享。     

CRUSADE评分指导非ST段抬高心肌梗死患者围手术期抗栓治疗

目的探讨CRUSADE出血评分指导高出血风险的非ST段抬高心肌梗死（non—ST elevation acute myocardial infarction,NSTEMI）患者的围手术期抗栓治疗。方法应用CRUSADE出血评分对接受再灌注治疗的NSTEMI患者进行出血危险分层,分为低出血风险组（CRUSADE出血评分1～30分）及高出血风险组（CRUSADE出血评分41～91分）,共120例,两组患者采取不同的围手术期抗栓治疗方案,观察住院期间、30d的出血事件及主要心血管事件。结果据CRUSADE出血评分,在NSTEMI围手术期高出血风险组与低出血风险组采取不同的抗栓治疗方案,住院期间、30d两组出血事件差异无统计学意义,主要心血管事件无显著差异无统计学意义。结论CRUSADE出血评分有助于优化NSTEMI高危出血患者围手术期的抗栓治疗。     

HGF基因转染脂肪来源干细胞移植改善兔急性心肌梗死后心功能的研究

目的探讨脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSC)移植和肝细胞生长因子(hepatocyte growthfactor,HGF)基因联合治疗兔急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的疗效及其机制。方法家兔30只,复制急性心肌梗死模型。随机分为AMI/ADSC+hHGF组、AMI/ADSC组、AMI未治疗组,每组10只。另外随机选取10只兔作为假手术组。AMI术后3 d,取兔腿部脂肪,分离ADSC培养,流式细胞术鉴定其表面标记。构建pcDNA3.1-hHGF重组表达载体,移植前用脂质体包裹表达载体转染ADSCs,孵育24 h。AMI术后14 d,自体细胞移植,AMI未治疗组接受等量的无血清培养基注射,假手术组只开胸,不注射。细胞移植后28 d,超声心动图检测左室功能指标;取心肌组织,酶联免疫吸附法测定心肌组织中HGF的含量;计算心肌血管密度和纤维化面积。结果 AMI/ADSC+hHGF组各项参数明显优于AMI/ADSC组;AMI/ADSC+hHGF组HGF含量高于AMI/ADSC组以及AMI组。AMI/ADSC+hHGF组梗死区血管的数量及心肌纤维化面积等参数明显优于AMI/ADSC组。结论转染HGF基因的脂肪来源干细胞移植可改善兔心肌梗死后的心功能,其疗效明显优于单纯干细胞移植。可能通过增加干细胞的存活、改善梗死区的血供及抗纤维化效应起作用。     

人员操作差异对便携式血凝仪结果的影响

近年来,随着各类检测仪器和技术的不断发展,血栓与止血检测已从传统手工法发展为自动血凝仪测定,使血栓与止血实验室检测日趋简便,结果更加精确.与此同时不少公司研发了小型POCT设备,可监测口服抗凝药物患者的PT和INR,指导抗凝药用量,使其在安全和有效的浓度范围内.然而,由于POCT受到众多因素影响,检测结果可能出现较大误差.本研究利用美国Hemosense公司生产的英锐血凝仪,对不同专业人员使用血凝仪检测PT及INR结果进行比较,了解人员因素是否对POCT血凝检测结果产生影响.     

糜酶对培养人血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ生成及细胞增殖的作用

目的 拟从细胞水平观察阻断糜酶途径后对人血管平滑肌细胞生成血管紧张素（AngⅡ）及细胞增殖的影响。方法 通过植块培养法获得人脐动脉血管平滑肌细胞，并分组为：①DMEM组（空白培养液对照组）；②AngⅠ组；③AngⅠ＋卡托普利组；④AngⅠ＋糜酶抑素组；⑤AngⅠ＋缬沙坦组。分别阻断血素紧张素转换酶、糜酶和AngⅠ受体，进行细胞计数、细胞增殖指数及培养液中AngⅡ含量的测定。结果 药物干预组较AngⅠ组细胞数量减少（P〈0.01）；糜酶抑素组与缬沙坦组能明显抑制细胞增殖（P〈0.01）；糜酶抑素组的AngⅡ含量明显降低（P〈0．01），缬沙坦组则明显升高（P〈0．01）。结论 糜酶途径在血管平滑肌细胞AngⅡ生成及细胞增殖中起重要作用．     

