FG020326通过增加泰素帝介导caspase-8和3激活的敏感性克服多药耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性

背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)的主要特征是具有药泵功能的P-gp的高表达,近来研究发现P-gp还抑制caspase依赖方式凋亡,使MDR细胞免于多种形式的caspase依赖性凋亡.本研究拟探讨新型化合物FG020326对耐药细胞MCF-7/ADR的细胞毒作用,克服MCF-7/ADR对泰素帝的凋亡抵抗作用及机制.方法:MTT法测定FG020326体外逆转活性,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡通路PARP、caspase-3、caspase-8的表达,并用比色法测定caspase-8和3的活性.结果:10μmol/LFG020326作用下MCF-7/ADR细胞对泰素帝耐药性逆转了24倍.10μmol/LFG020326作用下,0.1 μmol/L泰素帝可诱导MCF-7/ADR细胞染色质凝集,凋亡小体产生以及出现亚凋亡峰.10 μmol/L FG020326作用48 h,泰素帝介导的caspase激活敏感性增加,0.1μmol/L泰素帝诱导下出现caspase-8和caspase-3,PARP裂解.与0.1 μmol/L泰素帝单独作用相比,10μmol/L FG020326作用下,泰素帝介导的caspase-8和caspase-3活性显著提高,并呈时间依赖性,48 h活性最高.结论:新型化合物FG020326可显著逆转MCF-7/ADR对泰素帝的抗药性,通过增加泰素帝介导的caspase-8和caspase-3的激活敏感性克服MDR细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性.     

鼻咽癌活检组织SF2的检测方法初探

目的：探讨用组织块培养图象分析技术测定鼻咽肿瘤活检组织2Gy照射后的细胞存活分数(survival fraetion at 2 grey，SF2)的可行性。方法：取初发鼻咽肿瘤新鲜活检标本65例，用组织块培养图象分析技术测定SF2和3例肿瘤组织在不同照射剂量下的细胞存活分数，描述剂量-反应关系。结果：65例中60例成功测得SF2值，分布于0．12～0．99，标准差0．053～0．190，变异系数0．096～0．442。3例肿瘤组织的存活分数和照射剂量之间有明显的剂量反应关系，用L-Q模型能良好拟合其结果。结论：该方法可以测定出不同患者鼻咽活检肿瘤组织间SF2值的差别，简便快捷、有效可行。     

反相高效液相色谱法检测小鼠血浆中FG020326方法的建立

目的建立测定多药耐药(multidrugresistance,MDR)逆转剂FG020326在KM小鼠血浆中血药浓度的方法。方法将KM小鼠(20·0~25·1)g随机分组,每组6只,♀♂各半,尾静脉注射,给药量为30mg·kg-1,分时取血、处理。采用反相色谱柱,应用外标法测定FG020326在KM小鼠血浆中的血药浓度。结果在所建立的方法学下,FG020326的保留时间为7·9min;标准曲线为Y^=0·0144X-0·0285(r=0·9998),在162·5~41600μg·L-1血浆浓度范围内呈良好的线性关系,最低检测浓度40μg·L-1(S/N=3);在650、2600、20800μg·L-1低、中、高3个浓度下的绝对回收率为68·66%~84·63%,相对回收率为92·58%~110·88%;日内及日间RSD均小于3·2%(n=5)。在室温及冷冻-解冻试验中,FG020326具有良好的稳定性,RSD分别小于1·3%和6·0%。尾静脉单次给药后,FG020326在体内过程符合二室模型,T12α为0·088h,T21β为5·33h,AUC0~∝为14183h·μg·L-1,Vd为0·37L。结论该方法快速、准确、简便,能够满足FG020326药代动力学研究要求。     

蟾酥注射液对小鼠S180和人结肠癌HT-29裸鼠移植性肿瘤的影响

目的研究蟾酥注射液对小鼠移植性肿瘤 S180和人结肠癌 HT-29裸鼠移植性肿瘤的抑制作用.方法分别用小鼠 S180和人结肠癌 HT-29裸鼠两种荷瘤小鼠模型,观察药物对上述肿瘤的抑瘤作用,并镜下观察后者细胞凋亡情况.结果与荷瘤阴性对照组比较,蟾酥注射液各剂量组对小鼠 S180抑瘤率( IR)为 19.1%～38.2%(P<0.05),呈量效关系;而对人结肠癌 HT-29裸鼠移植性肿瘤的 IR为 9.5%～15.8%(P>0.05),也呈量效关系,但差异均未见统计学意义;环磷酰胺则能显著抑制小鼠 S180和 HT-29细胞裸鼠移植性肿瘤的生长( IR分别为70.7%和 67.1%, P<0.01),镜检可见其有显著促进肿瘤细胞凋亡作用;未发现实验药物出现明显的毒副作用.结论该实验所用的蟾酥注射液,对小鼠 S180有抑制作用,而对人结肠癌 HT-29裸鼠移植性肿瘤,则作用不明显,表明不同类型的肿瘤对其敏感性不同.     

