循环内皮干细胞与症状性颅内动脉狭窄关系研究

目的研究外周血内皮干细胞（cEPC）数量与颅内动脉狭窄出现及严重度的关系。方法本研究包括了36名颅内动脉狭窄患者（病例组）,40名无脑动脉狭窄卒中患者（病例对照组）和36名健康志愿者（健康对照组）。外周血内皮干细胞基于CD34、CD133和KDR抗原的表达,应用流式细胞仪确定为CD34（＋）CD133（＋）KDR（＋）细胞。结果颅内大动脉狭窄患者外周血内皮干细胞数量显著高于卒中无狭窄患者（P〈0.01）和健康志愿者（P〈0.01）,而卒中无狭窄患者和健康志愿者间内皮干细胞数量差异无统计学差异（P〉0.05）。狭窄率≥70%患者cEPC数量显著高于〈70%患者（0.091±0.035%vs 0.052±0.012%,P〈0.01）。单支狭窄、多支狭窄两组间比较,cEPC数量无显著差异（P〉0.05）。三组中,内皮干细胞数量与纤维蛋白原浓度均无相关性。结论内皮干细胞数量异常增加可能在颅内动脉狭窄发生发展中发挥重要作用。     

单克隆和不同接种密度人永生化骨髓基质细胞体内外分化差异性的研究

目的 研究单克隆和接种密度对永生化骨髓基质干细胞(hMSC-TERT)体内、外分化潜能的影响,寻找合理的体外培养模式.方法 从亲代hMSC-TERT中,建立了30个单克隆细胞系,并以不同的接种密度建立了2个独立的细胞系.对各细胞系在体外向脂肪、骨、神经样细胞方向诱导分化,用免疫组化的方法测定细胞在SCID鼠体内的多向分化潜能.结果 高接种密度细胞比单克隆和低接种密度细胞拥有更多的体外分化潜能,更好的保持了基质细胞特性.各单克隆细胞体内分化能力存在差异,甚至可以具有亲代细胞没有的分化能力.结论 以高接种密度的方式培养多克隆原代细胞,能够保持细胞的原有特性.移植前,筛选特定的单克隆细胞,进行特定用途的移植.     

Caspase-3和DFF45在复发性结直肠癌中表达的意义

目的探讨Caspase-3和DFF45检测在复发性结直肠癌中判断预后和远处转移中的应用价值。方法采用western blot方法测定41例复发性结直肠癌组织中Caspase-3和DFF45的表达情况。结果 Caspase-3和DFF45的表达与再手术后的患者生存期有关。在患者生存期不到1 a的复发性结直肠癌组织中,Caspase-3和DFF45的表达均很低,而1～3 a和3 a以上的表达水平明显增高,以3 a以上组的表达最高。另外两者的表达与远处转移也有关,伴有远处转移者表达低,而仅局部复发者表达高。Caspase-3的表达与DFF45呈显著的正相关性。结论 Caspase-3和DFF45蛋白的表达可作为判断复发性结直肠癌预后和远处转移的指标,为术后的随访和放化疗方案的制定提供参考依据。     

腺病毒介导的p16基因对TJ899细胞系活性的影响

目的研究五型腺病毒载体(Ad5)携带p16基因对恶性脑胶质瘤细胞系TJ899生长状态的影响.方法免疫组化(SP法)测定p16蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和克隆形成实验测定恶性脑胶质瘤细胞系生长状态.结果重组体腺病毒能介导p16外源基因在恶性脑胶质瘤细胞系TJ899细胞中阳性表达,6 d时肿瘤细胞生长抑制率为93%,并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力.结论腺病毒介导p16基因能在肿瘤细胞中表达,并能明显抑制肿瘤细胞生长的状态.     

