中药Q0409筛选方改善SAM-P/8小鼠的学习记忆能力

目的:研究中药Q0409筛选方是否能够改善SAM-P/8小鼠的学习记忆能力及其初步机制。方法:4月龄SAM-P/8小鼠、SAM-R/1小鼠和昆明小鼠共91只,分别标记雌雄,根据动物在Morris水迷宫实验找到平台潜伏期的长短,按随机区组法分成5组,即正常对照组、SAM-R/1对照组、疾病模型组、中药Q0409筛选方治疗组和阳性药物(石杉碱甲)组,采用不同的药物或蒸馏水连续灌胃60 d(即从4月龄到6月龄)。第61~65天,先灌胃相应剂量药物或双蒸水,1 h后进行Morris水迷宫实验,观测行为学指标。在第65天,进行水迷宫测试结束后立即处死小鼠,取出脑海马组织,将其一半置玻璃匀浆器中加入预冷生理盐水制成10%(g/m L)匀浆,用于测定脑海马组织匀浆中乙酰胆碱酯酶(ACh E)的活性;将另一半海马组织用4%多聚甲醛固定,然后进行石蜡包埋及切片,进行免疫组化染色以观察β-淀粉样蛋白(Aβ)的表达情况。结果:与疾病模型组相比,中药Q0409治疗组小鼠Morris水迷宫实验中定位航行和空间探索实验的结果显著改善(P0.05),海马组织匀浆ACh E活性显著降低(P0.05);但上述指标与正常对照组和阳性药物组相比差异无统计学显著性。免疫组化观察结果显示,中药Q0409筛选方治疗组雄鼠未见典型的"老年斑",雌鼠可见"老年斑"颜色变浅,两者的海马CA1区Aβ蛋白沉积的阳性面积减少;这些结果与阳性药物组相似。结论:中药Q0409筛选方可有效改善SAM-P/8小鼠的学习和记忆能力,其机制可能与其抑制海马区ACh E活性并减少Aβ蛋白的沉积等有关,其效果与石杉碱甲相似。     

远志皂苷元对H2O2诱导的大鼠海马神经元损伤的影响及其机制

目的: 观察远志皂苷元(senegenin, Sen)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SD大鼠海马神经元损伤的影响并探讨其作用机制。方法: SD大鼠海马神经元培养至第6 d,随机分为正常组、H₂O₂组、Sen+ H₂O₂ 组和Sen组,药物干预后检测细胞存活率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用 Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化,荧光定量PCR(real-time PCR)检测神经元凋亡相关基因 bcl-2和bax 的表达,进一步采用Western blotting观察Bcl-2和Bax蛋白表达,酶荧光活性检测试剂盒测定caspase-3的活性改变。结果: 与正常组相比,H₂O₂组细胞存活率降低。与H₂O₂组相比,20 μmol/L Sen+ H₂O₂ 组细胞存活率升高,SOD活性升高,MDA含量下降,并且远志皂苷元能够上调bcl-2 mRNA表达、下调bax mRNA表达,降低caspase-3活性,Western blotting结果进一步表明Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达下降,各指标均有显著差异(P<0.05)。结论: 远志皂苷元对H₂O₂处理的海马神经元有一定保护作用,其机制可能与远志皂苷元增强海马神经元抗氧化能力、调节细胞凋亡相关蛋白从而抑制凋亡有关。     

人参皂苷Rg1抑制叔丁基过氧化氢诱导的原代大鼠皮层神经元损伤

 目的：观察人参皂苷Rg1对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的原代大鼠皮层神经元损伤的改善作用,并探讨其可能机制。方法：将神经元随机分为正常对照组、10 μmol/L t-BHP组及10 μmol/L t-BHP+10 μmol/L人参皂苷Rg1组,培养24 h。采用MTT检测不同浓度t-BHP处理的神经元活性,神经元三维重建研究神经元平均总纤维长度及总突起数量,免疫荧光检测caspase-3表达水平及免疫印迹方法检测Bcl-2、caspase-3以及磷酸化糖原合成酶激酶3β (pGSK-3β)蛋白表达水平。结果：10 μmol/L人参皂苷Rg1能够对抗10 μmol/L t-BHP引起的原代大鼠皮层神经元活性水平的降低,并且上调Bcl-2及pGSK-3β蛋白表达量,降低caspase-3活化为cleaved caspase-3的水平(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过提高GSK-3β自身磷酸化从而增强神经元的抗t-BHP损伤能力。     

