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1.
2.
目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3~4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs,转染后24 h通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染效率,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达;转染后0、7、14 d,采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况;实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平,并设未转染细胞作为对照组。结果转染后24 h,倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢,细胞形态清晰;FCM检测示,转染组转染效率为99.57%,未转染组为2.46%;转染后8 h,荧光显微镜下即可见GFP表达,随培养时间延长GFP表达逐渐增多,24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示,随转染时间延长,Ι型胶原表达逐渐增强;转染组转染后14 d,肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差异有统计学意义(t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000)。结论 BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化,并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生,为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。 相似文献
3.
目的:比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果:半月板纤维软骨细胞原代接种后8~12 h开始贴壁,48~72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7~10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达:随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论:体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。 相似文献
4.
2018年美国髋关节和膝关节外科医师协会(AAHKS),美国骨科医师协会(AAOS),髋关节学会(THS),膝关节学会(TKS)及美国局部麻醉与疼痛医学学会(ASRA)共同协作,针对氨甲环酸(TXA)在全关节置换术(TJA)中应用的有效性和安全性进行了循证研究,就氨甲环酸给药的方式、剂量和时机以及在血栓形成高风险患者中的使用等提出了推荐意见,并根据证据支持强度对推荐意见进行了分级。本文对该指南进行解读,旨在为中国的骨科医务工作者、患者、医疗管理人员和指南制定者提供参考。 相似文献
5.
6.
经膝后正中小切口可吸收螺钉固定治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折 总被引:2,自引:2,他引:0
目的:探讨经膝后正中小切口可吸收拉力螺钉固定治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折的方法和临床疗效。方法:对2007年1月至2011年12月应用可吸收螺钉治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折的50例患者资料进行回顾性分析。其中男38例,女12例;年龄18~62岁,平均36.8岁;病程1~52周。术中采用膝关节后正中小切口,注意保护血管神经。术后通过物理检查、Lysholm及IKDC评分来评价手术疗效。结果:术中无断钉,术后无感染、窦道形成、骨折块移位等并发症发生,仅1例切口愈合延迟。随访6~42个月,平均30个月,终末随访时患者均获骨性愈合。2例因未及时复诊出现膝关节活动受限。50例术膝后抽屉试验及Lachman征为阴性或Ⅰ度阳性。术后Lysholm评分高于术前,术后优42例,良5例,中3例。术后IKDC评分高于术前,术后IKDC评分A级41例,B级9例。结论:可吸收螺钉是治疗膝关节后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折安全有效的方法,可使患者免除二次手术,而采取后正中后小切口创伤小,能够缩短手术时间和减少血管神经损伤。用可吸收拉力螺钉治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折需要严格掌握手术适应证。 相似文献
7.
8.
目的:作者前期研究已证明,第1代骺软骨细胞可在离心管内形成富含软骨特异性蛋白基质的软骨组织。本实验进一步观察第1代骺板软骨细胞在离心管内培养形成的软骨组织特征,并与半月板、骺板及关节软骨组织进行比较。
方法:实验于2006-07/2007-04在四川大学华西医院科研楼组织工程实验室完成。取4周龄新西兰大白兔四肢骺板分离软骨细胞,行单层传代培养,取第1代细胞行无支架离心管培养,观察其形成的软骨组织特征,另取6周龄新西兰大白兔股骨髁关节软骨、胫骨近端骺板及半月板,与离心管培养软骨一并行透射电镜观察,比较其软骨细胞及细胞外基质结构。
结果:第1代骺板软骨细胞经无支架离心管培养能形成软骨。离心管内培养形成的软骨具有独特的超微结构,与骺板及关节软骨有一定的相似性,而与半月板有明显区别。4种细胞都有各自不同的细胞及细胞外基质特征。
结论:第1代骺板软骨细胞在离心管内培养形成的软骨组织具有与骺板及关节软骨相似的微观结构。 相似文献
9.
李箭 《预防医学情报杂志》1986,(3)
一、独特型网络和免疫应答的调节 Jerne首先提出免疫应答可由一系列的独特型决定簇(idiotypic determinant,Id)-抗独特型决定簇反应进行调节。Id位于或靠近于抗体分子和淋巴细胞抗原受体的抗原结合部位。抗原进入前,所有淋巴细胞都处于一种由独特型相互作用产生的动力学平衡状态,抗原进入后打破了这种平衡并引起免疫应答。尤其在接触抗原前注射抗Id,既可抑制Id阳性的能结合抗原的分子,也可 相似文献
10.