基于微生物-脑-肠轴探讨益气解毒方抗缺血性脑卒中作用机制

目的：从微生物-脑-肠轴(MGBA)角度探讨益气解毒方(YQ)治疗缺血性脑卒中(IS)的可能作用机制。方法：将大鼠随机分为5组,每组6只,分别为假手术组、模型组、YQ低、中、高剂量组(1、5、25 mg˙kg^-1),除假手术组外,其余各组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。首先采用神经行为学评分判断是否建模成功并对YQ的缺血性脑卒中保护作用进行评价,再通过16S rDNA测序技术比较大鼠MCAO造模前后及YQ给药后肠道菌群的变化,并分析该方作用可能相关的生物学通路。最后通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在脑和肠组织中的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察脑皮层区和结肠的病理变化,对可能的作用机制进行验证。结果：YQ显著提高了MCAO大鼠的神经行为学评分(P<0.01),对在急性期由于富集病原体和机会致病菌引发的肠道微生物紊乱起到了较好调节作...     

复方感冒灵颗粒抗流感相关药效作用研究

目的 建立复方感冒灵颗粒（CGG）全方、化学药（CM）组、中药（TCM）组的抗病毒、抑菌、解热、抗炎等实验,以期综合评价复方感冒灵颗粒治疗流行性感冒的药效作用,为临床用药提供参考。方法 分别采用甲型流感病毒制备小鼠病毒感染模型,金黄色葡萄球菌制备小鼠细菌感染模型,酵母菌致大鼠发热模型及巴豆油致小鼠耳肿胀模型,对CGG、CM、TCM的抗病毒、体内体外抑菌、解热和抗炎的作用效果进行研究。结果 小鼠感染流感病毒后,给药组肺组织中病毒载量较模型组明显降低（P<0.05）;CGG、CM、TCM组小鼠的肺指数抑制率分别为19.68%、8.30%、8.54%;各组存活时间较模型组明显延长（P<0.05）,延长率分别为29.6%、5.4%、12.9%;病毒感染致小鼠死亡抑制率分别为26.7%、0、10.0%。在体内注射金黄色葡萄球菌感染小鼠致死实验中发现,CGG、CM、TCM对小鼠的死亡抑制率分别为10.0%、15.0%、0;体外抑菌和杀菌实验发现CGG、TCM对金黄色葡萄球菌等标准株均显示出抑制和杀灭作用。解热实验中发现CGG、CM可在给药后1、2 h显著抑制酵母致大鼠发热反应（P<0.01）。抗炎实验中发现给药组耳肿胀值明显低于模型组（P<0.05）,CGG、CM、TCM组抑制率分别为31.7%、22.6%、26.8%。结论 CGG具有抗病毒、抑菌、解热、抗炎等功效,且CGG效果优于TCM、CM,提示TCM和CM发挥了协同作用,可用于治疗感冒引起的头痛、发热、鼻塞、流涕、咽痛等上呼吸道感染疾病。     

基于能量代谢分析益气解毒方对缺氧损伤的PC12细胞线粒体保护作用的机制

目的:采用Seahorse细胞能量代谢分析仪,通过缺氧损伤的高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)建立一种线粒体能量代谢评价方法并探究益气解毒方的线粒体保护作用.方法:应用缺氧小室体外构建PC12细胞损伤模型,实验设置空白组,模型组(Model),益气解毒方高、中、低剂量组(25,5,1μ.tmol·L-1;YQ高...     

岭南有毒中草药精准识别质谱数据库及快速检测方法的建立

目的:建立岭南有毒中草药特征性化学成分的精准识别质谱数据库及快速检测方法。方法:采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),色谱柱为Poroshell 120 SB-C18(100 mm×2.1 mm,2.7µm),以0.1%甲酸水溶液(含5 mmol·L^(–1)甲酸铵,A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,10%B;1~12 min,10%~70%B;12~22 min,98%B),流速为0.3 mL·min^(–1),柱温为35℃,以三重四极杆串联质谱仪检测,离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,根据毒性成分的离子对信息、保留时间、检出限建立高通量定性定量数据库。结果:采用所建立的岭南有毒中草药精准识别质谱数据库及快速检测方法,开展毒性中草药中毒应急检验,检出钩吻、洋金花、雪上一枝蒿等毒性中草药的特征毒性成分,对粉末、药酒等不同状态、不同剂型的样本均适用。结论:所建立的分析方法快速、灵敏,筛查数据库数据准确,适合中药及中成药中毒性成分的定性定量检测,可为进一步开展中药材风险评估和药物警戒提供支撑。     

基于超高效液相色谱法-串联质谱技术和网络药理学的复方感冒灵成分及作用机制验证

目的：采用超高效液相色谱法-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术系统研究复方感冒灵颗粒药效物质成分及体内代谢谱,并结合网络药理学探讨发挥药效的作用机制。方法：采用UPLC-MS/MS法对复方感冒灵颗粒主要化学成分以及入血成分进行鉴定。采用网络药理学的方法构建“成分-靶点-功效-疾病”网络,通过蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络筛选核心靶点,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果：从复方感冒灵颗粒醇提物中共鉴别出170个化合物和21个入血成分,构建了复方感冒灵颗粒成分谱及代谢谱。预测核心靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、胱天蛋白酶3(CASP3)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、促分裂原活化的蛋白激酶1(MAPK1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素-2(IL-2)以及促分裂原活化的蛋白激酶14(MAPK14),与解热、抗炎与抗病毒功效对应。结论：本研究采用UPLC-MS/MS技术构建了复方感冒灵颗粒的物质成分谱及体内代谢...     

芪参颗粒抗缺血性中风线粒体保护作用研究

目的:基于线粒体呼吸功能,研究芪参颗粒对缺血性中风相关线粒体能量代谢障碍保护作用。方法:选用PC12神经细胞复制缺氧缺糖损伤模型,采用细胞能量代谢分析仪(Seahorse XFe 96)考察芪参颗粒及药效成分对糖氧剥夺细胞呼吸功能的保护作用。复制大鼠大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型,采用Clark氧电极法检测芪参颗粒对MCAO大鼠脑线粒体三态呼吸速率、四态呼吸速率、磷氧比、呼吸控制率、氧化磷酸化率等呼吸功能相关指标。蛋白质印迹法(Western Blotting)检测脑线粒体功能相关解偶联蛋白（UCP）-1、UCP-2的表达水平变化。结果:芪参颗粒及其主要药效成分可提升细胞线粒体有氧呼吸水平,改善缺血性中风大鼠脑线粒体呼吸功能;与模型组比较,芪参颗粒观察组的脑组织中UCP-1、UCP-2表达明显下降(P<0.01)。结论:芪参颗粒能够显著提高缺氧后神经细胞线粒体能量代谢水平,降低缺血性脑卒中大鼠脑线粒体呼吸功能损伤,其调节作用可能与UCP密切相关。