α_2-肾上腺素能受体激动剂B-TH933抑制LPS处理的心肌细胞释放TNF-α

目的:观察α2-肾上腺素能受体激动剂B-HT933对脂多糖(LPS)刺激的心肌细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,并初步分析其作用机制。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。利用免疫荧光染色观察心肌α2A-肾上腺素能受体的分布;B-HT933和/或LPS处理心肌细胞一定时间后,用ELISA方法检测细胞培养液中TNF-α的含量、实时荧光定量PCR测定心肌细胞TLR4和TNF-αmRNA的表达、Western blot分析心肌细胞中相关信号分子的磷酸化水平。结果:免疫荧光染色证实乳鼠心肌细胞中存在α2A-肾上腺素能受体。LPS以剂量和时间依赖的方式刺激心肌细胞产生TNF-α,0.1μmol/L的B-HT933处理能显著抑制LPS诱导的TNF-αmRNA的表达和TNF-α蛋白的产生。而且,BHT能抑制LPS诱导的心肌细胞IκBα的磷酸化。结论:乳鼠心肌细胞上存在α2A-肾上腺素能受体,其激动剂B-HT933可能通过抑制心肌细胞IκBα的磷酸化来减少LPS诱导的TNF-α产生。     

四毒清降低内毒素血症小鼠死亡率的剂量效应关系与机制研究

目的观察不同剂量的中药四毒清对内毒素血症小鼠死亡率的影响并探讨其作用机制.方法腹腔注射脂多糖(LPS,30 mg/kg)复制小鼠内毒素血症模型,分别灌胃给予不同剂量的四毒清,观察各组小鼠的死亡率,并用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-10含量.结果不同剂量的四毒清均能降低内毒素血症小鼠的死亡率,最佳剂量为1000g/L.四毒清不但能降低内毒素血症小鼠血浆TNF-α的含量,而且同时升高血浆IL-10的含量.结论中药四毒清能以剂量依赖的方式降低内毒素血症小鼠的死亡率.降低内毒素血症小鼠血浆TNF-α含量同时升高血浆IL-10含量可能是其发挥疗效的机制之一.     

性别对小鼠高脂血症动物模型的影响

目的观察性别对建立小鼠高脂血症动物模型的影响。方法健康成年昆明种小鼠40只,雌雄各半,随机分4组:雄性对照组、雌性对照组、雄性高脂组、雌性高脂组,按各组要求分别给予正常饲料和高脂饲料喂养。连续2周,取血测定实验小鼠血中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量。结果雌性对照组血脂四项指标与雄性对照组差异不显著,高脂饮食使小鼠血中TC、LDL水平明显增高(P0.05),雌雄组之间差异不显著。结论性别对实验小鼠高脂血症模型的建立及效果无明显影响。     

Effect of Kangshuai Yizhi Formula I (抗衰益智方 I) on learning and memory dysfunction induced by scopolamine in mice

Objective：To evaluate the improvement of Kangshuai Yizhi FormulaⅠ（抗衰益智方Ⅰ,KYFⅠ）on the learning and memory dysfunction in mice,and on the mechanism of the hippocampal cholinergic system and the nervous system of monoamine which are closely related to learning and memory function.Methods：Mice in the low-,middle-,and high-dose KYFⅠgroups were given low-,middle-,and high-dose KYF,respectively, by gastrogavage for 35 successive days.Animals in the control group and the model group were treated with distilled water.The acute learning and memory dysfunction model was established by injection of scopolamine from day 31,and Morris water maze was used to assess the behavior performance of scopolamine-induced model mice for five days.The activities of acetylcholinesterase（AChE）,choline acetyl transferase（ChaT） and the content of monoamine neurotransmitters in hippocampus were measured.The activity of monoamine oxidase（MAO）in hippocampus and serum was also detected.Results：（1）Compared with the control group,the mean escape latency was shortened,and the frequency across the platform and the staying time at the platform area on the 5th day were decreased in the model group by Morris water maze test.The activities of AChE and MAO were increased,and the ChaT activity and monoamine neurotransmitter content were decreased as well.（2） The escape latency for 4 days in the low-,middle-,and high-dose KYFⅠgroups was significantly shortened than that in the model group,with the shortest latency in the high-dose KYFⅠgroup（P〈0.05,P〈0.01）.The frequency across the platform was significantly increased and the staying time at the platform was significantly prolonged in the middle-and high-dose KYFⅠgroups（P〈0.05,P〈0.01）.（3）As compared with the model group,the activity of ChaT and the content of monoamine neurotransmitters in the hippocampus were significantly increased, and the activities of AchE and MAO were significantly decreased in the hippocampus in the high-dose KYFⅠgroup（P〈0.01）.Conclusions：High-dose KYFⅠcan significantly improve the learning and memory dysfunction induced by scopolamine in mice.Its mechanism may be related to improving the central cholinergic system and regulating the hippocampal monoamine neurotransmitters.     

