大鼠agrin基因实时定量聚合酶链反应的检测方法

目的：agrin基因对神经肌肉接l头的形成、维持起着决定作用，也对神经元轴突的形成、延长、维持有重要作用．其表达产物在机体内分布广泛。设计绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法，并检测其特异性、敏感性和可重复性。 方法：实验于2007—04／11在吉林大学基础医学院三综合实验室和吉林大学第一医院传染科实验室完成。以Primer 3软件设计大鼠agrin基因、ACTB基因mRNA嵌合荧光实时定量聚合酶链反应检测引物，经检索Blast验证特异性，并以Primer5设计构建agrin基因标准品引物。选择清洁级Wistar大鼠交配，获取3日龄乳鼠，取脑，获取mRNA、cDNA，常规反转录一聚合酶链反应获取agrin554个碱基DNA片断。PCR填加T7启动子后，T7 RNA Polymerase合成agrin基因标准品，消化模板。分光光度计测定其浓度，1：5倍比稀释3次；经反转录反应合成agrin基因cDNA标准品，测序验证特异性。以ACTB引物反转录cDNA，1：5倍稀释3次，构建ACTB基因标准品。常规聚合酶链反应确定、优化反应条件。标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性，融解曲线验证检测方法的特异性，作重复性检测。 结果：①agrin基因有意义链引物序列：GAA GGC CAG GTG CGA ATC A，反义链引物序列：CAC AGG TAG CAG TGG AGC CAA G，内标：ACTB基因有意义链引物序列：GGA GAT TAC TGC CCT GGC TCC TA，反义链引物序列：GAC TCA TCG TAC TCC TGC TTG CTG，优化反应条件：95℃变性5S，60℃退火20S，72℃延伸20s。②agrin基因、ACTB基因标准品所获得的标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性均〉0．95。③聚合酶链反应产物电泳、测序、实时定量聚合酶链反应融解曲线证明特异性高、重复性好、灵敏度达到精确定量要求。 结论：绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法可以作为大鼠agrin基因mRNA检测的标准方法。     

额叶型痴呆患者脑组织的病理改变特征:1例报告

背景额叶型痴呆患者脑组织的病理改变尚有争议,文章通过1例已死亡痴呆患者脑组织的病理研究,提出额叶型痴呆脑组织病理改变特征.目的拟证实一种非常见的伴有痴呆的神经系统变性疾病--额叶型痴呆.设计病例分析.单位吉林大学第一医院神经内科.方法对1例进行性痴呆患者死后3 h进行脑部解剖检查,系列的组织染色及PrP,tau蛋白等免疫组织化学染色.主要观察指标①临床症状.②头部CT和脑电图检查结果.③脑部解剖检查结果.④免疫组织化学染色结果.结果①进行性神经、精神症状,病程为3年.②头部CT示双侧额叶灰质萎缩,脑电图呈阵发性全导联,长间歇期(＞ 2 s)的高波幅慢波.③脑质量1 050 g,脑萎缩仅限于额叶,未累及颞叶.④额叶灰质从第2层开始神经细胞大量脱失伴明显胶质增生,而锥体细胞相对完好.Beilschowsky及Gallyas染法无异常发现.⑤神经细胞及胶质细胞内未发现任何包涵体.⑥PrP,tau蛋白免疫组织化学染色呈阴性反应.结论该病例为典型额叶型痴呆,今后在分析伴有痴呆的神经系统变性疾病时,应想到此类型痴呆.     

天龙液对实验性自身免疫性肌炎豚鼠模型中肝脏损伤的治疗作用

目的 采用多发性肌炎(PM)的豚鼠模型,检测血清肝功指标及肝脏病理变化,并观察天龙液对肝脏损害的治疗作用.方法 用兔肌肉匀浆加完全佛氏佐剂免疫注射豚鼠造成实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型,将EAM豚鼠随机分为4组模型组,对照组(给予生理盐水10 ml·kg-1·d-1),泼尼松组(给予泼尼松3 mg·Kg-1·d-1治疗)和天龙液组(给予天龙液3 750 mg·Kg-1·d-1治疗),比较各组间血清肌酶、肝功指标及肝脏病理改变.结果 模型制作后血清ALT、AsT、GGT显著升高(P＜0.05),肝脏病理出现轻度炎性改变;天龙液组治疗后肝脏损害改变好转(P＜0.05).结论 EAM豚鼠出现肝功改变,天龙液对此肝脏损害有治疗作用.     