银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧自由基生成的作用

目的观察银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧自由基(ROS)生成及凋亡的保护作用。方法通过消化法获得HUVECs,传代后干预分为N组(正常对照)、H组(缺氧24 h)、HG组(缺氧前GBE50干预4 h)和HF组(缺氧前总黄酮干预4 h),其中GBE50和总黄酮各有12．5、25．0和50．0μg／mL 3个浓度。采用流式细胞仪测各组ROS水平及早期凋亡率(Annexin V),通过TUNEL测晚期凋亡率,探讨缺氧及GBE50和总黄酮对HUVECs凋亡及其ROS生成的影响。结果①H组ROS水平较N组明显升高(P<0．05),由(9．88±0．97)％升至(29．27±2．21)％;HG各浓度组与H组相比ROS水平均降低,但与N组及H组相比差异均无统计学意义(P值均>0．05);HF各浓度组与H组相比ROS水平均明显下降(P值均<0．05),其中HF组中总黄酮浓度为50．0μg／mL时ROS降到最低,为(7．42±1．81)％。②H组细胞Annexin V阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(9．00±1．00)％升至(18．47±2．53)％:HG 25．0μg／mL时为(10．69±2．08)％,显著降低了HUVECs的Annexin V阳性率(P<0．05);HF各浓度组均能不同程度地降低Annexin V阳性率,但差异均无统计学意义(P值均>0．05),该保护效应在总黄酮浓度为50．0μg／mL时最明显,Annexin V阳性率为(14．25±2．22)％。③H组TUNEL阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(1．28±0．65)％升至(8．59±1．10)％; HG 25．0μg／ml时降至(3．58±0．28)％,HF 50．0μg／ml为(3．06 0．40)％,较H组均明显下降(P值均<0．05)。结论缺氧可导致HUVECS ROS生成增加伴凋亡增多。而GBE50及总黄酮可降低缺氧所致的ROS生成增多及凋亡增加,对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

急性冠脉综合征血清MMP-3水平及其基因启动子区域5A/6A多态

目的探讨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）血清水平及其基因启动子区域5A/6A多态性与急性冠脉综合征（ACS）的关系。方法 ACS组135例,对照组71例。测定MMP-3血清水平,并对MMP-3启动子区域基因测序,分析其5A/6A多态性。结果 ACS组中AMI亚组的MMP-3血清水平高于对照组（P〈0.01）。MMP-3基因启动子区5A/6A单核苷酸多态性（SNP）的基因型在ACS组和对照组的分布有统计学差异（P〈0.05）,在ACS组中5A等位基因频率高于对照组（P〈0.05）。ACS组5A/5A基因型血清MMP-3浓度高于5A/6A基因型血清MMP-3浓度（P〈0.05）;ACS组5A/5A＋5A/6A基因型血清MMP-3浓度高于6A/6A基因型血清MMP-3浓度（P〈0.05）。进行多因子logistic回归分析,发现吸烟、高脂血症、糖尿病、高血压为ACS的主要危险因子,5A/5A＋5A/6A基因型（OR2.11,95%CI1.23～5.11,P〈0.01）亦是ACS发病的独立危险因子。吸烟并携带5A等位基因者较不吸烟携带6A/6A者有5倍的ACS发病风险（P〈0.01）。结论 MMP-3基因启动子区域5A/6A多态性及MMP-3循环水平升高与ACS发病密切相关;MMP-3血清水平受其基因5A/6A单核苷酸多态性的影响;吸烟与MMP-3基因5A/6A多态性对ACS具有协同的影响。     

银杏叶提取物主成分总黄酮对缺氧致内皮功能障碍的保护作用

目的:探讨缺氧对人脐静脉内皮细胞功能的影响及银杏叶提取物主成分总黄酮(flavonoids)在其中的作用。方法:应用流式细胞技术及TUNEL染色等方法探讨缺氧及总黄酮对内皮细胞功能的影响。结果:缺氧干预内皮细胞24h后,细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及早期凋亡(Annexin V)率、晚期凋亡(TUNEL)率均明显增加。缺氧前4h予总黄酮干预后发现,总黄酮50μg.ml-1时可显著降低细胞ROS水平及晚期凋亡率(P<0.05),部分降低因缺氧而升高的早期凋亡率(P>0.05)。结论:缺氧可导致血管内皮功能障碍,而总黄酮可部分或显著逆转缺氧所致的内皮功能障碍,总黄酮对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

29例心室“电风暴”回顾性分析

目的总结分析我院收治的心室"电风暴"患者的病因、治疗及预后等。方法回顾性分析29例心室"电风暴"患者的病例资料、心电图资料等。结果所有患者中,病因以急性冠脉综合征最为多见16例(55.2%),其次为扩张型心肌病(17.2%),其他还包括三度房室阻滞、病毒性心肌炎、高血压性心脏病、致心律失常性右室心肌病和遗传性心律失常等。22例患者(75.9%)发作前有明显诱因。院内抢救成功率为82.8%。8例患者接受植入ICD或CRT-D治疗。2例患者行射频消融术。随访结果显示未行ICD或CRT-D的患者中有2例在院外猝死,植入ICD或CRT-D的患者有4例在随访期内仍有"电风暴"发作。结论急性心肌梗死和缺血状态,均为心室"电风暴"的主要病因及诱因。急性发作时应尽快进行电除颤和电复律以稳定血流动力学。药物治疗首选β受体阻滞剂,待病情稳定后可植入ICD。此外还可酌情考虑射频消融治疗。