小檗碱预防脂多糖性肝损伤的机制研究

目的： 观察小檗碱对脂多糖性肝损伤的防治效果及其作用机制。 方法： 将雄性昆明小鼠随机分成4组：① 对照组：用蒸馏水灌胃（0.01 mL/g），每天1次，共5 d，第5 d灌胃后1 h，腹腔注射生理盐水（0.02 mL/g）；②小檗碱组：用5 g/L中性硫酸小檗碱灌胃（0.01 mL/g），每天1次，共5 d，第5 d灌胃后1 h，腹腔注射生理盐水（0.02 mL/g）； ③ 脂多糖（LPS）组：除腹腔注射LPS（0.02 mL/g，28 mg/kg）外，其余处理同①；④小檗碱防治组：除腹腔注射LPS（0.02 mL/g，28 mg/kg）外，其余处理同②。腹腔注射后2 h和10 h去眼球取血，分别检测各组小鼠血清中TNF-α的含量以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性；另于腹腔注射后24 h取肝组织标本，观察各组小鼠肝脏的组织学和超微结构的变化,同时测定肝组织MDA的含量及SOD的活性。 结果： LPS组小鼠血清ALT、AST活性明显高于对照组（P＜0.01），而小檗碱防治组小鼠血清ALT和AST活性明显低于LPS组（P＜0.05）。腹腔注射LPS后2 h，LPS组小鼠血清中TNF-α含量明显高于小檗碱防治组。组织学检查发现，LPS组小鼠肝细胞水肿、变性、坏死，肝窦充血；电镜下可见，肝细胞核溶解、部分核膜不完整，线粒体肿胀、嵴消失。小檗碱防治组小鼠肝脏的病理变化明显轻于LPS组。此外，LPS组肝脏组织中MDA的含量明显高于对照组（P＜0.01），而小檗碱防治组肝脏组织中MDA的含量低于LPS组（P＜0.05），但小檗碱防治组肝组织中SOD活性与LPS组比较无显著差异。 结论： 小檗碱可以减轻LPS引起的肝脏损伤，其作用机制可能与其抑制LPS诱导的TNF-α释放，减少肝组织脂质过氧化和保护肝细胞线粒体有关。     

甘氨酸对缺氧/复氧离体大鼠心脏功能的作用

目的：观察甘氨酸(glycine, GLY)对缺氧/复氧离体心脏功能的影响，探讨甘氨酸对心肌缺血-再灌注 (ischemia/reperfusion, I/R)损伤的防治作用及其机制。方法：利用Langendorff灌流装置复制心肌缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)模型，观察不同浓度GLY处理后心脏左室收缩压（left ventricular systolic pressure, LVSP）、左室舒张末压（left ventricular end diastolic pressure, LVEDP）、左室发展压 (left ventricular developed pressure, LVDP=LVSP-LVEDP)、左室收缩压最大上升/下降速率(the maximum rising and dropping rates of left ventricular pressure, dp/dtmax and dp/dtmin)，并在相应的时点分别测定冠脉流出液中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)的水平。结果：H/R后各时点大鼠心功能各指标均低于缺氧前；GLY处理组复氧后心功能各指标均高于H/R组，并拮抗损伤导致的SOD减少和MDA升高。结论：一定浓度的GLY能显著改善缺氧/复氧心肌的舒缩功能，其机制可能与其提高SOD活性抑制脂质过氧化反应有关。