神经系统疾病长期护理的国家服务标准

英国新的国家服务标准为患神经系统疾病患者的长期护理工作制定了服务质量标准,旨在提高患者对神经系统疾病的早期认识,增加其自我管理及独立生活的能力,减少辅助的程度,以帮助患者重返家庭和事业。这个为患神经系统疾病患者长期护理工作所设的新的国家服务标准(NSF)已于2005年     

家族性淀粉样变性周围神经病的发病机制研究进展

家族性淀粉样变性周围神经病(familial amyloid polyneuropathy,FAP)是一种具有遗传性的淀粉样变性类疾病,以常染色体显性遗传为特征,并具有广泛的种族分布.疾病最初表现为周围神经病及自主神经功能障碍,但随着病情的逐渐进展而导致越来越多的脏器受累.在欧洲,1952年葡萄牙人就首次报道了该病,到1994年为止,共有489个葡萄牙家系的约1233名患者被确诊为FAP.在20世界60、70年代,瑞典和日本分别出现了FAP家系,并证实他们的祖先具有葡萄牙血统[1].     

朊蛋白病相关的细胞因子

朊蛋白病中,活化的胶质细胞释放的细胞因子在神经元变性、死亡的过程中起着重要作用,与朊蛋白病有关的细胞因子包括白细胞介素、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β、趋化性细胞因子等,对这些细胞因子的研究对于疾病的预防、诊断及治疗有着重要的意义。     

超敏C反应蛋白变化与缺血性脑卒中的研究

目的探讨超敏C反应蛋白（hs—CRP）在缺血性脑卒中发病过程中的变化及其与预后的关系。方法采用免疫比浊法动态检测82例缺血性脑卒中患者及20名正常对照者的hs—CRP变化,分析hs—CRP与梗死面积大小,病情和预后的相关性。结果缺血性脑卒中患者hs-CRP水平与病情及预后关系密切,其中大面积梗死组hs-CRP升高,持续时间长,神经功能缺损程度越重,预后越差;与中、小面积梗死组比较,差异有非常显著统计学意义（P〈0．01）。结论缺血性卒中患者hs-CRP水平可作为判断病情及预后的客观指标,hs—CRP越高,持续时间越长,预后越差。     

经脑活检确诊的疑难病例(附5例报告)

本文收集1989年3月～1990年3月在我科住院的疑难病症5例,本组病人的临床症状和体征都很不典型,虽经多方面检查,并经过全科会诊,仍不能确诊,最后经脑活检确诊,为总结经验,报告如下。例1男,69岁。1989年3月7日入院。病人于住院前3个月无明显诱因出现糊涂,记忆力减退,对熟悉的人不认识,性情急燥,易激动。查体:血压20/14kPa,体温36.5℃,脉博80次/分。神志清楚,反应迟钝,眼底乳头境界清楚,记忆力差,远近记忆力均减退,判     

经肌肉活检证实的进行性脊肌萎缩症1例报告

脊肌萎缩症(spinal muscular atrophyr,SMA)是运动神经元病中一个相对少见的类型,多具有遗传性.根据发病年龄和临床表现可分为4型,即急性婴儿型、婴儿后期型、少年型和成年型,特别是成年型更少见.成年型脊肌萎缩症多为近端肌肉受累,因而与常见的肌萎缩侧索硬化患者远端手部肌肉受累明显不同,临床容易误诊.     

急性有机磷中毒小鼠血肌酶水平的变化及其意义

目的 研究急性有机磷中毒(AOPP)小鼠血肌酶水平的变化及其意义.方法 将152只鼠龄为8周的雄性昆明小鼠分为正常对照组(8只)、生理盐水对照组(10只)及AOPP组(135只);AOPP组分为染毒后30 min、2 h、4 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d及7 d亚组并分笼(15只/笼).腹腔注射氧化乐果(50 mg/kg)和阿托品(10 mg/kg).在各时间点随机取AOPP组各亚组中的8只小鼠进行血胆碱酯酶(CHE)、血清肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)水平检测,并与正常对照组和生理盐水对照组比较.对染毒后1～4 d肌无力小鼠与肌力正常小鼠的血肌酶水平进行比较.结果 与正常对照组及生理盐水对照组比较,AOPP组染毒后30 min～3 d亚组血 CHE水平明显降低(均P<0.05),4 d、7 d亚组血CHE水平与正常对照组差异无统计学意义.各时间点亚组血AST、CK、LDH水平明显增高(均P<0.05);AOPP组发生肌无力小鼠的血AST、CK、LDH水平显著高于肌力正常小鼠(均P<0.05),而血CHE水平差异无统计学意义.结论 AOPP中毒小鼠的血肌酶水平显著升高,发生肌无力小鼠的血肌酶水平高于肌力正常小鼠.提示血肌酶水平可作为判断中间期肌无力综合征(IMS)发生的监测指标.