关于枇杷叶和苦杏仁甙治癌问题的实验研究

枇杷叶常见商品有两种,广枇叶,产于广东,苏杷叶,产于苏州,两者原植物均为Eriobotrya japonica Lindley。此外,同属异种的枇杷叶尚有云南枇杷(E.bengalensis Hooker)和台湾枇杷(E.deflexa Hemsley)两种。中医认为,功能清肺和胃、降气、化痰。自古以来就用作清肺化痰之剂。至于枇杷叶(有效成份苦杏仁甙)治癌,国内报导始见于《国外科技动态》1979年9期,谓用它治疗癌肿250例,治愈248例,并谓已有4,000多例晚期癌症患者得救,如果属实,堪称疗效极高。查日本人原著用枇杷叶治癌,原为日本厚生省所禁用。而该文献肯定枇杷叶治癌的有效成份系苦杏仁甙。但我们的实验,枇杷叶仅含有痕迹量的苦杏仁甙。它的同科植物山杏(Prunus armeniacaL.)的种子(即中药杏仁)含量较多。它能祛痰、止咳、定喘、疏肺部风寒,润     

MTS法细胞毒试验的非线性关系研究

目的　探讨MTS法细胞毒试验的细胞数 OD关系以及药物剂量 -抑制率关系 ,为更好地应用MTS法提供提示。方法　采用HL 6 0和Raji细胞株。细胞数 OD关系试验 :96孔板接种不同浓度的细胞 ,加入MTS培养 1～ 5h后于 4 90nm波长测定OD ,用SPSS 11 0软件对数据作曲线估计。细胞毒试验 :96孔板每孔接种细胞 ,加不同剂量的药物培养 72h ,加入MTS培养 3h后于 4 90nm波长测定OD ,用SPSS11 0软件对数据作曲线估计。结果　 2种细胞 5个时间点的细胞数 OD关系以三次项曲线拟合度最好 ,r2 为 0 997～1 0 0 0 ,均大于线性模型的r2 0 938～ 0 993。 3种药物对 2种细胞的剂量 -抑制率以三次项曲线拟合度最好 ,r2 为0 998～ 1 0 0 0 ,优于对数剂量 -概率单位线性模型的r20 94 8～ 0 987。结论　三次项曲线对MTS法细胞毒试验的细胞数 OD关系有很高拟合度且优于线性曲线模型。通过药物剂量 -抑制率的三次项曲线拟合方程可望得到比常用的概率单位回归法更准确的IC50 。     

荧光分光光度法检测裸鼠移植瘤组织中阿霉素浓度

目的建立裸鼠移植瘤组织中阿霉(Dox)素浓度的荧光分光光度法检测方法。方法建立KB、KBv200细胞裸鼠移植瘤模型,经鼠尾静脉给予不同剂量阿霉素,3h后,处死裸鼠,分离及匀浆肿瘤组织,用含0.3mol·L-1HCl的60%乙醇抽提,离心取上清液,用荧光分光光度计在λex/em为470/590nm测定其荧光值,通过标准曲线方程计算阿霉素浓度。结果样本扫描未见杂峰,日内精密度<6.4%,日间精密度小于5.7%,阿霉素于肿瘤组织匀浆中抽提回收率>75.9%,KB细胞移植瘤组织中阿霉素浓度为KBv200的2.53～4.54倍。结论本方法专属性高,快速、简便,结果准确可靠,适用于裸鼠移植瘤组织中Dox药代动力学研究。     

KBv200裸鼠移植瘤模型的建立及其耐药特性的探讨

目的　建立一种人多药抗药性 (MDR)细胞株的裸鼠移植瘤模型并探讨其MDR特性 ,为筛选MDR逆转剂进行体内逆转MDR的研究提供模型。方法　按SPF级动物常规饲养裸鼠 ,鼠腋窝皮下接种 1× 10 7个细胞 ,观察成瘤率及生长特性 ,并比较裸鼠体内细胞与原代细胞耐药特性。细胞毒测定采用MTT法。P糖蛋白 (Pgp)的测定采用流式细胞仪法。结果　KBv2 0 0裸鼠移植瘤的成瘤率为 10 0 % ;在本研究的饲养条件下 ,19d瘤重可达 1 0～ 2 5 g ,平均 (2 1±0 4) g。原代及裸鼠体内KBv2 0 0对长春新碱 (VCR)的IC50分别为 1 479和 1 472 μmol·L-1,两者比较差异无显著性(P >0 0 5 )。原代及裸鼠体内KBv2 0 0的Pgp的表达率分别为 92 1%、91 9% ,二者差异无显著性 ;二者荧光强度亦未见明显改变 ,即Pgp表达量未见改变。 结论　以KBv2 0 0细胞所建立的裸鼠移植瘤模型 ,成瘤率高 ,在实验期间 15～ 2 0d内仍保持其MDR的特性 ,可提供做为MDR研究的体内模型。     

大花紫玉盘素诱导肿瘤多药抗药性细胞凋亡及其机制

目的比较研究番荔枝内酯大花紫玉盘素(uvarigrin)诱导多药抗药性KBv200细胞及其亲本KB细胞凋亡及其机制。方法以MTT法进行细胞毒测定；用Annexin V FITC染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。活性氧(ROS)测定以DCFH-DA标记，细胞线粒体跨膜电位(ΔΨ_m)测定用DiOC₆标记，均以流式细胞仪检测。Caspase-9激活的测定用Western blotting法。结果大花紫玉盘素对KBv200细胞及其亲本KB细胞的生长均有明显的抑制作用；大花紫玉盘素不仅能介导KB细胞凋亡，而且也能介导KBv200细胞凋亡；大花紫玉盘素作用于KBv200细胞及其亲本KB细胞12，24和48 h，均引起ROS升高以及ΔΨm降低，而且呈时间依赖性。Western blotting方法分析显示Caspase-9被激活。结论大花紫玉盘素可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。