复方葛根通经活血合剂中葛根素的含量测定

目的：建立复方葛根通经活血合剂中葛根素的HPLC含量测定方法。方法：色谱柱为KromasilC18柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相：甲醇．水（26：74）;流速：1．2ml·min-1;检测波长250nm;柱温：30oC。结果：葛根素在0．06～0．33μg范围内具良好的线性关系（r=0．9999）;平均回收率为99．43％,RSD=1．77％（n=6）。结论：该方法简便,准确,重复性好,可用于复方葛根通经活血合剂中葛根素的含量测定。     

罗汉果茎、叶及其提取物中总黄酮的含量测定

目的建立罗汉果植株中总黄酮的含量测定方法。为罗汉果植株的药材质量控制标准提供依据。方法采用分光光度法测定罗汉果植株中总黄酮的含量,以山奈苷为对照品,氯化铝为显色剂,检测波长为393nm。结果此方法线性关系良好,总黄酮的回归方程为Y=21.783X-0.0011(r=0.9999),平均加样回收率为99.035%,CV为1.23%(n=6)。结论此方法简便、灵敏、准确、可用于质量控制。     

鳖甲炮制前后抗肝纤维化有效物质部位HPCE指纹图谱的比较研究

目的建立生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位的高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱,探讨其炮制前后药效物质的差异。方法运用毛细管区带电泳法,75um×57cm未涂层石英毛细管,运行缓冲液为20mmol／L磷酸氢二钠-100mmol／L三羟甲基氨基甲烷（1mol／LNaOH调pH值至12．0）,分离电压为18kV,检测波长为254nm,柱温为20℃,分别建立了10批生鳖甲和10批醋鳖甲有效物质部位的指纹图谱,并进行对比研究。结果生鳖甲指纹图谱共标定了17个共有峰,HPCE图谱相似度均大于0．94;醋鳖甲指纹图谱共标定了19个共有峰,HPCE图谱相似度均大于0．93;而10批生鳖甲图谱与醋鳖甲对照指纹图谱的相似度降低,为0．86～0．92;且10批醋鳖甲图谱与生鳖甲对照指纹图谱的相似度亦降低,为0．86～0．93。结论鳖甲炮制前后化学成分及其含量发生了变化,且炮制后产生了一些新的有效成分。     

鳖甲抗肝纤维化活性多肽的固相合成

目的固相合成鳖甲抗肝纤维化活性多肽,为开发抗肝纤维化多肽药物提供结构明确的受试品。方法采用固相合成法,以Fmoc保护氨基酸和Wang树脂为原料,经1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐、N 甲基吗啡啉缩合,以20%哌啶的N,N 二甲基甲酰胺溶液进行脱保护,用三氟乙酸切割试剂将多肽粗品从Wang树脂上切割下来。结果经反相高效液相色谱分析纯化,可得纯度>98%的目的肽,经质谱鉴定其相对分子质量与理论值一致。结论该合成方法条件温和、副反应少,操作简便,纯化效率高,可用于大规模合成目的肽。     

鳖甲抗肝纤维化有效部位的初步筛选研究

目的:筛选鳖甲抗肝纤维化的有效部位。方法:传代培养的LX-1与鳖甲提取物的Bj1～Bj8共8个部位共同培养72h后,3H-TdR法检测对TGF-β1刺激的LX-1细胞增殖的影响,再将传代培养的HSC-T6与鳖甲的Bj61～Bj68(为Bj6的进一步的分离部位)共同培养72 h后,采用MTT比色法测定各浓度组HSC-T6的增殖情况。结果:3H-TdR法检测结果表明Bj4、Bj6、Bj7部位抑制LX-1细胞增殖,MTT比色法结果表明Bj66和Bj67部位有较强的抑制HSC-T6细胞增殖的作用。结论:Bj66和Bj67为鳖甲的有效部位。     

鳖甲抗肝纤维化活性物质的筛选与分离鉴定

目的 筛选鳖甲抗肝纤维化的活性物质,并对其进行分离鉴定.方法 在生物化学与药理学跟踪技术下,通过膜分离技术筛选鳖甲抗肝纤维化的活性部位;采用凝胶色谱柱分离法在活性部位筛选活性组分;应用高效液相色谱分离法对活性组分进行分离纯化;通过4700串联飞行时间质谱仪对鳖甲活性纯化组分进行结构鉴定.对数据进行方差分析和组间q检验. 结果筛选出鳖甲蛋白质和肽类的分子量＜6000的物质具有生物学活性,从而确定了鳖甲抗肝纤维化的活性部位.将活性部位分离为8个组分(Bjl～Bj8),筛选出Bj4、Bj6和Bj7三个活性组分.对活性组分Bj7进行分离纯化,得到7个纯化组分(Bj701～Bj707);经筛选得出Bj704和Bj707的生物学活性较为显著.通过4700串联飞行时间质谱仪对Bj707纯化组分Bj707-A进行测试,选择质/荷比为526、542和572三个丰度最强的分子离子峰,用De Novo Explorer分析软件进行分析,测出该3个肽类化合物的氨基酸序列分别为NDDY(Asn-Asp-Asp-Tvr)、NPNPT(Asn-Pro-Asn-Pro-Thr)、HGRFG(His-Gly-Arg-Phe-Gly);根据分子离子峰的丰度判断,M572的肽类化合物含量最高.结论 应用学科交叉的研究方法,提取分离并鉴定了鳖甲抗肝纤维化的3个活性肽类物质,为鳖甲用于临床抗肝纤维化、新药开发奠定了基础.     

鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究

目的比较鳖甲生品和醋制品对大鼠肝星状细胞（HSC—T6）增殖的影响，为鳖甲醋制品抗肝纤维化的临床应用提供依据。方法传代培养的HSC—T6与鳖甲生品和醋制品超声提取物，鳖甲生品和醋制品回流提取物共同培养72h后，采用MTT比色法测定各浓度组HSC—T6的增殖情况。结果两种提取方式相互验证了鳖甲生品和醋制品对HSC—T6细胞增殖均有抑制作用，且鳖甲醋制品的作用优于鳖甲生品。结论鳖甲醋制品的抗肝纤维化作用优于鳖甲生品。