重组腺病毒携带外源p16基因抑制人脑恶性胶质瘤细胞系生长的研究

目的研究5型腺病毒载体(Ad5)携带外源p16基因对人脑恶性胶质瘤细胞系TJ899和TJ905生长状态的影响.方法免疫组化(S-P法)测定P16蛋白表达,甲基噻唑基四唑(MTT)法和克隆形成实验测定恶性脑胶质瘤细胞系生长状态.结果重组体腺病毒能介导p16外源基因在恶性脑胶质瘤细胞系TJ899和TJ905细胞中呈阳性表达,6 d时肿瘤细胞生长抑制率分别可达93.60%和98.28%.并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力.结论腺病毒介导p16基因能在肿瘤细胞中表达,并能明显抑制不同人脑恶性胶质瘤细胞系的生长状态.     

血清肿瘤标志物联合检测对早期肝癌诊断的临床价值

目的研究血清肿瘤标志物高尔基体蛋白(GP73)、甲胎蛋白异质体3(AFPL3)和铁蛋白(SF)检测对早期原发性肝癌诊断的临床价值。方法选取2015年3月至2016年10月唐山市南堡开发区医院收治的经病理诊断为原发性肝癌患者108例为肝癌组,按照病理分期分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期。另选同期诊断为肝硬化的患者120例和肝炎患者102例分别作为肝硬化组和肝炎组,检测3组患者血清中GP73、AFPL3和SF水平,并分析其与观察组病理分期的关系。结果通过检测相关指标,肝癌组GP73、AFPL3和SF水平较肝硬化组和肝炎组均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。比较不同分期肝癌组患者3项指标水平,Ⅱ期的AFPL3和SF水平较Ⅰ期明显升高,且差异具有统计学意义(P0.05);但GP73水平差异无统计学意义(P0.05);Ⅲ期的GP73、AFPL3和SF的水平均较早期显著升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。3项指标单独检测Ⅰ和Ⅱ期肝癌的阳性率均低于70.00%,联合检测后,各期检测的阳性率均有所提高,对Ⅱ期患者检测的阳性率达到89.29%。结论联合检测可以有效地弥补3种血清标志物单独检测诊断原发性肝癌的局限性,提高诊断的阳性率,对原发性肝癌的早期诊断具有应用价值。     

糖尿病视网膜病变患者血清瘦素和脂联素的变化

目的 探讨糖尿病视网膜病变患者血清瘦素和脂联素水平的变化及其临床意义.方法 收集2012年11月至2013年11月在河北联合大学附属医院内分泌科就诊的2型糖尿病患者121例,其中糖尿病无视网膜病变41例,非增殖性视网膜病变40例,增殖性视网膜病变40例,另设健康体检者40名为对照组.采用ELISA法测定各组研究对象血清瘦素和脂联素.结果 实验组血清瘦素为(15.25±4.70) μg/L,较对照组[(6.15±1.70) g/L]增高,脂联素为(7.39±1.92) mg/L,较对照组[(11.10±1.46) mg/L]降低,差异均有统计学意义(t值分别为-11.696、11.216,P均＜0.01).无视网膜病变组、非增殖性视网膜病变组和增殖性视网膜病变组血清瘦素分别为(10.91±1.21)、(15.22±3.75)、(20.50±3.70)μg/L;脂联素分别为(9.61±1.35)、(7.11±1.18)、(5.34±1.36) mg/L,各组间比较差异均有统计学意义(F值分别为149.542、291.550,P均＜0.05).血清瘦素水平与血清脂联素水平呈负相关(r=-0.662,P.＜0.01).结论 血清瘦素和脂联素水平变化与糖尿病视网膜病变病变程度有关,二者可能成为糖尿病视网膜病变预测和疗效评估的重要指标.     

