C57BL／6近交系小鼠Lewis肺癌动物模型：建设性描述肺癌损害程度的指标

目的：建立肺癌动物模型，探讨肺癌的致病因素，发病机制及防治措施。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL／6小鼠腋部皮下，制备肺癌模型。观测最佳接种剂量，成瘤率，发瘤平均潜伏期，平均存活时间，平均瘤重，肿瘤体积动态变化，彩色多普勒能量图(CDE)检测瘤内血流丰富程度及病理组织学观察。结果：最佳接种剂量为l&;#215;l0^6个细胞，成瘤率80％，发瘤平均潜伏期为(6．3&;#177;0．4)d；平均存活时间为(28．0&;#177;2．5)d；平均瘤重(9．13&;#177;0．03)g；CDE：70％为Ⅲ级，30％为Ⅳ级，频谱(PS)为75．30cm／s，阻力指数(RI)为0．45。结论：Lewis肺癌细胞诱发肺癌模型在实验肺肿瘤研究中可作为首选造模方法。     

浅谈调理脾胃法在癌症治疗中的应用

笔者在随师学习过程中体会到,大多数癌症患者都存在脾胃运化失调、饮食摄入不足及消化吸收不良的现象,继而导致气血生化乏源,免疫功能低下,使病情进一步恶化,严重影响到患者的生活质量和生存期.相反,在治疗过程中如果能调理脾胃并改善其运化功能,患者全身症状及生存质量就会有所改善.本人由此体会到调理脾胃在整个癌症治疗过程中所起的重要作用,现就此问题讨论如下.     

人神经营养素-4基因的克隆及表达

目的 通过基因工程的方法扩增人神经营养素-4(hNT-4)cDNA,在大肠杆菌中表达hNT-4,为研究hNT-4的生物学作用提供材料.方法 以人胎脑RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hNT-4 cDNA,将其插入的质粒pGEM-T中.将经过序列分析确定的hNT-4 cDNA插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达载体pGEX-6p-1-NT-4,用SDS-PAGE法测定融合蛋白在大肠杆菌中的表达.结果 经序列测定分析,克隆的hNT-4 cDNA核苷酸序列与已发表序列(GenBank,M86528)完全一致,并获得了高效表达hNT-4的重组菌株.结论 体外成功扩增hNT-4 cDNA,并在原核细胞中高效表达了hNT-4.     

VEGF反义寡核苷酸治疗小鼠Lewis肺癌的研究

肺癌与其它实体瘤一样,其生长、转移和预后均依赖血管生成,以新生血管为靶点,抑制肿瘤血管生成,阻断肿瘤的营养来源和迁移通道,已成为癌症治疗的新策略.有研究发现,血管内皮生长因子(Vascular en-dothelial growth factor,VEGF)为一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,可直接诱导肿瘤血管生成[1].我们利用近年兴起的反义技术,设计VEGF反义寡核苷酸片断,使其特异性封闭肿瘤细胞中的VEGF mRNA,通过研究它对肿瘤细胞合成VEGF及对肿瘤生长的影响,探讨其对肺癌治疗新途径的可能性.     

高效毛细管电泳法检测生药龙胆中龙胆苦苷含量

目的:建立高效毛细管电泳法测定生药龙胆中有效成分龙胆苦苷含量的方法。方法:毛细管区带电泳(CZE):运行电解质为含10%甲醇的20mmol.L~(-1)硼砂缓冲液(pH 10.6);工作电压18kV;柱温25℃;检测波长280mm。结果:测得龙胆苦苷的回归方程为Y=0.0787 1.9981X(r=0.9998);平均回收率为101%;RSD=2.64%(n=5)。结论:本方法简便,准确,快速,重复性好。可用于龙胆中龙胆苦苷的测定。     

VEGF反义寡核苷酸抑制小鼠Lewis肺癌生长的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的抑制作用。方法制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组,每组10只VEGF反义寡核苷酸(ASPODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射ASPODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。所有C57BL/6小鼠于接种后第25天先用二维超声观察肿瘤的实时图象,利用脉冲多普勒获取血流频谱,获得收缩期峰值速度(PS),阻力指数(RI)。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化,免疫组化法检测微血管密度(MVD)。结果与对照组瘤重比较(7.83±0.78)g、VEGF-ASPODN组(4.49±0.43)g能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01)、VEGF-SPODN组(7.73±0.69)g则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组、VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%、5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN对肿瘤生长具有抑制作用。VEGF-ASPODN组与对照组相比较PS及RI有明显差异(P<0.01);VEGF-SPODN组与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论肿瘤原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

