a-synuclein: 基因结构、进化与蛋白聚集

α-synuclein是synuclein家族的重要成员之一,主要在脑组织中大量表达,是帕金森病中特征性路易小体的主要组成部分。本文采用生物信息学等方法系统分析了不同物种synuclein家族蛋白的分子进化关系、基因结构特点以及不同形式α-synuclein对蛋白聚集的影响。结果表明：synuclein家族蛋白可聚为α, β和γ三类,直系同源基因α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein与由基因复制而产生的旁系同源α, β和γ-synuclein在进化上表现为较近的距离。人α-synuclein蛋白可分为3个区域：N端(1-60)的两性α螺旋区、中间NAC（61-95）较强的疏水性区域以及主要由酸性氨基酸组成的C端（96-140）区。α-synuclein存在3种突变体：A30P、E46K和A53T,突变位点位于α-synuclein基因的不同外显子上。α-synuclein外显子的异位拼接产生4种异构体,5个外显子都参与编码一个由140个氨基酸组成的蛋白,这是α-synuclein在体内存在的主要形式,同时外显子3和5存在选择性的剪接机制,分别编码形成126、112、98个氨基酸的剪接变体。本文同时还讨论了目前影响α-synuclein体外聚集的主要因素及主要的聚集抑制剂。本工作对于更好地了解α-synuclein的序列基础、深入探讨α-synuclein的生物学功能及帕金森病等神经退行性疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义和价值。     

球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析

目的研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的基因,有助于对活性物质的合成进行调控,从而提高产量。方法比较NCBI上公布的11种植物11条HMGR基因mRNA的同源保守区域,设计简并引物,利用RT-PCR技术,以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功扩增出404 bp的保守区基因片段。结果序列分析表明,球药隔重楼HMGR基因片段与其他7种植物的一致性达到76%～81%,球药隔重楼HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性,经Genbank查询为一新的cDNA。结论通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析,初步确定该基因为HMGR基因,这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶HMGR的基因片段,也是百合科植物首次获得的HMGR基因。     

黄花紫堇、多刺绿绒蒿及其同属近缘物种的ITS2条形码鉴定与分析

运用ITS2 DNA条形码技术鉴定中药材黄花紫堇、多刺绿绒蒿及其近缘物种,以保证药材质量,确保用药安全.文中对采自西藏拉萨的黄花紫堇、多刺绿绒蒿等13个药材样品进行了DNA提取、PCR扩增和测序;对实验序列和GenBank下载的71条切除两端的5.8S,28S区域,使用MEGA 5.0进行多重序列比对,并进行种内、种间遗传距离计算和进化树构建;同时预测了黄花紫堇、多刺绿绒蒿与其近缘种ITS2序列的二级结构.结果表明,作为DNA条形码,ITS2序列能够有效地对黄花紫堇、多刺绿绒蒿及其同属近缘物种进行分子鉴定.该研究不仅可为黄花紫堇、多刺绿绒蒿及其近缘物种、相关混伪品建立基于.ITS2序列的DNA条形码的规范和安全的检测技术及鉴别方法,也为其质量控制、安全用药及合理开发利用提供理论依据及数据支撑.     

球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析

目的 研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）的基因，有助于对活性物质的合成进行调控，从而提高产量。方法 比较NCBI上公布的11种植物11条HMGR基因mRNA的同源保守区域，设计简并引物，利用RT-PCR技术，以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功扩增出404 bp的保守区基因片段。结果 序列分析表明，球药隔重楼HMGR基因片段与其他7种植物的一致性达到76%～81%，球药隔重楼HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性，经Genbank查询为一新的cDNA。结论 通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析，初步确定该基因为HMGR基因，这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶HMGR的基因片段，也是百合科植物首次获得的HMGR基因。     

粪便不同保存方法对动物基因组DNA提取效果的影响

目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75％乙醇保存,100％乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋)保存,在1个月内、5个月后、8个月后对粪便DNA进行抽提,并将提取的DNA作为模板进行PCR扩增,基因克隆测序。结果短期内均可得到高质量的DNA,DNA大小在23kb左右,电泳带型整齐,无降解,线粒体的扩增结果也完全一致,而用100％乙醇保存粪便DNA的时间更为长久。结论不同的保存方法提取动物基因组效果不一样。     

基于matK基因的几种重要重楼属植物遗传关系分析

目的:利用叶绿体matK基因序列探讨重楼属植物的10个样品系统发育及分子鉴定,为重楼的保护和合理利用提基本供理论依据。方法:从分布于湖南省、云南省和吉林省的10个重要的重楼类群样品中提取总DNA,经扩增纯化后,利用PCR产物直接测序。结果:测定了10个重要的重楼类群样品的matK基因序列,序列长度为1 039 bp,比较了该基因的差异,构建了基于matK基因序列的遗传进化树。结论:这10个重楼属植物样品可以划分为4个组群,matK基因序列的结果不支持长药隔重楼、滇重楼、短梗重楼、七叶一枝花成为独立的变种,建议作为多叶重楼的变型处理。