单克隆永生化人骨髓基质干细胞分化能力和VEGF分泌量的相关性

目的 观测单克隆人永牛化骨髓基质干细胞(hMSC-TERT)体内外分化潜能和自分泌血管内皮细胞牛长因子(VEGF)的相关性.方法 梯度稀释法建立单克隆hMSC-TERT,ELISA方法测定细胞培养液中VEGF含量.将各单克隆细胞进行脂肪、骨和神经样细胞体外诱导,检测多向分化能力.接种联合免疫缺陷性鼠(SCID),免疫组化法检测细胞体内分化率.将各单克隆细胞上清液中VEGF的含量变化值与其上皮细胞分化率进行单变量方差分析.结果 各hMSC-TERT细胞的体内、外分化能力存在筹异.细胞上清液中,第5天VEGF浓度较第3天明显减少.各细胞上清液中VEGF浓度的减少幅度差异有统计学意义(hMSC-TERT2,22 ±0.33;hMSC-TERT20,7.68±0.25;hMSC-TERT-C2,103±35.67;hMSC-TERT-C3,140±34.17;hMSC-TERT-C6,115±28.75;hMSC-TERT-C13,-21±11;hMSC-TERT-C19,181±52.92;hMSC-TERT-C20,101±27.08;hMSC-TERT-C21,-29±10.5;hMSC-TERT-C29,46±25.42),减少幅度与细胞体内分化时角蛋白的阳性率呈正相关.结论 单克隆hMSC-TERT上清液中VEGF变化幅度与细胞体上皮分化能力呈正相关.为选用特定的单克隆hMSC-TERT细胞进行临床和实验研究做了有益的探讨.

Abstract：

Objective To investigate the multi-differentiation potential and VEGF secretory volume of monoclonal immortalized human mesenchymal stem cells(hMSC-TERT)and to determine the relationship between them.Methods Monoelonal hMSC-TERT were isolated using limiting dilution.The growth curves of them were detected by method of MTT.ELISA was used to detect the concentration of VEGF in the supernatant of those mnoclonal hMSC-TERT.Their adipocytic,osteogenic,neuronal differentiation potential in vitro were determined by Oil Red O staining,Van Kossa staining and immuocytochemistry for Tubulin-βⅢ antibody.Those Monoclonal hMSC-TERT were transplanted into the subcutaneously of severe combined immunodeficiency(SCID) mices.The grafts of those cells were removed and analyzed by immunohistochemistry for pathologic tissue markers to discover the multi-differentiation potential of those mnoclonal hMSC-TERT in vivo.Results There was statistically significant difieFence between different mnoelonal hMSC-TERT in multidifferentiation potential and the decreased concentration of VEGF in the supernatant of those mnoconal hMSC-TERT from the 3 rd day to the 5th day.The positive rates of CK in grafts formed by those monoelonal hMSC-TERT in SCID mices were direct correlation with the decreased concentration of VEGF in the supernatant of those cells.Conclusion The secretory capability of VEGF of those monoclonal hMSC-TERT may direct correlation with the epithelial differentiation potential of those cells.     

外源P16基因对人类恶性脑胶质瘤细胞系活性的影响

①目的探讨5型腺病毒载体（Ad5）携带P16基因对恶性脑胶质瘤细胞系T／905生长状态的影响。②方法免疲组织化学法测定P16蛋白表达；甲基噻唑基四唑法测定恶性脑腱质瘤细胞系生长状态及感染病毒细胞克隆形成数的测定。③结果重组体腺病毒能介导P16外源基因在恶性脑肢质瘤细胞系TJ905细胞中阳性表达，6天时肿瘤经胞生长抑制率为98％，并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力。④结论腺病毒介导P16基因能在肿瘤细胞中表达，并能明显抑制肿瘤细胞生长的状态。     

携带p16基因重组腺病毒的构建

目的 构建携带p16基因的重组腺病毒并对目的基因的表达进行研究。方法 lipofectamine介导质粒共转染293细胞构建重组腺病毒，病毒DNA提取及电泳，免疫组化检测p16蛋白表达。结果 构建的携带目的基因的重组体腺病毒，经扩增，纯化后，病毒滴度均达到了10^10 pfu/ml 以上。用Ad-LacZ为代表进行重组体腺病毒转导效率的检测，发现当MOI为625以上的感染强度时，就可使100％的体外培养的肿瘤细胞被转导。重组体腺病毒能介导p16外源基因在脑胶质瘤细胞系TJ899和TJ905细胞中表达。结论 腺病毒载体能携带p16基因在转导细胞中表达，并有很高的转导效率。