肿瘤基因治疗学研究:血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长的抑制

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASPODN)治疗肺癌的可能性。方法:实验于2002-12/2004-05在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组(每组10只):VEGF-ASPODN治疗组,VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射AS-PODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,2次/周,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化。结果:与对照组瘤质量犤(7.83±0.78)g犦比较,VEGF-ASPODN组犤(4.49±0.43)g犦能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01),VEGF-SPODN组犤(7.73±0.69)g犦则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组和VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%和5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN能明显抑制肿瘤细胞生长,降低增殖活性。结论:肿瘤原位注射VEGF-ASPODN能抑制小鼠肺癌生长。     

肺癌基因治疗新思路:肺癌细胞血管内皮生长因子表达的抑制

目的:探讨硫修饰和脂质体包裹的反义寡核苷酸(ASODN)抑制Lewis肺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因表达的效应,减少肺切除导致的呼吸功能衰竭发生的可能性。方法:将经脂质体包裹并部分硫代修饰后的VEGFASODN,正义寡核苷酸(SODN),错义寡核苷酸(MODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,采用免疫组织化学SP法及RT-PCR技术检测肺癌细胞中VEGF蛋白及VEGFmRNA表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况。结果:VEGFASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF蛋白及VEGFm-RNA的表达,而且可以通过抑制VEGF的表达抑制内皮细胞的生长,并对内皮细胞的抑制作用存在浓度依赖性,5,10,20μmol/L浓度组的内皮细胞生长抑制率分别约为13.77%,48.85%,76.29%。VEGFSODN和VEGFMODN却无此作用。结论:VEGFASODN抑制肺癌细胞表达VEGF,进而抑制内皮细胞生长,可以成为肺癌基因治疗的一种新的策略。     

中西医结合治疗肾病综合征临床观察

目的观察中西医结合疗法治疗肾病综合征的临床疗效.方法60例肾病综合征患者随机分为两组.治疗组30例,采用中西医结合治疗,对照组30例,采用单纯激素加免疫抑制剂合并治疗,比较两组患者的临床疗效.结果治疗组总有效率为90.0%,对照组为60.0%(P<0.05).结论中西医结合治疗肾病综合征疗效较好.     

前S1抗原在乙型肝炎诊断中的应用研究

目的研究在不同病情乙肝患者血清中前S1抗原（HBVpre-S1）水平的变化与HBV血清标志物、HBV-DNA的临床相关性，评价HBVpre—S1的检测在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法用酶联免疫吸附法（ELISA）分别对268例HBV血清进行五项血清标志物，Pre—S1的检测。用全自动生化分析仪赖氏法检测肝功能，同时采用PCR荧光定量法检测HBV-DNA的量。结果196例慢性乙肝（CH）患者中，HBeAg（＋）组和HBeAg（-）组比较，Pre-S1（＋）和HBVDNA（＋）检出率及Pre-S1／HBsAg的相对比值均高于HBeAg（-）组，差异具有统计学意义P〈0．01；且在HBeAg（-）组中。HBeAb（-）组和HBeAb（＋）组相比，Pre-S1／HBsAg相对比值也显著高于HBeAb（＋）组，P〈0．05；在CH患者中，轻、中、重三组间的Pre-S1（＋）率，HBVDNA及Pre-S1／HBsAg相对比值相比较，差异均无统计学意义，且Pre-S1／HBsAg相对比值水平和肝脏炎症程度无关。在72例AH患者中，Pre-S1／HBsAg的相对比值与肝脏急性损伤的严重程度相关，在AH患者Pre-S1／HBsAg相对比值水平下降越早越快，病程越短，预后越好。结论Pre-S1可作为HBV复制的标志物；而Pre-S1／HBsAg的相对比值的高低，在肝炎的诊断，AH预后的判断方面具有重要的价值；联合检测Pre-S1可补充和完善HBV五项检测的不足，尤其对HBeAg（-）或者变异的HBV感染者能更好地反映病毒的复制状态和传染性。